高效液相色谱法测定注射用头孢美唑钠中头孢美唑含量

药 物 研 究 The medicine study 中 国 民 族 民 间 医 药 Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy ·45· 高效液相色谱法测定注射用头孢美唑钠中头孢美唑含量 蔡尾玉 黄凯文 广东省佛山市顺德区第一人民医院药剂科，广东 佛山 528300 【摘 要】 目的：建立高效液相色谱法测定头孢美唑钠中头孢美唑的含量。方法：色谱柱为 Kromasil C18柱 (4．6 mm×250 mm， 5 m)，流动相为含0．1％四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾溶液 (取磷酸二氢钾 1．36g，加水溶解并稀释至 1000ml，用磷酸调节 pH值为4．3) 一 乙腈 (70：30)，流速 1ml／min，检测波长214 nm，柱温28℃。结果：头孢美唑钠进样量在 O．o4—1．0 mg／ml时，与蜂面积呈 良好的线 性关系 (r=O．9992)，平均回收率为99．5％，RSD为0．6％ (n=6)。结论：方法操作简便、快速、准确，可用于注射用头孢美唑钠中头孢 美唑的含量测定及有关物质的控制。 【关键词】 高效液相色谱法 ；头孢美唑钠 ；光电二极管阵列检测器 【中图分类号】R284．1 【文献标识码】A 【文章编号】1007—8517(2012)04—0045—02 头孢美唑钠 (Cefmetazole)又称先锋美他醇，系第二 代头霉素类半合成抗生素，性能与第二代头孢菌素相近 J。 近年来广泛应用于临床，对革兰阳性菌和阴性菌均具有良 好的抗菌效能。尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MR— sA)脆弱拟杆菌及厌氧菌，对各种 B内酰胺酶也有很强的 耐受性和稳定性，体内分布好、不良反应少 。J。 1 仪器与试剂 Aglent 1100高效液相色谱仪，二极管阵列检测器， G1313A自动进样器，Millipore公司超纯水机，CPA225D分 析天平 (德国Sartorius公司)，乙腈为色谱纯 (色谱纯，美 国TEDIA公司)，水为高纯水 ，其他试剂为分析纯。头孢 美唑钠对照品由福建福抗药业有限公司提供，批号1 10705， 样品 由 哈 药 集 团 制 药 总 厂 提 供 ，批 号 为 20110801， 20110802，20110803。 2 方法与结果 2．1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含 0．1％四丁基 氢氧化铵的磷酸二氢钾溶液 (取磷酸二氢钾1．36g，加水溶 解并稀释至 1000ml，用磷酸调节 pH值为 4．3)一乙腈 (70：30)为流动相；检测波长为 214nm。取头孢美唑钠对 照品适量 ，用水溶解并制成每 1ml中约含 1mg的溶液，取 此溶液在80℃水浴加热1O分钟，冷却，得含头孢美唑内酯 的溶液；取 lml加入头孢美唑钠对照品溶液 2ml，加流动相 稀释至20IIll，取2O l注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢 美唑与头孢美唑内酯的分离度应不小于3．0。理论板数按头 孢美唑峰计算应不低于1500。 2．2 溶液配制 2．2．1 对照品溶液 取头孢美唑钠对照品适量，精密称定，加流动相溶解并 定量稀释制成每 lml中约含头孢美唑0．2mg的溶液，备用。 2．2．2 供试品溶液 取装量差异项下物适量 (约相当于头孢美唑 20mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释 至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2．3 线性关系试验 分别精密取头孢美唑钠对照 品溶液 中 1，4，8，12， 16 进样分析，按色谱条件测定峰面积，以对照品进样量 ( g)为横坐标，峰面积 ( V·s)为纵坐标，进行线性拟 合，得头孢美唑钠线性回归方程为：Y=6．44×10 X一5．83 ×10 (r=0．9992)，表明头孢美唑钠在浓度为 0．04— 1．Omg／ml中线性关系良好。 2．4 精密度试验 精密吸取头孢美唑钠对照品溶液 10 l进样，平行5 次，测定峰面积。头孢美唑钠峰面积 RSD分别为 0．2％ (n=5)表明进样方法和仪器精密度 良好。 袭 1 精密度考察结果 2．5 重现性试验 取20110801批号样品5份，按样品溶液制备方法制备 样品溶液。精密吸取各样品溶液 10 l，进样，测定头孢美 唑钠峰面积，外标法计算含量。头孢美唑含量 RSD为0．2 ％ (n=5)。样品处理方法重现性良好。 表2 重现性试验结果 2．6 加样回收率试验 精密称取已知头孢美唑钠含量的注射用头孢美唑钠样 品6份，每份约20mg，按80％，100％，120％三种浓度分 别加入头孢美唑钠对照品适量，制备样品溶液，进样测定 样品中头孢美唑钠的含量。头孢美唑钠平均加样回收率为 99．5％，RSD为0．6％ (n=6)。 表3 回收率试验结果 (下转第47页) 菊 物 研 究 The medicine study 中 国 民 族 民 间 医 药 Chinese jouma[of ethnomedicine and ethnopharmacy ·47· 60、80、100~g／ml。 1．3 统计方法 数据是以平均数 4-标准差 (X 4-SD)表 示，采用t检验，P<0．05，整个统计资料采用SPSS软件处 理完成。 2 结果 2．1 不同浓度的天麻素对离体蟾蜍心率的影响 表 1表 明，天麻素浓度为 20 g／IIIl时，可使蟾蜍心率增加，但是 不具有统计学意义 (P>0．05)。继续增加天麻素的浓度， 从40~g／ml到100 rnl天麻素可明显降低离体蟾蜍心率， 蟾蜍心率从 106±10．72降至 56±8．78，差异具有显著性 (P<0．05，P<0．O1)。 表 1 不同浓度的天麻素对离体蟾蜍心脏心率的影响 (n=6。 ±SD) AP <0．05 compared with control group： ※ P >0．05 compared with control group AA P<0．O1 compared with control group 表2 不同浓度的天麻素对蟾蜍心脏收缩幅度的影响 (n=6。 ±SD) AP <0．05 compared with control group；# P<0．Ol Gastrodin5 compared with sroup3—4 ※ P>O．05 Gastrodin5 compared with control?? group 、Oastrod— in1 2．2 不同浓度的天麻素对离体蟾蜍心脏收缩幅度的影响 表 2表 明，随天麻素浓度的增加，心脏收缩幅度明显增加，差异具有统计 学意义 (P<0．05)。但当浓度为 100 ／ml时，心脏收缩幅度出现 显著降低，与浓度为 6otis／ml、80~g／ml天麻素相比具有统计学意 义 (P0．05)。 3 讨论 通过离体蟾蜍心脏灌流天麻素实验证实天麻素可降低离体的蟾 蜍心脏心率，观察到天麻素从 40p．g／ml到 lO0~g／ml可明显降低离 体蟾蜍心率，具有剂量依赖性；同时观察到在一定浓度范围内天麻 素明显增加收缩幅度，增强心肌收缩力 ，有显著差异，但是高浓度 天麻素反而降低收缩幅度。有实验报道，天麻素可加快体外培养乳 鼠心脏心搏频率，加强心肌收缩力 ，机制可能与天麻素能促进心肌 细胞能量代谢有关 。本实验也证实天麻素可增加心肌收缩力， 但是降低频率，与报道有所不同，本课题组认为差别可能与天麻素 的作用与种属不同以及方法不同有关 ，但其机制需要进一步研究。 本实验为天麻素对循环系统的作用进行补充，为临床用药提供基础 实验依据。 参考文献 [1]Hao XY，Tan NH ，Zhou J．Anewdi2(p2hydroxybenzy1)hydroxylamine fromGastrodiaelata BI[J]．Chinese Chemical Le2tters(中国化学快报)，1999 ， 10(6)：467． [2]彤宇．天麻素注射液对急性脑梗死的神经保护作用 [J]．天津医药， 2011，39(3)：205—207． [3]王志平，付营，刘蕾，等．天麻素对 CCM诱导小鼠肝损伤的保护作用 [J]．武警医学院学报，2008，17(9)：762—764． [4]周敏，陆永利，郑世玲，等．天麻素抗大鼠离体心肌缺血／再灌注损伤 的作用 [J]．辽宁中医药大学学报 ，2009，11(12)：180—182． [5]郑倩，医学机能实验学 [M]．科学出版社，2009：127—131． [6]林平，潘慧，苏付荣．离体蛙心灌流实实验方法的比较研究 [J]．中 国生理杂志，2005，21(7)：1455—1456． [7]黄秀风，唐红，肖颐等．合成天麻素对心肌细胞中毒性损伤的保护作用 [J]．成都中医学院学报，1990，13(2)：27—28． (收稿日期：2011．12．25) (上接第45页) 2．7 样品含量测定 精密吸取3批样品溶液 1O 进样，平行3次，测定头 孢美唑钠峰面积，外标法计算样品中头孢美唑钠的平均含 量。结果见表4。 裹 4 头孢美唑含量结果 2．8 稳定性试验 取 20110801批号含量测定项下供试品溶液，按 O，1， 2，3，4小时，测定吸收峰面积 ，按外标法计算含量，并计 算RSD。结果见表5。 3 讨论 采用反相高效液相色谱法并在本文色谱条件下测定头 孢美唑钠中头孢美唑的含量及有关物质的控制，样品处理 简单，能有效地分离其他杂质，分离效果好，操作简便快 捷，数据准确可靠，为保证药品质量起了重要的作用，同 时为临床准确用药提供依据。 参考文献 [1]陈新谦，金有豫，汤光，等．新编药物学 [M]．第 16版．北京：人民 卫生出版社，2007：62． [2]黄兆好，谢翠 刁．先锋美他醇的药理与临床应用 [J]．广东药学， 2000，lO(2)：39-40． [3]徐英春，王辉，陈民钧．头孢美唑及其他抗生索的抗菌话性分析 [J]． 中华内科杂志，1997，36(8)：540—542． (收稿日期：2011．12．24)