【doc】反相高效液相色谱法测定冠心苏合丸中马兜铃酸A的含量

【doc】反相高效液相色谱法测定冠心苏合丸中马兜铃酸A的含量 反相高效液相色谱法测定冠心苏合丸中马 兜铃酸A的含量 反相高效液相色谱法测定冠心苏合丸中马兜铃酸A的含量 王维'.胡晓炜(1.杭州I『『『Itt【父院,浙jl抗纠I310006;2.抗州『『』药{^检验所,浙 江杭州310014) 摘要:目的建立冠心苏合丸中马兜铃酸A的含量测定方法.方法采用反相高效液相 色谱法,使用ZorbaxXDBC-8柱,甲醇: 水:醋酸(39:6l:1)为流动相,检测波长:310nm.结果此方法线性关系良好,马兜铃酸A 的平均加样回收率为98.28%,RSD 为1.93%.结论方法简便,分离度较好,结果稳定,可用于冠心苏合丸的质量控制. 关键词:冠心苏合丸;马兜铃酸A;反相高效液相色谱法 中图分类号:R917.799.1文献标识码:B文章编号:1007—7693(2005)04-0309-03 DeterminationofaristolochicacidAinGuanxinsuhepillsbyliP-HPLC WANGWei,HUXiao— wei(1.HospitalofTtraditionalChineseMedecinsofHangzhou,Hangzhou310006,China;2.HangzhouIn— stituteforDrugControl,Hangzhou310014,China) ABSTRACT:obiectiveTodevelopamethodfordeterminationofaristolochicacidAinGuanxinsuhepills.nETHODSReversed— phaseHPLCwasusedtodeterminationofaristolochicacidAinGuanxinsuhepills.TheseparationwasperformedonZorba,xXDBC1R columnwithmethanol:water:aceticacid(39:6l:1)asamobilephaseandthewavelengthofUVdetectorWaS3l0nm.ItESULTS ThelinearitvofthismethodwaswellwiththeaveragerecoveryofafistolochicacidAwas98.28%.RSDwas1.93%.CoNCLUSIoN T}lemethodissimple.reliable.Italsoshowsgoodseparatingdegree.ItcanbeusedforqualitycontrolofGuanxinsuhepills. KEYWoRDS:Guanxinsuhepills:aristolochicacidA:RP—HPLC 冠心苏合丸是由苏合香,冰片,乳香,檀香,青木香等药 材加工制成的复方制剂,收载于中国药典20(0年版一部,具 理气宽胸,止痛之功效.用于冠心病,绞痛,胸闷憋气等症. 方中苏合香,冰片芳香走窜,开窍豁痰止痛为君药,檀香,青 木香理气宽胸,助君药解郁化浊为臣药,乳香活血化瘀止痛, ,行气止痛.中国药 为佐药,诸药相伍,芳香开窍,化浊散瘀 典中规定有对君药冰片的含量测定,对臣药青木香仅有薄层 鉴别无含量测定. 青木香为马兜铃科植物马兜铃AristolochiadebilisSieb. etZucc.的干燥根,为方中重要药味,具平肝止痛,解毒消肿 之功效,现代中医和民间也常用青木香作为平肝止痛,治疗 胃腹痛,慢性肠胃炎,消化不良的中药.现代医学研究表明 青木香的提取物或化学成分具有抗肿瘤,抗感染及增加吞噬 细胞活性,降低血压,镇静,镇痛等药理作用,并引起肾衰竭 和致癌等不良反应.青木香制剂的不良反应,早在1963年 就曾有报道,静脉注射30mg/kg的马兜铃酸A于雄性大鼠, 可引起肾衰竭,减少肾小球过滤率,增加血内尿素和肌酐,损 害尿浓缩能力.从根分离出的芳香物质,对蛙可引起中枢 麻痹,对小鼠,家兔引起间歇性痉挛,对家免肾引起急性出血 性肾炎.挥发油部分使小鼠惊厥死亡粗制剂小鼠腹腔注 射LD.为l5.7kg,以100%煎剂给兔静注,在l时可引 起全身痉挛,瞳孔散大,呼吸抑制,最后心跳停止.精制浸膏 的毒性为粗制浸膏毒性的1/5 马兜铃酸为青木香的一种特征成分.是一种菲类化合物 (phenanthrenes)本实验以马兜铃酸A为指标成分,建立了 }?闭现代应『{】药学杂志2005年8门第22卷第4期 冠心苏合丸中马兜铃酸A的HPLC测定法.为该中成药的 质量控制提供参考. 1仪器与材料 Agilent1100高效液相色谱仪:包括GI322ADEGAS— SER,G1311AQuatPump,G1313AALS,G1316ACOLCOM, G1314AVWD;Agilentthem色谱工作站. 马兜铃酸A对照品(746-9002,中国药品生物制品检定 所).甲醇为色谱纯,水为重蒸水,醋酸,氨水,乙醚,盐酸均 为分析.冠心苏合丸(市售,批号为010416,010417, 010418),苏合香,冰片,乳香,檀香均由杭州市药品检验所中 药标本室提供. 2方法与结果 2.1实验色谱条件 色谱柱:ZorbaxXDBCl8柱(4.6mm×150mm,5m,Asi— lentTechnologies),柱温:30~C;流动相:甲醇:水:醋酸(39:61 :1),流速:1.0mL/min,检测波长:310nm.马兜铃酸A对照 品,冠心苏合丸样品及缺青木香阴性样品的色谱图见图1. 样品及阴性样品进样量均为10L,对照品进样量为2txL,进 样前均过0.221xm微孔滤膜. 2.2曲线的绘制 精密称取马兜铃酸A对照品5.20mg,用甲醇溶解并定 容至100mL,得对照品溶液.分别精密吸取1,5,l0,15,20 进样,测定峰面积并绘制标准曲线,结果表明马兜铃酸A进 样量C与峰面积A呈良好线性关系.马兜铃酸A线性回归 方程为C=3.7091+0.2504.4,r=0.9999;线性范围为0.052 ChinJMAP.2005Augus1.V.I,22t1.4'309' 图1马兜铃酸A测定的HPLC图谱 Fig1HPLCChromatogramesfordeterminationofaristolochic acidA 1,冠心苏合丸;2,缺青木香阴性对照样品;3,马兜铃酸A 1,Guanxinsuhepills:2,negativesample(withoutqingmuxiang);3,aris— tolochicacidA , 1,041.zg. 2,3精密度试验 精密吸取上述对照品溶液21xL注入液相色谱仪,重复进 样,马兜铃酸A峰面积值RSD为0,68%(n=8). 2,4稳定性试验 取同一样品,按样品测定项下操作,每隔1h进样1次, 结果样品中马兜铃酸A峰面积值RSD为1,02%(n=6);取 同一样品,按样品测定项下操作,每隔1d进样1次,结果样 品中马兜铃酸A峰面积值RSD为1.87%(n=3). 2.5重复性试验 取同一批号冠心苏合丸各6份,按样品测定项下测定, 马兜铃酸A含量RSD为1.38%. 2.6回收率试验 采用加样回收法,取已知含量的冠心苏合丸(批号: 010416)粉末,精密称定,加入马兜铃酸A适量,按样品测定 项下操作.测得马兜铃酸A平均回收率见表1. 表1回收率实验结果 Tab1Theresultofrecoverytest 2.7样品的含量测定 2.7.1空白样品的制备按处方量自配不含青木香的群 药,制得缺青木香的空白样品.再按样品制备项下操作,制得 缺青木香的空白样品溶液.进样测定,色谱图见图l. 2.7.2样品的制备与测定:精密称定冠心苏合丸粉末(过二 310.ChinJMP.2005Aub~st.,I)I.22No.4 号筛)2g于具塞锥形瓶中,精密加入氨试液25nL,称定重量, 超声20min,冷却,静置24h,用氯试液补足减失重量,过滤, 精密吸取续滤液10mL,加盐酸lnL,混匀,再用乙醚提取4 次(15mlM次),合并乙醚液,挥干,残渣用甲醇溶解并定容于 5mL量瓶中作样品溶液,过0,221xm微孔滤膜后,进样测定. 测定结果见表2. 表2冠心苏合丸中马兜铃酸A的含量(n=6) Tab2ThecontentsofaristolochicacidAinGuanxinsuhepills (n:6) 3讨论 3,1本实验建立的反相高效液相色谱法测定马兜铃酸A含 量的方法,马兜铃酸A保留时间为9.75min,马兜铃酸A峰 与杂质峰分离度大于2,塔板数按马兜铃酸A计算大于 6000. 3.2经空白实验(处方中无青木香)证明在马兜铃酸A相 应保留时间处无明显色谱峰出现,故认为空白样品无干扰. 3,3根据马兜铃酸A化学性质j,提取方法根据参考文 献j,在取样量相同的情况下.经以下试验,?直接甲醇 30mL超声20min,滤过,甲醇液浓缩定容;?5%氨水提取,再 酸化,再氯仿提取;?5%氨水提取,再酸化,再乙醚提取;结 果方法?色谱分离无法满足含量测定要求,方法?测得马兜 铃酸A的含量小于方法?,因此确定方法?为实验提取方 法. 3.4马兜铃酸A是硝基菲类成分,溶于乙醇,氯仿,醋酸及 碱,具有一定的毒性,因此对其在中成药中的含量控制具 有实际意义;目前马兜铃酸A含量测定多用薄层扫描 法"],HPLC法],本实验建立了RP.HPLC法测定冠心 苏合丸中马兜铃酸A含量的方法,简便,快速,可为冠心苏合 丸的质量控制提供参考.也可为其他含毒性中药的中成药 制订相应的含量测定方法提供参考. 3.5根据青木香药材中马兜铃酸A的含量,并结合每日用 药量,建议马兜铃酸A的含量应控制在701.zg/丸以下,以保 证使用安全. 3.7在文献中记载的青木香曾为木香的别名.土木香Inula heleniumL,在华北,东北地区称之为"青木香,并在冠心苏合 丸,紫血丹中以"青木香"之名配伍使用.四川东部地区称川 南马兜铃的根为青木香与青藤香,黄芪,甲珠配伍治疗骨关 节结核;还有的地区用北马兜铃根,广防己和一些菊科植物 的根做青木香使用.广防己,川南马兜铃的根,它们化学成 分与南马兜铃青木香有一定的差异.药理作用和毒性也不完 全一致,以不作青木香使用为妥.土木香和南马兜铃青木香 不同科属,化学成分迥然不同,药理作用上也有一定的差异, 因此不可作青木香使用'. 中国现代应用药学杂志2005年8门第22卷第4期 参考文献 l1JPetcr~G,HedwallPR..~,ristlJlIIi【-at?idmtlIxicati『lr】:awtypelJf imlmim~cntofurinaryconcentratingability[J].ArchIntern PharmacodynTher,1963,145:334-355. 【2]广西医药研究所等.圆叶马兜铃等种IfI草药的镇痛实验和 临床观察/J,f~[J].中草药通讯,1977,8(10):30. [3]孙文基,张登科,党治稳.天然药物成份提取分离与制备[M]. 北京:中国医药科技出版社,1994.99. [4]陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京:人民卫牛 出版朴,1997,348. [5]王宁生.马兜铃酸的毒性作用[J].中药新药与临床药理, 2001.12(6):394. 6]高发成,瞄j匕.l描法测定汉?f防IIJ5兜铃酸.^的 :I{_【J].1II成药,1994,16(4):44. 『71j:,力银,钱继红.薄:I._l描法测定荚小通及』e制剂IfJ马 兜铃酸^的含量[J].f成药,2001,23(2):147. [8]赵霓,来剑峰,毕开顺.反相离子对色潜法测定青小香中马兜 铃酸A的含量[J].沈阳药科大学,2001,18(2):125, [9]沈君,董黎,祁明馥,等.反相HPLC法测定马兜铃及其蜜制品 中马兜铃酸A的含量[J].沈阳药科大学,1996,13(3): 2l8. [1O]楼之岑,秦波.青木香的研究.常用中药材品种整理和质量研 究[M].北厅编(第三册),1995,145, 收稿日期:2004—10—14 高效液相法测定聚丙交酯微球中醋酸地塞米松的含量 郑晓玲,国强,滕彦,林季建(1.浙江大学附属妇产科医院,浙江杭州310006;2.浙江大学附属第二医院,浙江杭州310006) 摘要:目的建立高效液相色谱法测定醋酸地塞米松聚丙交酯微球含量测定.方法采用ODS柱(250mmX4.6mm,5),流 动相为乙腈:25mmol?L磷酸盐缓冲液(pH3.0)(45:55,V/V),检测波长:240nm.结果醋酸地塞米松在5—30I~g?mL (r=0.9996,n=5)浓度线性关系良好,平均回收率为95.55%,RSD=2.4%.结论本方法操作简便,快速,准确,能很好地 定量测定醋酸地塞米松聚丙交酯微球的含量. 关键词:醋酸地塞米松;高效液相色谱法;聚丙交酯;含量测定 中图分类号:R917.798.1文献标识码:B文章编号:1007-7693(2005)o43l1-02 Quantitativedeterminationofdexamethasoneacetate-loadedpoly(D,L-lactide)microsphe res ZHENGXiao.1ing,GUOQiang,TENGYan,LINJi-jian(1.GynaecologicalHospit口l,MedicalcDUege,ZhejiangUnii— ty,Hangzhou310006,China;2.TheSecondaffiliatedHospitalofMedicalCollege,Zhejiang University,Hanghzou310006,China) ABSTRACT:OBJEC11VETodeterminethecontentofdexamethasoneacetate.1oadedpol y(D,L—lacfide)microspheres.METH. ODTheHPLCmethodwithHypersilCl8column(250ram4.6mm,5m),themobilephaseofac etonitrile-phosphatebuffer(pH3.0) (45:55,v/v),theflowrateof1.0mL?min,,thedetectionwavelengthof240nmandtheovente mperatureof30?wereused.1. SULTSTherangeoflinearrelationshipfordexamethasoneacetate—loadedpoly(D,L—lactide)microsphereswas5—301~g?mL(r = 0.9996.n=5).Theaveragerecoveryofthemethodwas95.55%andtheRSDwas2.4%.CONC LUSIONThismethodcanbe appliedtodeterminationofdexamethasoneacetate-loadedpoly(D,L-lactide)microspheres . KEYW0RDSdexamethasone:HPLC:polylactide:determination 聚丙交酯(polylactide,PLGA)为可生物降解的高分子材 料,于体内可发生降解,以其为材料制成的含药微球注射剂 于体内释药超过1个月,于二氯甲烷,三氯甲烷,二甲基甲 酰胺,乙腈中溶解,不溶于醇,酮,醚等有机溶剂.聚丙交酯 微球的含量测定时常采用的方法有:?用对PL不溶性有机 溶剂直接从微球中萃取0;?用PL可溶性有机溶剂溶解微 球,再用与该溶剂不相}昆溶的溶剂萃取,如水相萃取;?用 溶剂溶解PL及药物,然后用PL不溶性溶剂沉淀PL,过滤或 离心后测定;?用混合溶利溶解药物及PL后直接测定 中国现代应川药学杂志2005年8』J第22签筇4朗 ?法萃取所需时间长,且有时萃取效率不高;??操作均较 烦琐,且?法产生的微小PL颗粒不容易离心沉淀,故溶液带 乳光影响测定;?法中PL及药物共溶于混合溶剂中,但PL 在低紫外波长处有一定的吸收,会干扰测定,若采用HPLC 法就可以消除这些顾虑.采用溶剂挥发法制备了醋酸地塞 米松聚丙交酯微球(DA—PL—MS)用于治疗增殖性玻璃体视网 膜病变,采用HPLC法测定微球中药物的含量,方法简便, 快捷. 1仪器与试药 ChinJMAP,2005Augus1.Vo1.22No.4.311