皮肤性病常用实验诊断技术

http://www.yishengquan.cn/bbs/?fromuid=21058 第四章 皮肤性病常用实验诊断技术 第一节 组织病理检查与皮肤的组织病理 一、组织病理检查 【适应证】 ①皮肤肿瘤、癌前病变、病毒性皮肤并、角化性皮肤并、某些红斑性皮肤 病等有高度诊断价值者。②大疱性皮肤并、肉芽肿性皮肤并、代谢性皮肤并、结缔组织病等 有诊断价值者。③某些深部真菌病等可找到病原体的皮肤病 【皮损的选择】 ①多选择未经治疗的、成熟的皮损，同时切取一部分皮损周围正常皮 肤作比较。 ②环状损害取活动性边缘部分；浸润性损害如肿瘤、结节并麻风等，取材组织块要够深 够大；皮肌炎取材要带肌肉。③水疱、脓疱及含有病原体的损害应选择早期皮损，并切取完 整的水疱和脓疱。 ④尽可能取原发性皮损。尽量避免采取腹股沟、腋窝、关节部位及面部的皮肤组织。 【取材方法】 ①手术取材法：适用于一般皮损及较深大的皮损。用手术刀沿皮纹方向 作长 1cm和宽 0.3cm～0.5cm的梭形切口，刀锋沿皮面垂直，切取标本应包括皮下组织，底 部与表面宽度一致，切忌钳夹所取组织，以免造成人为的组织改变。②钻孔取材法：适用于 较小的易脆的皮损或手术取材有困难的皮损。术者左手固定皮损区，右手持适当规格的皮肤 组织钻孔器，边用力边旋转，达到适当深度时，用有齿镊小心提起组织，用剪刀在基底剪下 。 较小创面行压迫止血，加压包扎，较大创面或颜面部应缝合切口。 【标本处理】 ①固定：切下的组织应立即放人95％乙醇或 10％甲醛液的小瓶中固定， 如需做免疫病理，应立即将组织4℃保存。②固定后标本脱水、包埋、切片。③染色：一般 常用 HE染色法。特殊染色有 PAS染色法、吉姆萨染色法等。 二、皮肤的组织病理 正常皮肤组织切片见。 (一)表皮的组织病理变化 1.角化过度(hyperkeratosis)指角质层过度增厚。如系角质形成过多所造成，则其颗 粒层、棘层亦相应增厚，如扁平苔藓。如系角质贮留堆积所致，则其下方的颗粒层与棘层并 不随之增厚，如寻常型鱼鳞病 2.角质栓(keratinous plug)指在扩大的毛囊或汗管开口处角质显著增多，形成栓塞， 如盘状红斑狼疮。 3.角化不全(parakeratosis)指角质层内有细胞核残留，由角化过程不完全所引起，如 银屑病。 4.角化不良(dyskeratosis)指棘层及颗粒层个别或小群角质形成细胞提前异常角化。 表现为胞核浓缩深染，胞浆红染，棘突消失。可分良性和恶性两型，良性角化不良如毛囊角 化病；恶性角化不良如鳞状细胞癌。 5.颗粒层增厚(hypergranulosis)指颗粒层的厚度增加，胞浆内透明角质颗粒粗大色 深。见于有角化过度的疾病，如扁平苔藓、寻常疣。 6.棘层肥厚(acanthosis)指表皮棘细胞层增厚，常伴有表皮突的延伸或增宽，如银屑 病及慢性湿疹。但在个别情况下，如尖锐湿疣等其棘层细胞数目并不增多，而是由于细胞体 积增大所致。 7.乳头瘤样增生(papiUomatosis)指真皮乳头不规则的向上增生，使表皮呈不规则波浪 状起伏，伴表皮轻度增厚，如寻常疣。 8.疣状增生(verrucous hyperplasia)指表皮角化过度、颗粒层增厚、棘层肥厚和乳头 瘤样增生四种病理同时存在，表皮宛如山峰林立，如寻常疣。 9.表皮萎缩(epidermal atrophy)指棘层细胞减少，表皮变薄，表皮突不明显，甚至消 失，表皮呈扁平带状，如红斑狼疮。 10.表皮水肿(epidermal edema)分为表皮细胞内水肿及细胞间水肿，两者往往不同程 度的合并存在。①细胞内水肿(intracellular edema)指棘层细胞内发生水肿，细胞体积增 大，胞浆淡染，较陈旧者核常固缩并偏于一侧，似鹰眼状。严重时呈网状变性，如湿疹。② 细胞间水肿(intercellular edema)指细胞间隙增宽，细胞间桥拉长而清晰可见，因此甚似 海绵，故又名海绵形成(spongiosis)，如湿疹。 11.基底细胞液化变性(1iquefaction degeneration of basal cell)指基底细胞细胞 空泡化或破碎，使原来基底细胞的栅状排列发生紊乱，重者甚至基底层消失，使棘细胞直接 与真皮接触，如红斑狼疮。 12.微脓肿(microabscess)指表皮或表皮附属器内有中性粒细胞或淋巴细胞聚集的小 团块。 Kogoj 海绵状微脓肿在颗粒层或棘层上部海绵形成的基础上有中性粒细胞聚集，如 脓疱型银屑病 Munro微脓肿内含有中性粒细胞，通常见于角质层，如银屑病 Pautrier微脓 肿主要发生于棘层，也可见于表皮下部、表皮真皮交界处及外毛根鞘，如蕈样肉芽肿，其中 为淋巴细胞。 13.棘层松解(acantholysm)指表皮细胞间失去粘连而呈松解状态，出现表皮内裂隙或 水疱，如天疱疮。 14.色素增多(hyperpigmentation)指表皮基底层及真皮上部黑素颗粒增多，如固定性 药疹。 15.色素减少(hypopigmentation)指表皮基底层内黑素减少或消失，如白癜风。 16.色素失禁(incontinence of pigment)指基底细胞及黑素细胞损伤后，黑素从这些细 胞中脱落到真皮上部，或被吞噬细胞吞噬，或游离在组织间隙中，如扁平苔藓。 (二)真皮的组织病理变化 1.纤维蛋白样变性(fibrinoid degeneration)指纤维蛋白样物质渗入胶原内，使受累 部位呈现明亮的嗜伊红性均质外观，如变应性血管炎。 2.粘液变性(mucinous degeneration)指胶原纤维基质中粘多糖增多，胶原纤维束间的 粘液物质沉积而使间隙增宽。在 HE染色时呈浅蓝色，如胫前粘液水肿。 3.弹力纤维变性(degeneration of elastic fiber)指弹力纤维断裂、破碎、聚集成团 或粗细不匀呈卷曲状，需弹力纤维染色证实，如弹力纤维假黄瘤。 4.肉芽肿(granuloma)指炎症局部形成以巨噬细胞增生为主的境界清楚的结节状病灶。 除含有淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞外，还有上皮细胞或多核巨细胞，或两者均有，如结 核、麻风、梅毒和各种深部真菌病等。 (三)皮下组织的病理变化 1.增生性萎缩(proliferation atrophy) 指皮下组织由于炎症细胞的浸润而使脂肪 组织及细胞发生变性、萎缩甚至消失，结果脂肪组织被浸润细胞或纤维化的组织所代替，以 致皮下组织的体积未见减少，有时反而增加，如结节性红斑。 2.脂膜炎(panniculitis) 指由于炎症反应而引起皮下脂肪组织不同程度的炎症浸 润、水肿、液化或变性坏死，其中可见较多的泡沫细胞，如狼疮性脂膜炎。 第二节 免疫病理检查与皮肤的免疫病理 一、免疫病理检查 (一)适应证天疱疮、类天疱疮、红斑狼疮、皮肌炎、皮肤血管炎等免疫性皮肤病 (二)标本的选择及取材与皮肤组织病理检查基本相同。 (三)标本处理 ①将需要的皮肤标本用手术或钻孔取下后，立即用 OCT(optimal cuttingtemperature)复合物包埋剂包埋固定或将标本用湿润的生理盐水纱布包裹，4℃下保 存，24 小时内用OCT 复合物包埋剂包埋。②OCT复合物包埋剂包埋的标本，经速冻后在-22 ℃～-25℃条件下将组织切成厚度为 4～6μm的薄片，置于玻片上。 (四)直接免疫荧光法(Direct Immunofiuorescence，DIF)将冷冻切片用 0.01mol／L、 pH7.4 的 PBS 清洗 10 分钟，晾干后滴加适当稀释的荧光标记的抗人免疫球蛋白抗体，在37~C 湿盒中孵育 30～60分钟，再用 0.01mol／L、pH7.4的 PBS洗涤 3次后晾干，用碳酸甘油缓 冲液封片，置于荧光显微镜下观察。 (五)间接免疫荧光法(Indirect Immunofluorescence，IIF)标本来自正常人皮肤或动物 组织(如鼠肝印片)；首先将灭活的适当稀释的患者血清滴于标本上，置于 37℃湿盒中30～ 60 分钟，再用0.01mol／L、pH7.4 的 PBS 洗涤 3 次，晾干，后续步骤同直接法。 (六)盐裂皮肤免疫荧光法(Salt-split Skin lmmunofiuorescence)取患者的皮损或正 常人皮肤标本，置于 1mol／L的 NaCl溶液中，放在 4℃冰箱中用磁力搅拌器低速搅动，每 24 小时换液一次，经过72 小时左右，表皮与真皮分离，OCT包埋进行 DIF或 IIF检查。 二、皮肤的免疫病理 (一)直接免疫荧光检查病变组织和细胞中免疫球蛋白或补体的出现及分布，用于诊断、 鉴别或辅助诊断免疫性皮肤病 1.棘细胞间：天疱疮皮损棘细胞间 IgG、IgA、IgM或 C3沉积，呈网状。 2.皮肤基底膜带：①红斑狼疮：基底膜带 90％以上出现 IgG、C3沉积，呈颗粒状，这 一现象的检查称狼疮带试验(Lupus Band Test，LBT)。如采用患者暴光部位的正常皮肤检查 ， SLE 的 LBT 阳性率达80％以上，而盘状红斑狼疮(DLE)阴性。②类天疱疮：基底膜带 90％以 上 IgG、C3 沉积，呈线状；IgG沉积于盐裂皮肤表皮侧。③线性IgA 大疱病：IgA 线状沉积 于基底膜带。④获得性大疱性表皮松解症(EBA)：IgG 沉积于盐裂皮肤真皮侧。 3.血管壁：多种皮肤血管炎的皮肤血管壁有IgM、C3 沉积，皮肌炎的病变肌肉间质血管 壁有 IgM、C3沉积。 (二)间接免疫荧光检查血清中自身抗体的性质、类型和滴度，用于诊断、鉴别或辅助诊 断免疫性皮肤病，观察病情变化和药物疗效。 1.定性①血清中自身抗体结合基底膜带，表示存在皮肤基底膜带抗体。IgG 型基底膜带 抗体结合盐裂皮肤表皮侧为类天疱疮，结合真皮侧为获得性大疱性表皮松解症；②血清中自 身抗体结合表皮棘细胞间，表示存在天疱疮抗体，见于各型天疱疮等；③血清中自身抗体结 合小鼠肝细胞核，表示存在抗核抗体，见于 SLE或硬皮病等。 2.定量将阳性血清作倍比稀释，以阳性荧光的最高稀释度为自身抗体的滴度，可用于观 察病情的变化，如天疱疮抗体的滴度与天疱疮病情有关。 3.定型抗核抗体结合小鼠肝细胞或 Hep-2细胞可出现四种核型。①周边型：胞核周围有 较明显的荧光带，为抗 DNA抗体，主要见于 SLE，并提示病情处于较活动期；②均质型：核 染 色均匀一致，为抗组蛋白抗体，可见于各种结缔组织病；③斑点型：胞核有荧光小点均 匀分布，为可溶性核蛋白抗体，主要见于硬皮病，也可见于 SLE；④核仁型：只有核仁荧光 ， 为抗核糖体抗体等，主要见于硬皮病，也可见于 SLE。 第三节 真菌检查 【采集标本】 浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑和痂等，标本在分离前常先用 75 ％的乙醇或 1：1000 的苯扎溴铵作表面处理。深部真菌的标本有痰、尿液、粪便、脓液、口 腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种穿刺液和活检组织，标本的采集应在无菌操作下进行 。 【直接涂片检查】 为最简单而重要的诊断方法。取标本置玻片上，加一滴 10％KOH 溶液，盖上盖玻片，在酒精灯上微微加热，待标本溶解，轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜 检。先在低倍镜下检查有无菌丝或孢子，再用高倍镜证实。主要用于明确真菌感染是否存在 ， 一般不能确定菌种。 【培养检查】 可提高真菌检出率，并能确定菌种。标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培 养基(Sabouraud agar)上，置室温下培养 1—3 周，以鉴定菌种。必要时可行玻片小培养协 助鉴定。菌种鉴定常根据菌落的形态、结构、颜色、边缘、生长速度、繁殖程度、下沉现象 和显微镜下形态等判断。对某些真菌，有时尚需配合其他鉴别培养基和生化反应确定。 第四节 滤过紫外线检查 滤过紫外线检查(Wood 灯)是由高压汞灯作为发射光源，通过由含9％镍氧化物的钡硅酸 滤片发出 320～400nm波长的光波。主要用于诊断色素异常性疾并皮肤感染和卟啉症。 【方法】 在暗室内，将患处置于 Wood灯下直接照射，观察荧光类型。 【临床意义】 本方法既有诊断价值，又能观察疗效。色素减退或脱失性损害如白癜 风、色素沉着、黄褐斑为明亮的蓝白色斑片。细菌如假单胞菌属为绿色荧光；红癣为珊瑚红 色荧光；痤疮丙酸杆菌为黄白色荧光。真菌感染如铁锈色小孢子菌、羊毛状小孢子菌和石膏 样小孢子菌为亮绿色荧光；黄癣菌为暗绿色荧光；花斑癣菌为棕色荧光；紫色毛癣菌和断发 毛癣菌无荧光。皮肤迟发性卟啉症患者尿液为明亮的粉红—橙黄色荧光；先天性卟啉症患者 牙、尿、骨髓出现红色荧光，而红细胞生成性原卟啉症患者可见强红色荧光。局部外用药如 凡士林、水杨酸、碘酊及角蛋白甚至肥皂的残留物等也可有荧光，应注意鉴别。 第五节 斑贴试验 【适应证】 接触性皮炎、职业性皮炎、手部湿疹、化妆品皮炎等。 【方法】 根据受试物的性质配制成适当浓度的浸液、溶液、软膏或原物作为试剂， 置于 4层 1cm×1cm的纱布上，贴于背部或前臂屈侧的健康皮肤，其上用一稍大的透明玻璃 纸覆盖，用橡皮膏固定边缘。同时作多个不同试验物时，每两个之间距离应大于4cm。必须 有阴性对照试验。目前多用市售的 铝制小室斑试器，内装筛选变应原进行斑贴试验。 【结果】 24～48小时后观察结果。受试部位无反应为(-)，皮肤出现痒或轻度发红 为(+)，皮肤出现单纯红斑、瘙痒为(+)，皮肤出现水肿性红斑、丘疹为(++)，皮肤出现显著 红肿、伴丘疹或水疱为(+++)。 【临床意义】阳性反应说明患者对受试物过敏，但应排除原发性刺激或其他因素所致 的假阳性反应，这种反应一旦将受试物除去，很快消失，而真正的阳性反应则除去受试物 24～48 小时内反应一般是增强的而不是减弱。阴性反应则表示患者对试验物无敏感性。 【注意事项】①应注意区分过敏反应及刺激反应。②阴性反应可能与试剂浓度低、斑 试物质与皮肤接触时间太短、全身或局部应用糖皮质激素等有关。③不宜在皮肤病急性发作 期试验。也不可用高浓度的原发性刺激物试验。 第六节 性病检查 一、淋球菌检查 【适应证】 直接涂片检查常用于淋球菌感染的急性期检查，分离培养常用于慢性淋 病患者与无症状感染者的检查。 【方法】 ①用含无菌生理盐水的棉拭子，伸人男性尿道2cm～4cm，轻轻转动取出分 泌物；女性先用无菌的脱脂棉擦去阴道内粘液，用无菌的脱脂棉试子插入宫颈内 1cm～2cm 处旋取出分泌物；患结膜炎的新生儿取结膜分泌物；全身性淋病时可取关节或关节穿刺液； 前列腺炎患者取前列腺液。②标本直接涂片 2张，加热固定后作革兰染色，油镜下检查。③ 标本接种于血琼脂或巧克力琼脂平板上，置于含5％～10％的 CO2，相对湿度为80％以上的 环境中，35℃～37℃孵育 24～48小时后观察结果。挑选可疑菌落作涂片染色镜检。④可用 氧化酶试验或糖发酵试验进一步证实。 【结果】 涂片染色镜检可见大量多形核细胞，细胞内外可找到成双排列、呈肾形的 革兰阴性双球菌。培养菌落在血平皿上可形成圆形、稍凸、湿润、光滑、透明到灰白色的菌 落，直径为 0.5～1.Omm。生化反应符合淋球菌特性。 【临床意义】 直接涂片镜检阳性者可初步诊断，但阴性不能排除诊断，培养阳性可 确诊。 【注意事项】 ①取材时棉拭子伸人尿道或宫颈口内的深度要足够。②男患者最好在 清晨首次排尿或排尿后数小时采集标本进行培养。③涂片时动作轻柔，防止细胞破裂变形， 涂片的厚薄与固定及革兰染色时间要合适。 二、衣原体检查 【直接涂片染色法】 采集标本方法同淋球菌检查。标本涂片，自然干燥，甲醇固定5～ 10 分钟后，用当日配制的吉姆萨溶液染色1 小时，再用95％乙醇淋洗涂片，干燥。油镜下 阳性标本可在上皮细胞质内找到 1个～3 个或更多个呈蓝色、深蓝色或暗紫色的包涵体。 【细胞培养法】 将每份标本接种于 3个培养瓶(为 McCoy单层细胞管)中，置37℃吸 附 2 小时后，用维持液洗涤 2 次～3 次，最后加生长液，37℃培养 3～4 日，取出盖玻片， 经吉姆萨染色或直接荧光染色后镜检，查包涵体。阳性标本碘染色包涵体呈棕黑色，吉姆萨 染色呈红色。 【衣原体抗原检测法】 (clearview chlamydia，简称C-C 快速法)用商品试剂盒检测 ， 方便简单，快速，特异性高。标本采集同淋球菌检查，检测前先将试剂和测试卡等室温下复 温 30分钟。加试剂至塑料管刻度处(约 0.6ml)，将拭子标本浸入管内混匀，置80℃水浴， 10～12 分钟取出，转动拭子并沿管壁挤压，弃去拭子，提取液置室温冷却后盖上管塞。将 测试卡置台面，加入 5滴提取液于检体窗，静置 30分钟后观察结果。质控窗和结果窗均显 示一条蓝带为阳性结果，阴性为结果窗无变化。阳性结果结合临床可确定沙眼衣原体感染， 阴性时不能完全排除，可用细胞培养法确定。 【免疫荧光法】 采集标本同淋球菌检查。将标本涂于玻片凹孔或圆圈中，自然干燥， 丙酮或无水甲醇固定 5分钟，漂洗，再干燥。加 30pl荧光素标记的抗沙眼衣原体单克隆抗 体试剂覆盖凹孔，玻片置湿盒中于室温或 37℃下作用15 分钟，去掉多余试剂，用蒸馏水淋 洗涂片，自然干燥，加一滴封固液，再加盖玻片，置显微镜下检查。阳性标本在高倍镜下可 见上皮细胞内的原体颗粒，为单一、针尖大小明亮的绿色荧光，在油镜下为荧光均匀、边缘 光滑的圆盘样结构，也可见网状体等其他形态的衣原体颗粒。 三、支原体检查 【方法】 采集标本同淋球菌检查，也可用10ml 中段尿离心(2000r／min，10 分钟)， 取沉渣作接种物。将标本接种到液体培养基中置烛缸内，在37℃恒温箱内培养24～72 小时 ， 每日观察颜色变化。 如由黄色变为粉红色，可能有解脲支原体生长。取 0.2ml培养物接种到固体培养基上， 培养 48小时后于低倍镜下观察，有典型“油煎蛋”状菌落者为阳性。 【临床意义】 分离结果阳性，可诊断支原体感染。 四、梅毒螺旋体检查 (一)梅毒螺旋体直接检查 【方法】 可取病灶组织渗出物、淋巴结穿刺液或组织研磨液用暗视野显微镜检查， 也可经镀银染色、吉姆萨染色或墨汁负染色后用普通光学显微镜检查，或用直接免疫荧光技 术检查。 【结果】 梅毒螺旋体菌体细长，两端尖直，在暗视野显微镜下折光性强，沿纵轴旋 转伴轻度前后运动。用镀银染色法螺旋体呈棕黑色，用吉姆萨染色法螺旋体呈桃红色，直接 免疫荧光检查螺旋体呈绿色荧光，其他种类螺旋体不发光。 【临床意义】 镜检阳性者结合临床症状和不洁性接触史可确诊。 (二)非梅毒螺旋体抗原血清试验 1.性病研究实验室试验(venereal disease researchlaboratory test，VDRL) (1)玻 片定性试验：【方法】取灭活(56℃水浴 30 分钟)的血清 0.5ml 加入玻片的圆圈中，用 1ml 注射器装上专用针头加抗原 1滴，置旋转器上振动玻片 4分钟后立即观察结果。【结果】阳 性：液体透明，肉眼可见中等或大的聚合物。弱阳性：液体微混，肉眼可见小的块状物。阴 性：液体混浊，无块状物。 (2)玻片定量试验：将定性试验呈阳性或弱阳性的待检血清用生理盐水作倍比稀释，按 定性试验的方法操作，观察结果，确定效价。一般以呈阳性凝集反应的血清最高稀释倍数作 为其效价。 2.不加热血清反应素试验(unheated serum reagin test，USR)是一种改良的 VDRL试 验，即在 VDRL抗原试剂中加氯化胆碱以灭活血清，加乙二胺四乙酸以防止抗原变性。本试 验敏感性高，操作简便，但特异性差，易出现假阳性。其方法操作及结果同 VDRL试验。 3.快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma reagin test,RPR)是一种改良的 USR 试验，即在USR抗原试剂中加胶体碳，操作简便，其敏感性和特异性同 USR试验。①卡片定 性试验：取 50pl待检血清加入卡片的圆圈内，并涂均匀。用专用滴管针头加入摇匀的抗原 一滴，将卡片旋转8 分钟后立即观察结果。结果阳性：卡片圆圈中出现黑色凝聚颗粒和絮片 。 阴性：无凝聚块出现，仅见均匀的亮灰色。②卡片定量试验：操作方法同 VDRL试验。 (三)梅毒螺旋体抗原血清试验 【方法】 1.荧光螺旋体抗体吸收试验(fluorescent treponemal antibody-absorption test， FTA-ABS)：用间接免疫荧光技术检测患者血清中抗梅毒螺旋体IgG 抗体。此试验的敏感性与 特异性高，应用广泛。 2.梅毒螺旋体血凝试验(treponema pallidum hemagglutination assay，TPHA)：它是 以绵羊红细胞为载体，将从感染家兔睾丸中提取到的梅毒螺旋体纯化，并以超声击碎后作为 抗原，致敏绵羊红细胞加入稀释的待检血清作间接血凝试验，抗体滴度在 1:80以上者为阳 性。本试验敏感性高、快速、简便，易于观察，但特异性不及 FTA-ABS试验。 【临床意义】 非梅毒螺旋体抗原血清试验为筛选试验，其敏感性高而特异性低，可 出现假阳性或假阴性。结果为阳性时，临床表现符合梅毒，可初步诊断。定量试验是观察疗 效，判断复发及再感染的手段。假阴性结果常见于一期梅毒硬下疳出现后的 2～3周内，感 染梅毒立即治疗或晚期梅毒，二期梅毒的“前带现象”。假阳性结果常见于某些结缔组织并、 自身免疫性疾病患者、海洛因成瘾者、少数 孕妇及老人。梅毒螺旋体抗原血清试验为证实 性试验，阳性结果可明确诊断。 五、醋酸白(甲苯胺蓝)试验 【原理】 人类乳头瘤病毒感染的上皮细胞与正常细胞产生的角蛋白不同，能被冰醋 酸致白或被甲苯胺蓝染蓝。 【方法】 1.5％冰醋酸试验：首先用棉签清除局部分泌物后，用棉签蘸5％冰醋酸液 涂在受试损害上及周围正常皮肤粘膜，一般在涂药后 2～5分钟损害变为白色，周围正常组 织不变色为阳性反应。2.1％甲苯胺蓝试验：首先用棉签清除局部分泌物后，用棉签蘸 1％ 甲苯胺蓝溶液涂在受试损害上及周围正常皮肤粘膜上，2 分钟后用脱色剂、蒸馏水各清洗 2～ 3 次，若受试损害仍有蓝色，周围正常组织无着色为阳性，见于尖锐湿疣。 六、毛滴虫检查 【悬滴法】 是最常用最简便的方法，阳性率可达80％～90％。加一滴温生理盐水于 玻片上，在阴道后穹垄子宫颈或阴道壁上试取分泌物混于温生理盐水中，立即在低倍镜下镜 检，如有滴虫时可见其呈波状移动。男性可取尿道分泌物、前列腺液或尿液沉渣检查。 【涂片染色法】 将分泌物涂在玻片上，待自然干燥后用革兰染色或吉姆萨染色等， 镜检可见毛滴虫。 第七节 蠕形螨、疥螨和阴虱检查 一、蠕形螨的检查 【挤刮法】 选取鼻沟、颊部及颧部等皮损区，用刮刀或手挤压，将挤出物置于玻片 上，滴一滴生理盐水，盖上盖玻片并轻轻压平，镜检有无蠕形螨。 【透明胶带法】 将透明胶带贴于上述部位，数小时或过夜后，取下胶带复贴于载玻 片上，镜检可见蠕形螨。 二、疥螨的检查 【方法】 选择指缝或手腕的屈侧等处未经搔抓的丘疱疹、水疱或隧道，用消毒针头挑 出隧道盲端灰白色小点置玻片上，或用蘸上矿物油的消毒手术刀轻刮皮疹 6～7次，取附着 物移至玻片上，滴一滴生理盐水，镜检可见疥螨或虫卵。 三、阴虱的检查 【方法】 用剪刀剪下有阴虱和虫卵的阴毛。用 70％的乙醇或 5％～10％的甲醛溶液 固定后放在玻片上，滴一滴 10％KOH溶液，镜检可见阴虱或虫卵。