脑缺血再灌注损伤后大脑皮质和海马区脑红蛋白的表达变化

脑缺血再灌注损伤后大脑皮质和海马区脑红蛋白的达变化 ,, 医学杂志 ,, 年 , ～ ,月 笙 鲞 笙 ～ 塑 垒 ～ ～ ～ ～ ～ ～ ～ ～ 脑缺血再灌注损伤后大脑皮质和海马 区脑红蛋 白的表达变化 尚 爱加 周定标 孟 祥辉 王利 红 张成 岗 摘 要 目的 , , 在大 脑皮 质和 海 马 区的表 达变 化 。方法 研究 脑缺血 再灌注损 伤 后脑红 蛋 白( , ) 采 用 双侧 颈总 动 脉夹 闭法 制 在缺血 ,,,后分别 再灌 注 ,,, 、 、,,,处死 动物并 取脑 ， 用免疫 组化 染色结 合 阳性细胞 计数 备 沙 鼠全脑缺 血再灌 注损 伤模 型 ， ,, , , 、、,, , 、 ， 采 检测脑 缺血 再灌注 损伤 后大脑皮 质和海 马区 , ,的表 达变 化 。结 果的方法 ， , 大 , 沙 鼠脑缺 血 再灌 注 损 伤后 ， 脑 皮 质的 , ,蛋 白表 达 , ,上 而海 马 区 , ,表 达则 呈持续 减少 的趋势 。病理学 检测 显示??马 区神经细 胞损 伤程度 较大脑 皮质 区严 重 。结 论 于损 伤后 ,,,, 调 ， , , , 不 同脑 区对缺 血性损 伤 的耐受性差 异可 能与 , ,表 达水 平有关 。, ,表达上 调可能 对脑 缺血再 灌注损 伤具 有保 护作用 。 关键 词 再灌 注 损伤 ; 脑 缺血 ; 脑红 蛋 白 中国 图书 资料 分类 号 ,, , , , , , , ,, ,,,, ,,,, ;,,, , ,, ,,, , , , , , ,,, ,,,, ,,, ,, , , ; , ,, ,, , ,, , ,,, , ,,, , , ,,,, , ,, ,, , , , ,, ;,, ,,,,;,, , , , ,, ,,,, ,,, , , , ， , ,,,, , , , ,, , , , , (,, ,, , , ,, , , , ， , ,, , , , , , ， ,— , , ,,,, , , , ,, ，,, ,,,, , , , , , ,, ,, , , , , ,,, , ,, ,,, ,, ,, ,, , , , , , , ,，,, , , , ,,,, ,, ,,, , ,;, , , ,,,, , , ; , , , , ,, ,,, ,, , , ,,, ; ,,,, , , , ,, ,, , ,, ; , , ,, , ,,, , ( ,), ,,,, ,,,, , ,,, ,,, , , , ,, ,— , , ; ; , ,,,,, ;,,, ,, , ,, ;,, ,,,, , ,, , , , ,, ,,, ,, , ,, , , , , ,, , , ,, , ,,, , ,, ,,,, , , ,, ,, , , ,; , ,, , ;, ,,,,, ,,,,, ,,,(,,, , ,, ,,,;,,, ; , ,, ,,, ,, , ;,, ,,,, , ,,, ,, , , — , , , , , , ,,,, ,, ;,, , , ,, ,, , , ,,, ,, ,, , ,, , , , ,, ,, ,, ,, , , ,, ,, , , , , , ，, , , , ,, ,, ,, , , ,,, , , , ,, , ,，,,，, ,，, ,，, , , , , , , ,,, , , , ,, , ,, , , , ,, , ,( ,, , , , ,, , ;, , , ; ,, , , ,, ,;, ,, ,, , , , , ,, , , ,, , , ; ,, ,, ,; , , , , , , ,, ,,, , ,, , ,, ,( , , ,,,, ,, , , , , , ,,, , , , ,,, ,, , ,,, ; ,, , , ,, , , , , ; , , ,, , ,, , , , , ,, , , ,, ,,, ,, , ,, ,, , ,, ,, ,, ,,,, , ,, , , , ,; , , , , , , , , , (, ,, , ,, ,,, ,,,, , , , , , , , , ,, ,; , , , ,,, ,, , ,, , ,,, , , ; , , , , , ,, , ,,,,, ; , , , , , , ,, ,, , , , , ,, , , , , ,, ,,, ,, , ,, , , ,, , , , ,; , ,，,,,, ,, ,, , , , ,,, , , , , , , ,,,, , ,,; , , , , ,, ,, , , , , ; , , , ,, , , , ,, ,, ,,, , ,,, ; , , , , , , , ,,, , ,, , ,,,,, ,, ,,, , ,, , ,, ,,,, , ; ,,, ; , , , , ,, , ,, ,, , ,, ,,, , , , , , , , ,, , ; ,,, , ,; , , , , ,, , ,, , , , ,, , , , ,,,, , , , ,, , ,, ,; ,, , , , ,, , ; , , , ,,, , , , ,, , , , ,, , , , , , , , , , , , , , ,, ,, ,, , , ; ,,,,,; , ( , , ,;, , , , , ,, ,, , , , , ,,, , , ,, ,, , ,, ,, , ,, ,, ,, , , ,, , ,,,,, , , , , , , , ,,,, ,, , , , , ,, , ,, , , , , , ,,,, , , ,, ,; , ,, , , ,, , ,,, , ;, , , , , , , , , , , , , ,, , ,; , ; , , , ,(, , , , , , , , , , ,, , ;, ,, , ,,,凼 ,, , ,, , , ,,;,, ,,, ,, , , ,,, , ,, , , , ; ,,, ,,,, , ,,, ;, ,, ,,, ,,,,, , , 是新近发现 的神经系 , 脑红蛋 白(,,,, ,， , ) 置笼饲养 。手术后 ,,组和 ,,组各有 ,只 恢 复血流 ， , , 在脊椎 动物 的脑 内高表达 ，统 特异性携氧蛋 白， 与脑内 予以剔 除 。剩余 动物分 别 于再灌 注后 不 同 动物死亡 ， 贮备和利用密切相关 ,氧的运输 、 。我 们曾研究 了沙 , ,, 、,, 、, ) 取脑组织 时间点( 、、, , 、,,, 麻醉 后断头 处死 ， , 发现其 可在 鼠急性脑缺血后 , ,在脑 内的表达变 化 ， , 置 人 , 甲醛 溶 液 中 固定 。 在急性缺血 的情 况下 上调 ， 脑的适 应性 保护 中起重 要 ( ,, 病 理学 检测 固定后 的脑组 织经 脱水 、 包 浸蜡 、 , 作 用 。但 目前 尚未见脑缺血再灌 注损伤情 况下 , , (, ,处 进行 连续 埋 后制备 成石蜡 块 。于前 囟后方 ,,,在不 同脑 区变化情况的报道 。本研究通过 制备沙 鼠脑 片厚 , ,。分别进行 ,, , ,, 免疫组织 冠状切 片， ， , , 、, 和 探缺 血再 灌 注 损 伤 模 型 ， 讨 了 脑 缺 血 再 灌 注 损 伤 后 化 学染 色。免疫 组 化 染 色采 用 , 试 ,法 ( 剂 盒 为 美 国 , , ,在大脑皮质和海马区的表达变化 。 , , , ,, 公 司 产 品 )。一 抗 为 ,,, 多 克 隆 抗 体 ,,, ， , ( :, )二抗 为 辣 根过 氧化 物 酶标 记 的 羊 抗 兔 ，,, 材 料 与 方 法 ,,, 美 , , , 公 , ( :, ， 国 ,,, ,, 司 产 品 ) , 。染 色 后 经 , ,显 ( ,,, , ,, , 实验动物与试剂 雄性成年蒙古沙 鼠( , ,,, 色， 脱水 ， 封片 后显微镜下观察 。 透明 ， ,, ,, , 体重 , ,,, 由首都医科 大学实验 动物 , ,, ),只 ， , ,， ( , , 图像分 析 每个脑 组织样 本 选取 ,张 切 片进行 ,中心提供 。, ,多克隆抗体 由军事医学科学院二所 制 ,,,, ,, , ) 图像 分析 。在 光学 显微 镜 ( , ,, , , 下 分别 选 剖， ,, )备并纯化 辣 根过 氧 化 物 酶 ( , 标 记 的羊抗 兔 每个 区域 选择 ,个 取额 叶皮质 和海马 区域进 行 照相 ， , ,, ,, 其余试 剂为进 口和国产分 ，,为 ,,,, , 公 司产 品 ， ×,, ， 不 同的视野 ( , )各切片选择视野的位置保持一致 。 析纯 。 采用 ， ,, 件计算 出每 张照 将 照片输入计算机后 ， ,,, 软 (,, 动物模型 及标本 制备 将实 验动 物随 机分 为对 , 和缺血再灌注 , , , 、, , 、,照组( 一,) 咒 、、, , 、, ,,组 ( 一, 作 者简 介 :尚爱 加 ，医学博 士 ，主治 医师 。 主要 从事 脑 缺血 性疾 病 的基 础 只)。全部动物手术前一天 晚禁食不禁 水 。, 戊 巴比 ,余篇 与 临床 研究 。已发 表论 文 , ,,, 作者 单 位 :, ,, 北 京 解 放 军 总 医 院 神经 外 科 ( 周 孟 尚爱 加 、 定 标 、 ,,, , )妥钠腹腔 注射 (, , , 麻 醉后 ， 颈部 正 中 固定 四肢 ， ; 王 张成 岗 ) 祥辉 )军 事 医学 科学 院放 射 与辐 射 医学 研究 所 ( 利 红 、 分离并暴露双侧 颈总动脉后用 微血管 夹夹 闭，切 口， 检 张成 岗 ， 通信 作 者 : , , , , , , ， , , , , ;( ,, ,, ( ( , , 电话 :, —, , , , , ,, : , , , ,, ;; 查远端血 流情况 以确保完全阻 断血流 。对照组 仅剥离 国家 自然科 学 基 金 重 大研 究 计 划 资 助 课 题 (,, ,, ; 家 基 金项 目 : ,,, ,) 国 不阻断血流 。,,, ，双侧颈总动脉 ， , , ,后 去除微 血管 夹 ， , , , , ，, , , , , , , , ) 自然科 学基 金 面上项 目( , , , , , , , , ， , , , , ,中 钢胞的数 量 ,,, , ( , ) , 尢肺歧腼 峰( , )然后连渐 降低( , ,此外 ( ,, 统汁学处理 数摧结 果 , ,, 表 采 用 , , 的不同区域( 神经几,〔 肚 崔的情, 州 颧 叶 肯 , , 兄不 ;, , 单因素方左 分析 ,较件乜进, ,,, , 面的 神鲜 元数 量增 加最 盟莆(随 『 .