固体脂质纳米粒降低雷公藤内酯醇肝毒性的实验研究

固体脂质纳米粒降低雷公藤内酯醇肝毒性的实验研究 固体脂质纳米粒降低雷公藤内酯醇肝毒性 的实验研究 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第9期2003年9月?817? 固体脂质纳米粒降低雷公藤内酯醇肝毒性的实验研究 梅之南,杨亚江,徐辉碧,杨祥良 (华中科技大学药物研究所,湖北武汉430074) 摘要:目的探讨固体脂质纳米粒降低雷公藤内酯醇(TP)对肝脏的毒性作用.用雷公藤内酯醇固体脂 质纳米粒(TP—SLN)小鼠ig60d后,测定小鼠血清谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST)和肝组织中的超氧化 物歧化酶(S0D),谷胱苷肽过氧化物酶(GSH—Px)的活性以及丙二醛(MDA)的含量.结果与空白组相比,TP— SLN对ALT,AST,SOD,GSH-Px,MDA的活性或含量差异无显着性;中,高剂量(20,30gg/kg)的TP组则显 着降低SOD和GSH—Px的活性,并能显着提高MDA,ALT和AST的含量.结论TP—SLN能降低TP对肝脏 的毒性. 关键词:固体脂质纳米粒;雷公藤内醇醇;肝毒性 中圈分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:0253—2670(2003)09—0817—03 ExperimentalresearchontriptolidesolidlipidnanOparticle fordecreasinglivertoxicityoftriptolide EIZhi—nan,YANGYa-jiang,XUHui-bi,YANGXiang-liang M (InstituteofMateriaMedica,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan4300 74,China) Abstract:ObjectTostudythemechanismoftriptolidesolidlipidnanoparticle(TP—SLN)forde— creasinglivertoxicityoftriptolide(TP).MethodsWithigthreedosesofTP— SLNtomicefor60d,the ALT,ASTactivitiesinserumandsuperoxidedismutase(S0D),glutathioneperoxidase(GSH —PX)ac— tivitesandmalondialdehvde(MDA)contentsinliverweredetermined.ResuitsTheactivities ofALT, AST,S0D,GSH—PxandcontentofMDAbetweenexperimentalgroupandblankgroupdidnothavere— markabledifference.However,theactivitesofALT,AST,SOD,GSH—Pxforthemiddle一(20/~g/kg)and high—dose(30ttg/kg)groupwerehigherandthecontentsofMDAwerelowerthantheexperimental group.ConclusionTP—SLNcandecreasethelivertoxicityofTP. Keywords:triptolidesolidlipidnanoparticle(TP—SLN);triptolide(TP);livertoxicity 雷公藤为卫矛科雷公藤属雷公藤Triptery— giumwilfordiiHook.f.,昆明山海棠., poglaucum(Levi.)Hutch.以及苍山雷公藤. forrestiiDials,东北雷公藤T.regelliSpragueet Takeda等的根,叶,花.由于其生理活性强,具有显 着的抗炎,抗肿瘤[1],抗生育[2]及免疫抑制作用[3], 临床上应用广泛.据不完全统计,雷公藤已用于治疗 类风湿性关节炎,红斑狼疮,过敏性紫癜,皮肤病,肾 脏疾病等50多种疾病,外用还有镇痛作用.但其不 良反应很多,主要发生在消化系统,泌尿系统,生殖 系统,心血管系统,骨髓及血液系统.还可以引起水 肿,血糖升高,复视等,因此限制了该药在临床上的 应用.研究明,雷公藤的药理活性及毒性来源于 其复杂的化学成分及生理活性成分,主要含有生物 碱(如雷公藤碱戊),二萜类(如雷公藤内酯醇,即雷 公藤甲素,雷公藤乙素),五环三萜类(如雷公藤内酯 甲),倍半萜类,脂肪油,挥发油,蒽醌类,木脂素类, 卫矛醇,鞣质等.其中二萜类和生物碱类是主要活性 成分.为了提高雷公藤的药效,降低其毒性,本实验 以雷公藤内酯醇(TP)为模型药物,研制了雷公藤 内酯醇固体脂质纳米粒(TP—SLN),探讨其对肝脏 的毒性作用. 1 1.1药品:TP为福建省医学科学院提供,含量为 99.98%,用时配成所需浓度溶液;TP—SLN为本所 研制;ALT,AST,S0D,GSH—Px及MDA等试剂 盒均由南京建成生物研究所提供. 1.2动物:雄性昆明种小鼠,体重(20土2)g,由湖 收稿日期:2002-11—31 喜蓄异芝罨310A)1997年毕业于中国药科大学,获硕士学位,先后工作于武汉大学,中南民族大学,主要从作者篱介:梅之南(197o一),男,博士生,讲师,年毕业于中国药科大学,获硕士学位,先后工作于武汉大学,中南民族大学,主要从事药物的研究和开发.Tel;(027)87543532E—mail;gly1971@263.net *通讯作者 ?818?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第9期2003年9月 北省预防医学科学研究院实验动物中心提供. 2方法 2.1分组及处理:雄性昆明种小鼠70只,每组10 只,随机分为:对照组,每天ig生理盐水;TP低,中, 高3个剂量组,分别ig10,20,30pg/kg,每天给药 1次;TP—SLN组给药方法,剂量同TP组.连续ig 60d,自由进食和饮水,末日隔夜禁食不禁水,次日 晨眼眶取血后处死小鼠,分离血清测定ALT, AST,并取所需器官进行各项测定. 2.2ALT,AST的测定:采用赖氏法测定,按试剂 盒说明书操作方法测定. 2.3SOD活性的测定[5]:用黄嘌呤及黄嘌呤氧化 酶反应体系产生的超氧阴离子自由基氧化羟胺形成 亚硝酸盐,检测亚硝酸盐的量计算SOD活性,按试 剂盒说明书操作方法测定.以每毫克肝脏蛋白质在 ImL反应液中SOD抑制率达50时所对应的 SOD量为1个亚硝酸盐单位,单位为NU/mg.用考 马斯亮蓝法平行测定相应小鼠肝脏中蛋白质含量. 2.4GSH—Px活性测定[5]:以催化GSH的反应速 率来表示酶活性.取肝脏匀浆液0.2mL,按试剂盒 说明书操作方法测定.规定每毫克肝脏蛋白质,扣除 每分钟非酶促反应的作用,使反应体系中GSH浓 度降低1t~mol/L为1个酶活力单位(U),单位为 U/mg.考马斯亮蓝法测定蛋白质含量. 2.5MDA的含量测定[7]:取肝脏匀浆液0.1mL, 分别加入3mL15TCA和1mL6.7TBA,于 上清液吸光度()值.另用考马斯亮蓝法平行测定 相应小鼠肝脏匀浆液中的蛋白质含量. 2.6数据处理:数据以x+s表示,组间用t检验. 3实验结果 3.1TP—SLN对肝功能的影响:结果见表1.ALT, AST均属非特异性细胞内功能酶,正常时血清内含 量很低;当肝细胞受损,肝细胞膜通透性增加时,其 活性迅速增强.低剂量TP—SLN组和TP组对肝脏 无明显的损伤作用.TP—SLN能显着降低TP对肝 脏的毒性损伤,同TP组相比差异有显着性. 表1TP-SLN对血清ALT,AST活性的影响 Table1TP—SLNeffectOnactivities ofALT,ASTinmiceserum 组别 . u0佃0 3.2TP—SLN对SOD,GSH—Px活性及MDA含 量的影响:结果见表2.低剂量TP对SOD,GSH—Px 活性及MDA含量变化无明显影响,而中,高剂量雷 公藤内酯醇不同制剂,二者差异存在显着性,TP组 中SOD,GSH—Px活性明显低于TP—SLN组,而 沸水浴中显色15min,冷却后离心,于532nm处测MDA含量则高于TP—SLN组. 表2TP—SLN对肝组织SOD,GSH—Px活性及MDA含?的影响 Table2,TP-SLNeffectonactivitiesofSOD,GSH-Pxandconten~ofMDAinlivertissue 与对照组比较:一P<O.01 ''P<O.015controlgroup 4讨论 雷公藤提取物及其二萜内酯类,生物碱具有明 显的药理活性,同时还有明显的毒性.目前,临床使 用的雷公藤主要用其抗炎和免疫抑制活性,该类制 剂在治疗类风湿性关节炎和红斑狼疮等自身免疫性 疾病的疗效是非常肯定的,但也存在明显的不良反 应.本研究从降低TP肝毒性的角度出发,将纳米技 术应用到中药领域.初步结果表明,TP—SLN提高药 物疗效的同时能显着降低TP对肝脏的损伤. 在实验过程中,TP组有4只(中剂量组1只, 高剂量组3只),TP—SLN高剂量1只小鼠死亡.尸 检发现.肾脏病变较肝脏明显,除肾小管上皮细胞变 性,坏死外,肾小管管腔内出现蛋白管型.说明TP 对小鼠的肾损害可能是亚慢性中毒者的主要死亡原 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第9期2003年9月?819? 因之一[8].因此在临床使用时必须严格掌握用药的 剂量.有关TP—SLN对肾及其他组织的毒性尚在进 一 步的研究中. 药物通过多种途径进入机体后在不同水平上引 发各种各样的毒性效应.其中许多毒性同自由基与氧 化损伤有关.生理条件下,体内自由基的产生和清除 存在着动态平衡;但在某些病理条件下,自由基生成 过多,超过清除的能力时就会造成组织损伤.本研究 表明,固体脂质纳米粒能减少TP在小鼠体内MDA 的产生,说明固体脂质纳米粒可减少TP在小鼠体内 脂质过氧化反应的发生[5~7].这应与TP—SLN对小 鼠体内S0D和GSH—Px活性影响较小有关. 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