参雄抗癌丸对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制

参雄抗癌丸对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制 参雄抗癌丸对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及 其机制 一自|栽呻'盖2011年第卷第2期GansuJournalofTCM,2011Vo1.24No.2 …一…一,< i?实验研究?l 'c………一o'o?o 趱豌岛国C=0回国圊围圆国嗣舀锄圈 么杨,,杨磊z?,卢玉成',王静',丁春杰' 1甘肃中医学院,甘肃兰州730000;2甘肃省肿瘤医院 摘要目的:观察参雄抗癌丸(SXACP)对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制.方法:将移植H22肝癌瘤株的 6O只昆明小鼠随机分成5组,分别为模型组,5-FU组,参雄抗癌丸高剂量(SXACP)组,中剂量(SXACP)组,低剂量 (SXACP)组,连续用药10天后,比较各组的抑瘤率,VEGF达.结果:高浓度的(SXACP)在体内对It22肿瘤细胞的生 长有明显的抑制作用,对肿瘤组织VEGF的表达有显着的抑制作用.结论:SXACP对肝癌细胞的增殖有明显的抑制 作用,其机制与VEGF表达有关 关健词肝肿瘤;肿瘤转移;中医药治疗;参雄抗癌丸 中图分类号:R681.531.2文献标识码:A文章编号:1004—6852(201i)02—0039—02 原发性肝癌是典型的高密度血管肿瘤,血供丰富,可使 肝癌病变生长速度加快,易转移,且死亡率高,生存期短,其 发病机理目前并不完全清楚.在肿瘤血管生成过程中,血管 内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor, VEGF)是血管内皮细胞特异性强效有丝分裂原,能使血管内 皮细胞变形,迁移,分裂增殖,还能增加血管通透性,具有促 血管生成的功能,在肿瘤性血管生成和肿瘤生长转移过程 中起着重要的调节作用.大多数肿瘤细胞均可产生VEGF. 为了探索参雄抗癌丸的抑瘤机制,我们进行了本实验研究. 1材料与方法 1.1材料与试剂SPF级昆明小鼠,雌雄各半,体质量18— 20g,5-6周龄,由甘肃省中医学院动物实验中心提供.瘤株 H22从中国医学科学院北京药物研究所引进,由甘肃省医 学科学院传代保种.实验药品:参雄抗癌丸(丹参5g,雄黄 0.3g,全蝎2g,蜈蚣2g,马钱子0.3g,甘草2.4g等)由甘 肃省医学科学研究院制成水丸剂,每丸0.2g,每瓶6O丸 (实验时以蒸馏水配制成实验所需浓度);5-FU注射液.试 剂:VEGF免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物技术公司. I.2实验方法无菌条件下取接种传代7天的腹水型H22 小鼠腹水,用生理盐水稀释(1:2)成细胞悬液,注射到小鼠 右前肢腋窝部皮下,每只0.2mL,每只接种的瘤细胞数 约为5xlO.个.接种次日,将除正常组外的6O只小鼠随机 分为5组:A组为模型对照组,每日用蒸馏水为其灌胃;B组 为阳性对照组,每天为其进行5一FU10mg/kg腹腔注射; C组为药物高剂量组I560mg/kg灌胃;D组为药物中剂量 组780mg/kg灌胃;E组为药物低剂量组390mg/kg灌胃, 1次/d,连续灌胃1O天. 1.3检测指标计算抑瘤率.实验结束后第2天,将禁食 l2小时的所有实验动物脱颈处死取瘤组织,计算抑瘤率时 应先完整剥离肿瘤,用1/1000电子天平称取瘤重.免疫组 化VEGF操作严格按照试剂盒说明进行,结果判定按 Rahman等…方法评分,总分等于着色细胞的比例分值与染 色强度分值的总合.染色范围按阳性细胞比例,分0级为阴 性:1级为1%,25%;2级为26%,50%:3级为51%,75%;4级为 76%,100%.染色强度为0-3级,分别为0-3分;0级为 阴性;1级为弱阳性;2级为中等强阳性;3级为强阳性. 1.4统计学方法将各组计量资料输入计算机,采用 SPSS16.0统计软件包,以平均值?标准差蜘)表示,各组 问的比较采用单因素方差分析. 2结果 2.1一般情况造模后,各组小鼠出现不同程度左后肢肿 胀变形,行动困难,甚至出血,坏死.各组小鼠出现活动减 少,毛色变暗等情况. 2.2瘤重及抑瘤率的比较5组平均瘤重及抑瘤率见表1. 表1瘤重及抑瘤率的比较) 注:与模型组比较,?表示P<0.05. ]9 柑角仲匡2011年第24卷第2期GansuJournalofTCM,2011VoL24No.2 2.3VEGF表达情况比较5组H22荷瘤小鼠各组的VEGF 表达情况比较见表2. 表2各组织的VEGF表达情况比较(j) 注:与模型组比较,?表示P<0.05,}?表示P<0.01. 3讨论 肿瘤的浸润转移是一个复杂的连续过程.近年来,关于 血管生成与肿瘤生长,侵袭及转移密切相关的研究逐渐引 起了广大学者的高度重视.丰富的血管为肿瘤细胞的生长 输送营养,转移灶的形成和发展也依赖于新生毛细血管的 形成.肿瘤诱导新生血管形成,新生血管进一步刺激肿瘤生 长和转移[.VEGF是一种高度特异的血管内皮细胞有丝分 裂原,是肿瘤新生血管生成的重要调控因子,它不仅参与肿 瘤血管生成,增殖,还直接与肿瘤浸润,转移有关.Holash 等[3]研究发现,肿瘤快速生长而处于缺氧状态时可分泌 VEGF,促使血管内皮细胞分裂增生及毛细血管芽生,在其他 因子的共同作用下形成肿瘤营养血管.调节肿瘤血管发展 的细胞和分子机制,能促进不同的器官微环境中生长的不 同的肿瘤抗血管治疗的发展,肿瘤细胞基因的不稳定性和 生物学异质性是全身抗肿瘤治疗失败的主要原因]. 癌症在中医上归于"癞瘕范畴,多因气血瘀滞于内,积 久正衰而成,治以活血化瘀,软坚散结.SXACP具有清热解 毒,活血化瘀,软坚散结,消肿止痛的作用,在临床上主要用 于肝癌,胃癌,食道癌等的治疗SXACP对肿瘤组织的生长 有抑制作用,抑瘤率低,中,高剂量组分别为27.57%, 36.65%,46.48%.各组小鼠肿瘤组织VEGF均有阳性表达,模 型组多数为阳性表达,高剂量组,中剂量组,5-FU与模型组 比较各组表达均有统计学意义.本实验结果表明,SXACP有 抑瘤作用,能下调肿瘤细胞中VEGF的表达水平,可能为抑 制肿瘤生长的机理之一,即通过抑制肿瘤血管生成以达到 治疗肿瘤的作用.本药其他作用环节和机制有待进一步研 究证实. 参考文献 [1】RahmanA,DharDK,YamagnchiE,etaI.Coexpressionof inducihieitricoxidesynthaseandcox-2inhepato— eellarcareionmaandsurrounding1iver,posSiblein- volvementofCOX一2intheangiogenesisofhepatitis CViruspostivecase[J】.ClinCanRes,2001,7(5):l325. 【2】CarmelletP.amgiogenesesin1ire,discascandmedi— cine[J】.Nature,2005,438(7070):932-936. 【3】HolashJ.MaisompierrePC.comptonD,etaI.Vesselcoop- tionregression,andgrownintumorsnediatedbyan- giopoietionsandVEGF【J】.SCience,1999,284(5422): 1994-1998. 【4】彭芳,陈明.抗血管生成和肿瘤血管正常化的研究进展【J1. 中国肺癌杂志,2009,12(7):799—804. 收稿日期:2010-07-02 作者简介:么杨(1982一),男,硕士研究生.研究方向:肿瘤疾 病的中西医结合诊治. ?通讯作者:杨磊(1963一),男,主任医师.研究方向:肿瘤疾 病的中西医结合治疗. TheInhibitiontoTumorandMechanismofShenXiongKangAiPill onH22Tumor?-bearingMice YA0Yangt,YANGLei2~,LUYu-chenga,WANGJin~),DINCChun-jie lGansuColleofTCM,LanzhouGansuChina730000;2TumorHospitalofGamuProvince AimmmtObjective:ToobservetheinhibitiontotumorandmechanismofShenXiongKo22e,Aipillon1-122 tumor-bearingmice.Methods:60micetransplantatedH22Livertumorstrainwergrandomlydividedinto5groups, respectivelywasthemodelgroup,5-FUgroup,highdose(SXACP)group,middledose(SXACP)group,lowdose(SXACP) group,comparetheinhibitionrateofeachgroupandVEGFexpressionafter10days'continuousmedication.Results:The high.concentrationof(SXACP)inhibitedthegrowthofH22tunlorcellsinvivosignificantlyandinhibitedVEGFexpms- sioninD./mortissuesignificantly.Conclusion:SXACPinhibitedtheproliferationofhepatomacellssignificantly,andits mechanismwasconnectedwiththeexpressionofVEGF. ;ChinesemedicineIreatment;ShenXiongiPill