1.2TTC法测根系活力

氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定根系活力 1 原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是氧化还原电位为80mV的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色不溶于水的三苯基甲腙（TTF），生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。 2 试剂 乙酸乙酯 连二亚硫酸钠（Na2S2O4，强还原剂，俗称保险粉） 1% TTC溶液：准确称取TTC 1.0g，溶于少量蒸馏水中，定容至100ml 0.4% TTC溶液：准确称取TTC 0.4g，溶于少量蒸馏水中，定容至100ml 磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH 7.0） A：0.2mol/L Na2HPO4 溶液 Na2HPO4·2H2O 35.61g 或Na2HPO4·7H2O 53.65g 或Na2HPO4·12H2O 71.64g 用蒸馏水溶解，定容至1000mL B：0.2mol/L NaH2PO4 溶液 NaH2PO4·H2O 27.6g或NaH2PO4·2H2O 31.21g用蒸馏水溶解定容至1000mL 0.1mol缓冲液 61.0 ml A+39.0 ml B稀至200ml。 1mol/L 硫酸：用量筒量取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml 3 定量测定 TTC标准曲线的制作 吸取0.25ml 0.4% TTC溶液放入10ml容量瓶，加少许Na2S2O4粉末，摇匀后立即产生红色的TTF。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF 25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定光密度，绘制标准曲线。 称取根样品0.5g，放入小培养皿（空白试验先加硫酸再加入根样品，其他操作相同），加入0.4% TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。 把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把红色提出液移入10ml容量瓶，用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次，皆移入容量瓶，最后加乙酸乙酯定容，用分光光度计在485nm下比色，以空白作参比读出光密度，查标准曲线，求出四氮唑还原量。 计算 将所得数据代入下式，求出四氮唑还原强度。 _1234567890.unknown