HPLC法测定穿龙骨刺颗粒中淫羊藿苷的含量

HPLC法测定穿龙骨刺颗粒中淫羊藿苷的含量 HPLC法测定穿龙骨刺颗粒中淫羊藿苷的 含量 第3卷第8期 2007年8月 亚太传统医药 Asia-PacificTraditiona1Medicine Vo1.3No.8 Aug.2007 HPLC法测定穿龙骨刺颗粒中淫羊藿苷的含量 李溪 (福建省药品检验所,福建福州350001) 摘要:目的:建立高效液相色谱法测定穿龙骨刺颗粒中淫羊藿苷含量的方法.方法:采用Hypersil-ODS2色谱 柱,以乙腈一水(30:70)为流动相,检测波长为270nm.结果:淫羊藿苷在0.0494~2.47g 范围内与峰面积呈良好 的线性关系,相关系数为0.9999,平均回收率为98.47(RSD—l_94,n一6).结论:快速简便,精密度好,灵敏 度高,可作为控制穿龙骨刺颗粒质量的方法. 关键词:穿龙骨刺颗粒;淫羊藿苷;HPLC 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1673—2197(2007)24—036—02 穿龙骨刺颗粒是由穿山龙,淫羊藿,狗脊,川牛膝, 熟地黄和枸杞子等六味药组成,具有补肾,健骨,活血, 止痛的作用,临床上用于治疗骨质增生,骨刺疼痛.淫 羊藿为方中主药,淫羊藿苷为其主要有效成分.因淫 羊藿中淫羊藿苷的含量常用HPLC法测定__l],故本 文采用高效液相色谱法测定穿龙骨刺颗粒中淫羊藿苷 的含量,为评价产品质量提供理论依据. 1仪器和试药 日本岛津LC-2010系列液相色谱仪;超纯水器 (Mililpore);AS5150A超声波发生器(奥特赛恩斯仪 器有限公司).淫羊藿苷对照品(供含量测定用,中检 所提供,批号:110737—200312);穿龙骨刺颗粒(批号 060201,060202,060203)以及阴性样品由福州海王金 象中药制药股份有限公司提供.乙腈为色谱纯,水为 超纯水,其它试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:HypersilODS2(5/~m,4.6x250mm),柱 温:室温;流动相:乙腈一水(30:70),流速:lml? min-;检测波长为270nm;进样量:1%1.理论板数 按淫羊藿苷峰计算应不低于2000. 2.2对照品溶液制备 精密称取淫羊藿苷对照品10mg,加甲醇制成每 lml含0.1mg的溶液,即得. 2.3供试品溶液制备 取本品装量差异项下的内容物约1g,精密称定, 置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇20ml,称定重量, 超声处理30min,取出,放冷,再称定重量,用稀乙醇 补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得. 2.4空白试验 按处方及生产工艺,制备不含淫羊藿的阴性样 品,再按供试品溶液的制备方法制备阴性溶液. 2.5检测 分别精密吸取淫羊藿苷对照品溶液,供试品溶液 及阴性溶液各lOft,按上述色谱条件,注入高效液相 色谱仪进行测定,实验结果阴性溶液在与对照品相应 的保留时间处,无峰出现,表明方中其余各味药对淫 羊藿苷色谱峰无干扰.结果见图1. 0246M les 8101214 B ),男,汉族,福建莆田人,药学专业理学学士,福建省药品检验作者简介:李~(1981一 所药师,研究方向为药学分析. 第3卷第8期 2007年8月 亚太传统医药 Asia-PacificTraditiona1Medicine VoI.3No.8 Aug.2007 图1对照品,样品,阴性样品色谱图 A淫羊霍苷对照品色谱图,B穿龙骨刺颗粒样品 色谱图,C穿龙骨刺颗粒阴性样品色谱图. 2.6线性关系考察 配制不同浓度的淫羊藿苷对照品溶液,分别精密 吸取10~zl注入高效液相色谱仪中,测定峰面积,以峰 面积A(mAU)为纵坐标,相应的进样量(ug)为横坐 标,绘制曲线,得回归方程为:Y一200000x+ 13529,r一0.9999.表明淫羊藿苷在0.0494, 2.47>g范围内呈良好的线性关系. 2.7重复性试验 精密称取样品(批号:060201)6份,分别按上述 方法制备供试品溶液,在上述色谱条件下进行测定并 计算淫羊藿苷含量,结果淫羊藿苷平均含量为 1.5330mg/g,RSD=1.O69/6,表明重复性良好. 2.8稳定性试验 精密称取样品(批号:060201)1份,按样品测定 方法制备供试品溶液,在室温下放置0,2,4,6,8,1O, 12,24小时,按上述色谱条件测定峰面积,计算相对 偏差,得RSD=1.339/6,说明样品液中的淫羊藿苷在 24小时内稳定. 2.9加样回收率试验 称取已知含量的穿龙骨刺颗粒(批号:060201)细 粉(过4号筛),约0.5g,精密称定,采用加样回收试 验,分别精密加人淫羊藿苷对照品适量,同上法操作 制备供试品溶液,并按上述的色谱条件进行测定,淫 羊藿苷平均回收率为98.47,RSD为1.949/6,表明 该方法可行(结果见表1). 表1回收率试验结果 称样量样品含量对照品加测得值回收率平均回RSD (g)(mg)入量(mg)(mg)()收率()() 2.10样品测定 取样品(批号:060201,060202,060203)按2.3方 法制备成供试品溶液,按上述的色谱条件操作,测定 淫羊藿苷的含量(结果见表2). 表2穿龙骨刺颗粒3批样品中淫羊藿苷的含量 批号含量(mg/g)平均含量(mg/g)每袋含量(mg/袋) 3讨论 3.1淫羊藿苷的含量测定方法 以高效液相色谱法的应用最为广泛,参照中国药 典及文献报道的色谱条件,比较乙腈一0.4磷酸(23 :77),甲醇一0.49/6磷酸溶液(38:62)及乙腈一水(30 :70)的分离效果,结果以乙腈一水(30:70)的分离效 果较为理想,在此条件下淫羊藿苷与其它组分能达到 基线分离,阴性样品无干扰. 3.2供试品溶液制备过程中的比较 比较以稀乙醇和乙醇为提取溶剂,对样品进行处 理,结果以稀乙醇提取完全,重复性好,故选择稀乙醇 为提取溶剂.另外对提取时间15min,30min和 60min进行了考察,结果超声提取30min和60min淫 羊霍苷含量相差不大,故选择提取时间为30min. 3.3实验结果表明 本法快速,简便,准确,可作为穿龙骨刺颗粒的含 量测定方法,同时为该制剂的分析提供参考依据. 参考文献: [1]国家药典委员会编.中国药典(2O05年版)(I部)[S]. 北京:化学工业出版社,2005.229. [2]王旭东.淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量的HPLC测定 [J].中草药,2003,34(8):717—718. [3]伍毅,郑国桑.高效液相色谱法测定复聪香液中淫羊藿 苷的含量[J].中国药房,2005,16(9):702. 一 37—