RP-HPLC二极管阵列检测器对阿替洛尔注射液质量的研究

药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2OO6，26(3) RIP—HPLC二极管阵列检测器对阿替洛尔注射液质量的研究 刘玉真，聂新永，谢英花，戎欣玉 (河北科技大学化学与制药-E程学院，石家庄 o50ols) 摘要 目的：建立阿替洛尔注射液含量及有关物质的 RP—HPLC测定法。：采用 Shimadzu ODS色谱柱，以甲醇 一磷酸二 氢钾一庚烷磺酸钠(400：6o0：1．3)为流动相，检测波长275 nm。结果：阿替洛尔峰与各成分的分离度及检出灵敏度满足测定 要求。阿替洛尔峰最小检出量为2ng(S／N=3)。二极管阵列检测器检测阿替洛尔峰纯度 >99．99％。结论：本法简便，专属， 准确。 关键词：阿替洛尔注射液；含量；有关物质；RP—HPLC；二极管阵列检测器 中圈分类号：IL917 文献标识码：A 文章编号：0254—1793(2006}03—0387—03 RIP-—-I-IPLC diode array detector for determinating of related substances of atenolol and its injection LIU Yu-zhen ，NIEⅪIlg-yong，XIE ying—lIua，RONG Xin-yu (H Um~ ty sd棚∞趣dTechnique cdl咿 Q脚 趣d Pha雕 叫 ， 蛐 ~0018，Q ) Atls眦 Object~ ：To establ油 a m for the 舰翔血l cIf l劬ed剐 吐aIx，es in Atenolol m its iniec畦0n． 目 ： 血舶 0jDS columnw鹊used．Then~i]e w鹊methanol：mono~ um 联 ：sodium he 剐璩Hlme(4【】0c 6【lDc L30)．Deteclion w rejI神 was at 254 im1．R圈IlI船：Resolution and detectable sensitivity of each eomtituenfin gml~e dd I d demand of related substances．fIl linfit of dd cli0ll懈 2 ng(S／N=3 ．"Ihe peakp~ty of Atenolol detennin~ by diode array detector is>99．99％．0哪cIIls毒吣 ：，Il method is found to be simple．sdeetive．effective． r,zy wacdls：Atendol；content；rdated suhstam~；RP—-HIa_C；diode army detector 阿替洛尔(氨酰心胺，Atenolo1)是一种新的 B肾 上腺素能受体阻滞剂，对心脏的B一受体有选择性 的阻滞作用，是目前临床高血压治疗应用最广泛的 药物之一。1976年由 ICI公 司首创，美国 FDA于 1982年批准治疗高血压、心绞痛、早期急性心机梗 死及心律失常。中国药典2005年版二部采用RP— HPLC法测定该药的含量及有关物质 】。本研究建 立了 RP—HPLC二极管阵列检测器测定阿替洛尔 注射液含量及有关物质的方法。实验结果明：本 法操作简便，重现性好，测定结果准确。 1 仪器与试剂 ShimadzuLC一10ATvp高效液相色谱仪(包括： Lc一10ATvp二元高压梯度泵，SIL一10ADvp自动进 样器 ，SPD—M10Avp二级管阵列检测器，Shimadzu CLASS—VP6．x色谱工作站)；SYZ一550石英亚沸 超纯水蒸馏器(江苏金坛)；甲醇(色谱纯，邯郸林峰 第一作者 ：Td 13831128376 E—mail：yvda~ u@163．corn 化工有限公司)；阿替洛尔本院制剂室提供；阿替洛 尔对照品由中国药品生物制品检定所提供；阿替洛 尔注射液自制。 2 色谱条件 色谱柱：Shimadm ODS柱1(250 mm×4．6 ml,n× 5 )，流动相：甲醇 一0．I mol·L 磷酸二氢钾缓 冲液(pH3．0)一庚烷磺酸钠(400"600"I．3)，流速： 0．6 mL·min一，进样量 20 ，柱温：室温，检测波 长 275 llm。 ’ 3 波长的选择 在 l9o～350 rim波长范围内进行紫外扫描，取 阿替洛尔对照品适量，加流动相溶解在 200～600 ilm波长范围内进行紫外扫描，结果发现在 227，275 眦 的波长处有最大吸收。由二极管阵列检测器检 测图谱可知，分解产物在275 rim吸收较大，故选择 275 D_m为测定波长。 维普资讯 http://www.cqvip.com 药 物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2OO6，26(3) 4 流动相和溶剂的确定 经试验研究确定 ；以甲醇 一磷酸盐缓冲液 一 庚烷磺酸钠(400：600-"1．3O)为流动相 ，可使各组分 达到良好分离、峰形对称、洗脱时间较短。二极管阵 列检测器检测阿替洛尔峰纯度 100％。见图1。 J、． ． 0 10 图 1 阿替洛尔注射液的色谱图 Figl chromatogram of atenololInjection 1．阿替洛尔(Atenolo1) 5 专属性实验 5．1 与辅料的分离 分别精密称取阿替洛尔适量与处方量空白辅料 溶解混合，按测定法操作。结果可见阿替洛尔注射 液杂质峰位置与空白辅料峰一致，峰面积几相同。 5．2 强破坏实验 精密称取阿替洛尔5 mg分别于5O mL量瓶中。 加入适量的水，超声、振摇 10 min溶解后(1)酸破 坏：加入 l tool·L 盐酸2 mL，室温静置 2 h，调 pH 至近中性，酸解情况见图 2(A)。(2)碱破坏：加入 l tool·L—l氢氧化钠2 mL，室温静置2 h，调pH至 近中性。记录色谱图无变化。(3)氧化破坏：加入 10％的双氧水 2 mL，室静置 2 h，氧化破坏情况见图 2(B)。(4)高温水解：150 cI=煮沸3 h后，放置至室 温，高温水解情况见图2(c)。(5)强光照破坏：取 样品适量置室外自然光下照射 84 h，称取5 mg于 50 mL量瓶中，按测定法记录色谱图无变化。结果 可见：本色谱条件可将各分解产物与阿替洛尔完全 分离。选择杂质峰与阿替洛尔峰最近的高温水解图 谱见图2(c)，按阿替洛尔计算色谱参数：理论塔板 数 5946，分离度 3．7，拖尾因子 1．Ol。 5 阿替洛尔峰纯度 二极管阵列检测器检测阿替洛尔峰纯度均 >99．99％ 。 6 最小检出限 将阿替洛尔对照品溶液逐级稀释测得最小检出 限为2 ns(S／N=3)。 7 线性回归方程 精密称取阿替洛尔对照品适量，加水 15 mL使 1 人 0 10 A 1 ． ． 人 0 10 B 一 ⋯ ． ， 八． 0 10 C 图2 阿替洛尔酸解(A)、氧化破坏(B)、高温破坏(c)色谱图 Fig 2 HPLC Chromatogram ofAtenololdestroyed by destroyod acid ，flea- tin(A)，destroyed by％id (B)and destroyed byhe~mg(C) 1．阿替洛尔(Atenolo1) 之溶解，立即用水稀释成 0．01，0．02，0．04，0．05。 0．1，0．15 mg·mL 的溶液，各取 2O 进样。以 阿替洛尔的峰面积对其浓度(mg·mL )进行线性 回归，得： A=8966863C+3338 r=0．9999 8 回收率实验 取阿替洛尔对照品约lO mg精密称定于50 mL 量瓶中，按处方量的80％、100％、120％各 3份加入 空白辅料制成模拟样品，按测定法操作，测得平均回 收率98．65％，RSD=1．04％，rt=9。 9 溶液稳定性 将同一样品溶液于0，l，2，4，8，24 h测定，阿替 洛尔峰面积 CV％ =O．6％。rt=6。 lO 测定法及测定结果 精密量取阿替洛尔注射液2．0 mE(约相当于阿 替洛尔l Ing)，置 10 mL容量瓶中，加水溶解并稀释 维普资讯 http://www.cqvip.com 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2006，26(3) 至刻度，摇匀，一次性滤器滤过，得续滤液为供试品 溶液。取供试品溶液20 注入液相色谱仪，记录 色谱图至主成分峰保留时间的2倍。另精密称取阿 替洛尔对照品适量，用水稀释制成每1 mL含阿替洛 尔0．1 mg的对照品溶液，同法操作，按外标法计算 含量。 表 1 样品测定结果(H--2) Tab1 Determination 0f sample ll 结论 由以上方法可靠性实验结果表明：本法操作简 便、省时，分离效率高，含量测定结果准确，并可同时 检测注射液中的有关物质，适用于阿替洛尔注射液 的质量控制。 采用本文色谱柱，按现行药典阿替洛尔原料药 方法测定，流速0．6 mL／min，结果阿替洛尔 30 min 未出峰；换 成 Shimadzu ODS柱 (4．6×150 rlllTl， 5 )色谱柱后以流速0．8 mL／min，保留时间为 17 min，原料药未检出杂质峰。本文将离子对试剂改为 庚烷磺酸钠后，分别以：甲醇 一磷酸盐缓冲液一庚烷 磺酸钠(300：700：1．30)、(400：600-"1．30)、(450： 550：1．30)、(600"400：1．30)等不同比例进行试验， 流速均为0．6 mL·min 不变，结果：阿替洛尔保留 时间分别为 18，1O，8，5 min。比较分离结果表明：以 甲醇 一磷酸盐缓冲液一庚烷磺酸钠(400：600： 1．30)为流动相，可使各组分达到良好分离、峰形对 称、洗脱时间较短。二极管阵列检测器检测阿替洛 尔峰纯度 100％。因此，本法测定结果准确，且较药 典法省时、节省溶剂、测定效率高。 (本文于2O06年 1月 6日修改回) 关于第 2套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家品启用的通知 目前，第1套梅毒螺旋体抗体诊断试剂国家参考品即将分发完毕，经中国药品生物制品检定所 标准物质委员会批准，启用第2套国家参考品。该参考品自2001年起开始制备，经初筛、复核、确 证及协作标定，现该套参考品已经专家评审，并经有标准物质委员会批准，从2006年 1月1日起正 式启用。凡2006年 1月 1日(含 1月1日)以后报送的梅毒螺旋体抗体诊断试剂均应符合该标准 品要求。 现该套参考品已分装完毕，需要的单位可前往购买，3000歹已／套。 联 系电话 ：010—67o95627 FAX：(010)67058402 联系人：王薇 么山山 银行帐号：中国药品生物制品检定所 o： 00O1509O892O2642 北京工商银行永定门分理处 维普资讯 http://www.cqvip.com