细胞培养液配制操作规程

细胞培养液配制操作规程 试剂和器材准备: 1. 用三角瓶装1L 超纯水，放入搅拌子，盖上铝箔纸，121摄氏度高压灭菌30分钟，冷却过夜。 2. 过滤器装好滤膜后用报纸包装好，121摄氏度高压灭菌30分钟。 3. 装培养液的试剂瓶瓶口用铝箔纸包好，140摄氏度烘烤3小时。 配制过程: 1. 将盛有灭菌超纯水的三角瓶放到磁力搅拌器上，搅拌速度以液面恰能产生漩涡为宜。 2. 打开干粉培养液的包装，将干粉慢慢加入容器，边加边搅拌 3. 往包装袋内加入适量的超纯水使残留的培养液粉末溶解并倾倒入三角瓶内，如此清洗数遍 4. 添加NaHCO。RPMI1640添加2.0g NaHCO，DMEM添加3.7g NaHCO。 3335.搅拌约2小时待干粉完全溶解。 6. 用1N NaOH 和 1N HCl调节培养液pH在7.1,7.2，调节好pH后盖紧容器。 7. 加入5 mL 200×的PS双抗，搅拌均匀。 8. 0.22um微孔滤膜过虑除菌，分装到试剂瓶中，盖好瓶盖密封，4摄氏度保存。使用前添加血清，使血清含量为10,。未加血清的培养液可在4摄氏度保存8个月，加血清后应在1个月内用完。 9. 检验。取过滤后的培养液3,5mL，置于无菌的35mm培养皿中，放入培养箱中培养两天，检查是否有长细菌。 注: 1. 过滤完毕后应及时把过滤器和试剂瓶清洗干净。清洗过程:自来水冲洗，蒸馏水洗3遍，超纯水洗一遍，沥干，烘干 2. 本操作规程以配制1L为例，配制量多时各组分应等比例增加。 1