5 血清尿酸的测

5 血清尿酸的测 血清尿酸的测定 实验目的 1,掌握磷钨酸还原法测血清尿酸的原理、操作及注意事项。 2,进一步熟悉分光光度计的使用以及曲线的绘臸。 实验原理 去蛋白血滤液中的尿酸在碱性溶液中被磷钨酸氧化成尿囊素及CO，磷钨酸被还原2成钨蓝，可用分光光度法进行测定。 尿酸 + 磷钨酸 ? 尿囊素 + CO + 钨蓝 2 在一定条件下，蓝色强度与尿酸浓度成正比。 磷钨酸生色反应易有混浊现象，可用碱性试剂消除，且使反应颜色加深，多用NaCN， 但NaCN有剧毒。现多用NaCO代替NaCN消除混浊，虽灵敏度稍低，但呈色稳定，23 临床广泛采用。 仪器设备 722S型可见分光光度计、吸量管、试管、 试剂 标准尿酸,0.025mg/mL,、血清,待测样本,、蛋白质沉淀剂、14%NaCO、磷钨23酸、HO 2 实验步骤 1?? 血滤液的臸备: 取0.5mL血清加蛋白质沉淀剂4.5mL混匀，静臵10min，离心,3500rpm，10min,， 取上清，得到血滤液(待测样本)。 1 2. 取干净试管7支，用记号笔编号,0、1、2、3、4、5、待,，按下操作,单位:mL, 试 0 1 2 3 4 5 待 管 试 剂 标准尿酸 - 0.5 1 1.5 2 2.5 - 血滤液 - - - - - - 3 蒸馏水 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 14%NaCO 1 1 1 1 1 1 1 23 混匀，静臵5min 磷钨酸 1 1 1 1 1 1 1 加入磷钨酸后迅速混匀，静臵15min后，以0号管调零，使用分光光度计于660nm处比色，读取各管吸光度。 计算 标准曲线的绘臸:以0,5管的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘臸标准曲线。 1.标准曲线法:根据标准曲线查得待测管吸光度值,按下列计算血滤液,待测样本,的浓度。 C(mg/mL),C×1.67×10 C为直接从标准曲线上读得的待测管浓度值。 待查查 2.对比法 VA待标 VA标待C(mg/mL),×0.025××10 待 其中:V为标准管加入标准尿酸的体积, 标 V为待测管加入的血滤液的体积, 待 实验结果 分别用上面两种计算待测样本,血滤液,的浓度。 临床参考范围:男250-700mg/mL 女150-600mg/mL 2 注意事项 1. 各试管在加入试剂前一定要编号，加入试剂时按表操作，确保每管加样量的准确。 2,加入磷钨酸试剂后，应立即混匀，混匀速度直接影响最后实验结果的准确性。 3,在使用分光光度计时切不可将试剂溅入仪器。 临床意义 尿酸是嘌呤、核酸和核蛋白的代谢产物，因此，体内尿酸含量不正常可以提示上述物质代谢的障碍。尿酸含量的增高见于:痛风、甲状腺机能减退，恶性肿瘤、肾功能衰竭等。 3 4 5