HPLC法测定橘红痰咳颗粒中柚皮苷的含量

70 国际医药卫生导报 2006年 第12卷 第18期(半月刊)IMHGN 参考文献 [1] 张朝民，黄海欣，张玉洁．五味子糖浆质量研 究[J]．中国实验方剂学杂志，2005,11(6):18 [2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[S]． 北京：化学工业出版社，2005.44. [３] 刘桂英，周春玲，张治国．HPLC法测定五味子颗 橘红痰咳颗粒是由化橘红、百部（蜜炙）、苦 杏仁、茯苓等8味药物制成，具有理气祛痰，润肺止 咳的功效，可用于感冒、支气管炎、咽喉炎等引起的 痰多咳嗽，气喘等症的治疗。但原质量标准中没有设 立“含量测定”项，本文采用高效液相色谱法测定其 主药化橘红中柚皮苷的含量，方法简便，结果准确， 重现性好，可用于橘红痰咳颗粒的质量控制。 1　仪器与试药 1.1 仪器 Agilent 1100 LC 高效液相色谱系列：G1311A（四 元泵），G1313A（自动进样器），G1316A（柱温 箱），G1315B（DAD检测器），G1379A（脱气机）， Agilent 1100 化学工作站。 1.2 试药 柚皮苷对照品由中国药品生物物制品检定所提供 （722-200006，含量测定用）；橘红痰咳颗粒（由 广州星群（药业）股份有限公司提供，批号DB70003、 DB70004、DB70005）。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。 2　实验方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱： Kromasil C18柱（4.6mm×250mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（47：53）；流速：1ml/ HPLC法测定橘红痰咳颗粒中柚皮苷的含量 黄志豪1　冼健民2　胡美山2　仇焕敏3 1广州市国盈新药特药批发部　广东广州　510140　 2广州王老吉药业股份有限公司　广东广州　510450 3广州星群（药业）股份有限公司　广东广州　510288 摘 要　目的 研究橘红痰咳颗粒中柚皮苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱：Kromasil C18 （4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（47：53）；流速：1ml/min；检测波长：283nm；柱温：室温。结果 线 性范围为0.306μg～2.040μg, 回归方程为：Y=809963X+9014.8，r=0.9999；回收率99.05%，RSD为1.28%。结 论 结果证明本方法简便易行，结果准确，重现性好，可用于橘红痰咳颗粒的质量控制。 关键词　高效液相色谱法　橘红痰咳颗粒　柚皮苷　含量测定 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：1007-1245（2006）18-0070-03 粒中五味子醇甲的含量［J］．辽宁中医杂志，2005， 32(8):833 收稿日期：2006-05-17 药 物 研 究 71 国际医药卫生导报 2006年 第12卷 第18期(半月刊) IMHGN min；检测波长：283nm；柱温：室温。 2.2 柚皮苷对照品溶液的制备 精密称取于110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品2. 55mg，置于25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀， 即得（每1ml溶液中含柚皮苷102μg），作为对照品 溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取橘红痰咳颗粒研细，精密称取1g，置于250ml 三角烧瓶中，加入甲醇50ml，精密称定重量，然后 超声处理30min，放置至室温，再次精密称定重量， 并用甲醇补足损失的重量，以干燥滤器滤过。弃去初 滤液，精密量取续滤液25ml，置50ml量瓶中，加甲 醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。 2.4 阴性对照样品溶液的制备 按处方的比例与制法制成缺化橘红的阴性样品， 按供试品溶液制备的方法制成阴性对照溶液。 2.5 检测波长确定 吸取柚皮苷对照品溶液5μl，供试品溶液5μl， 注入高效液相色谱仪，经二极管阵列检测器对柚皮苷吸 收峰于190nm～400nm进行吸收光谱测定，结果供试品和 对照品的紫外吸收光谱基本一致，均在283nm处有强吸 收，故本品测定波长定为283nm。 2.6 样品测定方法 精密吸取柚皮苷对照品溶液和供试品溶液各5μ l，注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件，以外标 法进行测定。 2.7 系统适用性试验 精密吸柚皮苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对 照样品溶液各5μl，按上述色谱条件测定，结果见图 1，阴性对照溶液在柚皮苷相对应的位置无干扰。以柚 皮苷峰计，理论塔板数不低于3000，柚皮苷峰与相邻 未知色谱峰的分离度大于2。 图1 HPLC图 A 柚皮苷对照品色谱图 B 橘红痰咳颗粒样品色谱图 C 橘红阴性对照色谱图 2.8 线性关系考察 分别精密吸取柚皮苷对照品溶液3、5、10、15、20 μl，按上述色谱条件进行测定，以对照品浓度对峰 面积进行线性回归，回归方程为Y=809963X+9014.8， r=0.9999，柚皮苷在0.306μg～2.040μg范围内呈良 好的线性关系，结果见1。 表1 柚皮苷对照品线性关系试验 2.9 精密度试验 精密吸取柚皮苷对照品溶液5μl，重复进样6次， 按上述色谱条件测定，柚皮苷峰面积积分值的RSD=0. 59%。见表2。 表2 精密度试验 2.10 重现性试验 取同一批样品（DB70003）6份，分别制成供试品溶 液，按“2．6样品测定方法”测定，结果柚皮苷平均含 量为1.4504%(g/g)，RSD=1.30%。见表3。 表3 重现性试验 2.11 稳定性试验 精密吸取新配制的供试品溶液（批号DB70003）5 μl，分别于0h、1h、2h、3h、4h、6h、8h进样 测定，结果柚皮苷峰面积平均值为598471，RSD=1. 56%。 表4 稳定性试验 2.12 加样回收试验 精密称取于110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品36. 18mg，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作 药 物 研 究 72 国际医药卫生导报 2006年 第12卷 第18期(半月刊)IMHGN 为标准加样储备液。另精密称取橘红痰咳颗粒（批号 DB70003）0.5g6份，分别加入上述标准加样储备液4. 00ml、5.00ml及6.00ml各两份，按供试品溶液制备方 法制成加样回收样品液。各取5μl按样品测定方法测 定，计算加样回收率。结果见表5。 表5 加样回收率试验结果 2.13 样品含量测定 取3个批次的橘红痰咳颗粒，每个批次平行3份，测 定含量，结果见表6。 表6 样品测定结果 3　讨论 3.1 开始时曾用Hypersil C18柱(4.0×250mm，5 μm)，但比较了下列几种流动相①甲醇-水（40：60）； ②甲醇-水-冰醋酸（40：59：1）；③乙腈-磷酸盐缓冲 液（pH3.1）（20：85），所得到的色谱图中柚皮苷峰拖尾 都比较严重，未能达到要求。后选择用Kromasil C18柱 （4.6mm×250mm，5μm），流动相：甲醇-水（47：53）， 在室温柚皮苷峰即能得到最佳分离（R﹥2）。 3.2 原药品质量标准中没有设立“含量测定”项， 本文采用高效液相色谱法测定其主药化橘红中柚皮苷的 含量，方法简便，结果准确，重现性好，为控制橘红痰 咳颗粒的质量提供了依据。 参考文献 [1] 朱勇，陈淑映，吴子超，等.HPLC测定橘红丸中柚 皮苷的含量[J].现代中药研究与实践，2003.17(3): 51 [2] 林一星.HPLC法测定止咳橘红颗粒中柚皮苷的含量 [J].中国热带医学，2005.5(7):1529 [3] 连中鄂，韩灵国,等.止咳橘红口服液质量标准研究 [J].中医药导报，2005.11(10):60 收稿日期：2006-05-20 面对专业的药品造假，薄层色谱法、紫外分光光 度法对于待测成分存在于成分复杂的中药制剂中，在干 扰严重的情况下，它们的专属性就很差，出现错误检 出的可能性较大。而高效液相色谱法具有同时分离、 分析的功能和具有快速、高效、灵敏等优点，因此高 效液相色谱法成了分离、鉴定和含量测定的首选方法， 其在假、劣药的日常检验工作中，正发挥着越来越重 要的作用，为打击药品制假和保障人民用药安全、有 效，提供了有力的技术支持。 1　高效液相色谱法在日常假劣药检验工作中的重 高效液相色谱法在假劣药检验中的应用 吴美香1　李焕德2 1湖南省郴州市药品检验所　湖南郴州　423000　　2中南大学湘雅二医院 湖南长沙 410011 摘　要　目的 探讨高效液相色谱法在假、劣药的日常检验工作的应用。方法 通过我国过去出现的几种中、西药 的实例介绍。结果 高效液相色谱法具有同时分离、分析的功能和具有快速、高效、灵敏、准确等优点，已成了分 离、鉴定和含量测定的首选方法之一。结论 高效液相色谱法在假、劣药的日常检验工作中，正发挥着越来越重要 的作用。 关键词　高效液相色谱法　检验　假药　劣药 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：1007-1245（2006）18-0072-04 药 物 研 究