血型 抗体效价 交叉配血 操作规程

血型 抗体效价 交叉配血 操作 1ABO 1.目的：对血型进行鉴定，避免输血时血型不合引起的溶血。 2.适应症：所有人群。 3.：操作：血库工作人员及本科值班人员。 4.诊断规程： 4.1检测仪器：显微镜、离心机. 4.2方法原理： 根据红细胞有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O型4种血型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓的反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。 4.3样本要求 1）用一次性血常规负压采血管留取静脉血2ml并混和，供制作红细胞悬液及分离血浆用。 2）3-5%红细胞悬液：抗凝血1份，加8～10倍量的等渗盐水混匀后，以1600r/min的条件离心3～5min，弃去上清液即得压积红细胞；用压积红细胞1滴加等渗盐水1ml即得约4%红细胞悬液。 4.4试剂：抗-A和抗-B分型血清；5%A、B试剂红细胞盐水悬液。 4.5操作规程 4.5.1 取清洁玻片1张，用蜡笔划成方格，标明抗-A和抗-B，分别滴加抗-A和抗-B分型血清1滴于标明的方格内，再各加受检者红细胞悬液1滴，混合。 4.5.2 另取洁净玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞，用滴管各加受检者血浆2滴，再分别用滴管滴加A、B试剂红细胞悬液1滴。 4.5.3 将玻片不断轻轻转动，使分型血清与细胞充分混匀，连续约15分钟，以肉眼观察有无凝 集反应，也可用低倍镜观察结果。 4.6 ABO结果见 表:ABO血型正反定型结果 分型血清+受检者红细受检者血浆+试剂红细 胞 胞 受检者血型 抗-A 抗-B A细胞 B细胞 ＋ － － ＋ A － ＋ ＋ － B ＋ ＋ ― ― O ＋ ＋ AB ― ― 凝集反应 被检者血 清 表:简易玻片法定型结果 抗抗-B -A 附注：1、分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置4?冰箱保存，以免 细菌污染。 + - A 2、试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤1次，- + B 以除去存在于血清中的抗体及可溶性抗原。3、试管、滴管和玻片必须清洁 干燥，防止溶血。4、操作方法应按规定先加血清，然后再加红细胞悬液， - - O 这样容易核实是否漏加血清。5、为了防止冷凝集现象的干扰，在室温20～ 24?内进行试验。6、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及 + + AB 缗钱状排列的区别。7、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。 4.6.1正反定型不一致的原因,常见以下数种: 4.6.2试剂血清效价太低亲和力不强. 4.6.3红细胞悬液过浓或过淡,抗原抗体比例不适合,使反应不明显误判为阴性反应. 4.6.4受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见于白血病或恶性肿瘤)以及B或cisAB嵌合体等. 4.6.5受检者血清蛋白紊乱(高球蛋白血病)或试验时温度过高,常引起细胞呈缗钱状排列. 4.6.6受检者血清中缺乏应有的抗A或抗B抗体,如丙种球蛋白缺乏症. 4.6.7各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集,部分溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗 体. 4.6.8由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集. 4.6.9血清中有意外抗体,如自身抗I,常干扰定型. 4.7.0老年人血清中抗体水平大幅度下降. 4.7.1正反定型不一致的解决办法. 如正反定型结果不一致,首先要重复试验一次.要严格按照操作规程,使用质量合格的试剂并要细心观察试验结果.对一些疑难问题必须进一步探讨.初步的检查步骤包括: 4.7.2另从受检者取1份新鲜血液标本,可以纠正因污染或搞错标本造成的不符合. 4.7.3将红细胞洗涤数次,配成3%--5%盐水细胞悬液用抗A.抗B.抗A1.抗A+B及抗H进行试验. 4.7.4用A.B.O型红细胞检查受检血清同时用受检红细胞做对照. 4.7.5对受检红细胞做直接抗球蛋白试验.结果呈阳性表明红细胞已被抗体致敏. 4.7.6将试验在室温(18-22?),37和4放置30-60分钟后用显微镜核实检查结果. 4.7.7如疑为A抗原或B抗原减弱,则可将受检红细胞与抗A或抗B血清做吸收及放散试验,以及受检者唾液做A.B.H血型物质测定. 4.7.8如试验结果红细胞呈缗钱状排列,加等渗盐水1滴混合,往往可使缗钱状消失. 4.7.9如受检者为A型血而疑为有类B抗原时,可用下列方法进行鉴别: (1)观察细胞与抗A及抗B的凝集强度,与抗A的反应要比抗B的反应要强,这种区别用玻片法试验更为明显. (2)用受检者红细胞与自身血清做试验,血清中的抗B不凝集自身红细胞上的类B抗原. (3)检查唾液中是否有A,B物质,如果是分泌型,可检出A物质而无B物质. (4)核对病人的诊断,类B抗原的形成与结肠癌,直肠癌,革兰氏阴性细菌感染有关. 5.临床意义 5.1输血：无论输全血或成份血，都存在“血型”的问题；血型不合的输血，均有可能造成输血反 应，严重时导致受血者死亡。 5.2新生儿溶血病：胎母血型不合的输血，均可能产生新生儿溶血病，其中主要是ABO新生儿溶血病和Rh新生儿溶血病。 5.3器官移植：同种异体的组织器官移植成功的重要因素之一是组织相容性，这与ABO血型，特别是与HLA密切相关。 2RhD 1.目的：进行Rh(D)血型鉴定。 2.适应症：不限。 3.职责：操作：血库工作员及本科值班人员。 4.诊断规程： 4.1 适用仪器: 显微镜 、离心机 4.2 原理及意义： Rh血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体,当遇有相应抗原,可致溶血性反应或新生儿溶血 病。目前，一般应用5种分型血清来检查红细胞抗原。临床上，凡带有D抗原者，称为Rh阳性，不带D抗原者，称为Rh阴性。所有输注红细胞成分的输血治疗必须作Rh血型鉴定试验。 4.3 方法学评价： 实验证明当离子强度由0.17降至0.03时，可提高抗D抗体与D抗原阳性红细胞结合率，所 以在低离子强度盐水中，能缩短抗原与抗体的反应时间，并提高其灵敏度。 4.4试剂：IgM加LgG型抗D试剂 4.5标本要求：不抗凝或EDTA抗凝血标本 4.6操作规程 4.6.1玻片或纸片法 4.6.1.1在一块玻片或纸卡微凹孔中滴1滴抗D试剂 4.6.1.2加1滴等体积全血，混匀。 4.6.1.3轻摇玻片或纸卡，观察凝集结果。出现凝集为阳性，未出现凝集为阴性。判断结果应在 2分钟内进行，否则会因为标本干涸而引起假阳性。 4.6.2试管法 4.6.2.1用等渗盐水配制3%~5%待检红细胞悬液。 4.6.2.2在相应标记的试管中加1滴抗D试剂和1滴待检红细胞悬液。 4.6.2.31000rpm（150×g）离心2分钟或3000rpm（1000×g）离心20秒。 4.6.2.4轻轻振荡，悬浮沉积细胞，观察凝集结果。 4.6.2.5如受检管凝集，即表示受检红细胞膜上有相应的抗原，为Rh阳性。如受检管不凝集，即表示受检红细胞膜上没有相应的抗原，为Rh阴性，应同时平行进行阳性和阴性对照试验。 4.6.3结果观察：出现凝集者为Rh（D）阳性。若不凝集，也不能就判为D阴性，还需进一 u步用试管法作间接抗球蛋白试验以排除D型。 5.临床意义： 5.1 Rh血型不合输血引起的溶血反应：Rh抗体几乎都是由于输入Rh血型不合的血液或母胎Rh血型不合的妊娠等同种免疫作用而产生。如果某个体已产生Rh抗体，在输入Rh血型不合的血液时，将发生溶血性输血反应，严重者可导致死亡。 5.2 Rh血型阳性红细胞所引起的新生儿溶血病：Rh阴性的母亲孕育了Rh阳性胎儿后，在胎盘屏障有小的渗漏时，胎儿血液可渗入母亲的血循环中，母体受到胎儿红细胞的刺激，可以产生 相应的抗体。此抗体通过胎盘进入胎儿体内而发生新生儿溶血病。 3 () 1.目的：发现ABO血型鉴定中的错误；发现ABO系统的不凝集素；发现其他的血型抗体。 2.适应症：适用于各种慢性贫血，急性出血或手术失血，心、肾、肝功能不全者输血等。 3.职责：操作：血库专业人员及本科值班人员。 4.诊断规程： 4.1检测仪器：普通离心机、显微镜。 4.2方法原理： 红细胞表面带有大量的负电荷，以免其产生自发性凝集。当红细胞悬浮在电解质溶液中时，阳离 子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，形成Zeta电位，Zeta 电位决定红细胞之间的排斥作用。 凝聚胺技术首先利用低离子溶液(LIM),降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以 促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。 其后，加入凝聚胺(Polybrene)溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生 很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离使红细胞产生非特异性的凝聚。 最后，加入悬浮液（Resuspending），Resuspending具有中和凝聚胺(Polybrene)的作用， 使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被 凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。 4.3样本要求：EDTA抗凝血2ml。 4.4操作规程： 4.4.1将标本离心，并将红细胞配成3-5%盐水悬液。 4.4.2将供血者血样以同样方法分离血浆，并配成3-5%红细胞悬液。 4.4.3取洁净小试管2支，1支标明主侧，另一支标明次侧。 4.4.4主侧管加受血者血浆2滴，加供血者红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血浆2滴，加受 血者红细胞悬液1滴。 4.4.5各加LIM0.7ml,混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。 4.4.6将各管放入离心机，3400rpm,离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留 约0.1 ml液体。 4.4.7轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集则必须重作。 4.4.8最后加入Resuspending液2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。如果在30秒内 凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性凝集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红 细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上在显微镜 下观察。 5.交叉配血试验中的不配合问题： 交叉配血试验中发现有不配合时，首先应考虑受血者和供血者的ABO定型是否错误，必要时进行Rh血型鉴定及抗体筛检。其次，应注意有无特异性同种抗体、特异性未知的同种抗体存在， 或者患者的血清在室温37?或抗球蛋白血清中凝集所有的其它红细胞，造成交叉配血的困难， 应进一步作有关试验进行鉴定。 6.血液样本的保留和贮存： 受血者和供血者的血液样本必须密封或盖紧，在每次输血之后，在2～6?保存至少3～7天。供血者的样本也许是实际上用于交叉配血后剩余部分，或者在临发出血袋前取下的一节管段，如 果保留的是已用的管段，必须将它放置在密封的或者加塞的试管中，而发血前取下的完整管段则 不必这样做，因它已经是密封的。如果患者在输血中发生不良反应，或在输血后数天内发生迟发 性溶血性输血反应时，保存的患者和供血者的血样就有可能要重做或追加试验，必要时对发生溶 血性输血反应的患者重新采取血样与输血前患者血样同时检查，以资比较。 4. 1.目的：进行抗体筛选。 2.适应症：不限。 3.职责：操作：血库工作员及本科值班人员。 4.诊断规程： 4.1 适用仪器:离心机 4.2 原理： 抗体筛选细胞是经检测，基本上包含所有抗原的一组红细胞。当受检血清中有不规则抗体时，通 过盐水法、聚胺法、人球蛋白法等方法与筛选红细胞反应，就会产生凝集。 4.3标本要求:抗凝或不抗凝，4ml新鲜的静脉血。 4.4试剂 4.4.1抗体筛选细胞：3人份的O型红细胞为一套试剂，每套筛选红细胞中至少有以下常见的 ababab抗原:D、C、E、c、e、M、N、S、s、p、Le、 Le、K、k、Fy、Fy、JK、JK. 4.4.2聚凝胺试剂。 4.5操作程序 4.5.1取小试管3支，分明注明?号、?号、?号。 4.5.2 各管分别加入待检血清2滴。 4.5.3 ?号管加?号筛选红细胞1滴,?号管加?号筛选红细胞1滴,?号管加?号筛选红细胞1滴,混匀. 4.5.4 以1000×g离心15秒(即2档),取出,轻摇不散的凝集为阳性,反之为阴性. 4.5.5 继续分别在各管加入低离子介质3滴,混匀,静置30秒,加凝集胺1滴,混匀,以1000×g离心15秒(即2档),扣摇,肉眼可见明显的凝集状(如无凝集须重做),再加1滴假凝集清除液于管底,轻摇,凝集1分钟内消失呈均匀混悬液,再将反应物倒于玻片上借助显微镜观察,镜下无凝集红细胞为阴性,1分钟内凝集不能消除,为阳性. 4.6 结果判断 阳表示含有ABO系统以外的抗体,需进一步做抗体鉴定.阴性表示抗体筛选阴性.