人leptin的研究进展

第一军医大学学报 �� � 年第 � 卷第 � 期增刊 人 !∀#∃ %& 的研究进展 王乐援 ’, 王小 宁 ’, 王 乐然 ’∋’第一军医大学分子免疫研究所 , 广 东 广州 ( � ( () � 解放军总后勤部 门诊部 , 北 京 � � � ∗∗ + 摘要 ,肥胖是一种由食欲和能量调节紊乱引起的疾病 , 与遗传 、环境 、膳食结构等多种因素有关 , 其中基 因是主要的决定 因素 。 最近人和小鼠的肥胖基因被相继克隆 , 发现它能在脂肪组织特异表达 。 本文就肥胖基因编码的蛋白 一!∀# ∃%& ∋瘦蛋 白+对机体的作用作一综述 。 关钮词 ,痰蛋白 )肥胖基因 )脂肪代谢 中图分类号 , −.∗( 文献标识码 ,/ 文章编号 , � �� 一�( ∗∗ ∋� �� + � (一�� . .一。 近 �� 年来 , 肥胖现象越来越普遍 。人们大多认为 肥胖是由饮食过度造成的 , 而不认为是一种疾病 。 然 而研究表明 ,肥胖是 由特定的蛋 白因子引起的一系列 进食调控和能量代谢紊乱的疾病 , 其发病过程非常复 杂 。 目前 , 已知肥胖与糖尿病 、心血管疾病 、某些肿瘤 以及睡眠 一 呼吸紊乱等疾病有明显的相关关系 ,肥胖 病已取代了营养不 良和感染所引起的疾病而一跃成 为危害人类健康的主要疾病 。 可见 ,肥胖已不仅仅是 影响人体形象的问题 , 而是成为一种流行病 , 威胁着 全人类的健康 0 。 1( � 年 , 2& 娜23 等发现一株近亲繁殖 的小 鼠食 欲亢进 , 过度肥胖 , 体重达正常小 鼠的 4 倍 , 并且患有 糖尿病 。研究表明这种小 鼠的肥胖是由一种基因发生 了隐性突变所致 , 遂将此基因命名为肥胖基因 ∋56 7∀ &∀ +。 1 .∗ 年 , 89! ∀: ;& 等运用交叉灌流实验证明 , 某种与 56 基因有关的血源性因子参与调节动物饮食 和代谢 , 并参与肥胖形成 。 11� 年 , <=% ∀ > : ;& 报道了 能够引起小 鼠肥胖的 ( 种单基因突变 , 分别是 。比3∀ ∋比+、> %;6 ∀∃∀3 ∋>6 +、?;∃ ∋?;+ 、加66≅ ∋叻+和 ; 7 5 9∃% ≅∀ !! 5 Α ∋/≅+ 0�Β 。 1 1Χ 年 , 洛克菲勒大学的 �五;& 7闭等利用分子 生物学方法成功克隆了小 鼠和人的肥胖基因 ,并且将 这种肥胖基因所表达的蛋白命名为 !∀ Δ∃%& ∋瘦蛋 白+ , 给 56Ε 56 小 鼠进行肌肉注射 印∃%& , 能够明显抑制食 欲 ,促进代谢 , Χ 周后小 鼠脂肪减少将近 .( Φ , 而且没 有明显 的副作用 。这一发现从分子水平阐明了造成肥 胖的基因因素 ,并给肥胖的治疗带来了光明的前景 。 ! !∀# 血 甚因 Γ 5 6 基 因的结构 11 Χ 年 , ΗΙ ;& 7 等04 Β首次从先天性肥胖 8 ( .ϑ <Κ + 。6了56 小鼠第 Κ 染色体上发现 56 基因 , 并将其克隆 。 克隆的 56 基因全长 � 1�� 6# , 其开放读框为 (�! 6# , 收稿 日期 , ��� 卜 � 一 ( 作者简介 , 王乐授 ∋ 1. 今 + , 女 , 河北曲阳人 , 1 1∗ 年毕业于第四军医大 学 ,本科 , 主治医师 , 现为第一军医大学在读研究生 , 电话 ,�� 。·∗ ( Χ ∗ Χ4 编码脂肪组织特异性 Χ 355 6# : Λ Μ / , 4 , 非编译区长 达 4 .�� 6# , 翻译成 Κ . 个氨基酸的蛋 白质 。 他们研 究 了两种 不同基因变异的先天肥胖小 鼠 , 一种 是 8 (.ϑ <Κ + 5 6 Ε 5 6 , 另一种是 Ν Μ? 8ΟΠ 一 Θ Ρ ;Π 5 6 ΣΤΕΥ 6Σ Τ , 分别称之为 56 !和 。6 Σ 小鼠 。他们发现在 56 !小鼠第 Κ 号染色体有 56 基因的突变 。 研究发现 , 尽管 。6! 小 鼠脂肪组织 中 !∀# ∃%& %& Λ Μ / 的表达水平 比正常小 鼠 高近 �� 倍 , 但由于其 56 基因编码序列的第 �( 个密 码子发生突变 , 由 8 突变为 ς ∋即由编码 /= 7 的 8Ω / 变成编码终止子 ς Ω / + , 致使正常 !∀# ∃% & 表达缺失 , 抑制进食的能力降低 , 能量调节紊乱而发生肥胖 。 在 另外一种先天肥胖小鼠 56 Σ , 56 基因编码序列正常 , 但启动子序列出现突变 , 脂肪组织无 56 : Λ Μ / 和 !∀#∃%& 生成 ,造成肥胖 。 Π! ∀: ∀& ∃等闭将人类 56 基因定 位于 .Ξ4 Γ 4 , 由 4 个外显子和 � 个内含子组成 , 编码 Κ . 个氨基酸 。 人 5 6 基因 ( , 端含 ∋Ψ Ω +Κ 8/ Ψ/ ΨΨ Ψ ∋Ω Ψ+ 1 的双核昔酸重复 Ψ / Ψ/ 盒样序列和顺式作 用调节元件∋包括 4 个拷贝 Ω 8 盒 , 一个/# 一� 结合点 及 88// ΨΕ 增强子结合蛋白质结合位点 +。 序列分析 表明 , 大鼠的 。6 基因与小鼠的 。6 基因具有 Φ Φ 同 源性 ∋核酸水平及蛋白质水平 + )与人的 56 基因相 比 , 其同源性分别为 ∗Χ Φ ∋核酸水平 + 和 ∗� Φ ∋蛋 白质水 平 +。 1 1. 年 , 剑桥大学 Ζ 5 & ∃; 7 9 ∀ 0,Β 等报道了 � 例有 血缘关系的超级肥胖儿童 , 第 次在人类发现 !∀# ∃%& 编码基因的病理性变异 。 他们的血清 !∀# ∃%& 水平很 低 , 测定其 56 基因编码序列 , 发现第 4 4 个密码子 处缺失 了一个 Ω , 导致表达 产物中 4� 位甘氨 酸 ∋Ω !≅ +后直到终止子之间的一段 Χ 个氨基酸的误译 。 这 � 名儿童都是 5 6ΕΥ6 纯合子 , 出生时体重均正常 , 但不久即食欲亢进 , 体重猛增 , 伴随有高胰岛素血症 , 与 。6Ε 56 小鼠表型十分相似 。 其家族中携带 Υ 6 基因 的杂合子 ∋包括 Χ 位父母和其中 名儿童的姊妹 +均 无明显肥胖表现 。 这与 曲Ε。6 小 鼠隐性遗传规律是一 致的 。 目前 56 基因突变与人类肥胖发生的直接关系 尚需要进一步的研究加以证实 。 第一军医大学学报 �� � 年第 � 卷第 � 期增 刊 Γ � 5 6 基因的表达和调控 全身皮下脂肪 、网膜脂肪 、腹膜后脂肪和肠系膜 脂肪组织均有 56 基因的表达 , 其中皮下脂肪的表达 最高 , 其他组织器官如脑 、心 、肺 、肝 、肾 、胃 、肠等均未 发现有表达 。 人和小鼠的 56 基因表达产物 一!∀# ∃%& 均 由 Κ . 个氨基酸残基组成 , Μ 端有 � 个氨基酸残基 构成的信号肤 , 表明 !∀# ∃%& 是一种分泌蛋 白。 血液循 环中的成熟肤为 Χ Κ 个氨基酸 , 表观相对分子质量为 Κ �� � ,结构和功能分析表明 , !∀# ∃%& 第 �Κ[ Χ � 个氨 基酸残基组成的结构域对于发挥 !∀#∃ %& 的生理功能 至关重要 。 从人 !∀ #∃ %& 氨基酸序列演绎 出的相对分子 质量为 Κ �� Χ , 从人血清中分离出的 印∃%& 测其相对 分子质量为 Κ � � Κ 士1 , 说明 !∀# ∃%& 在翻译后没有糖基 化等修饰过 程 。 用放免法测 定正常人和 小 鼠血 浆 !∀#∃ %& 含量为 ∋ 1 Χ土 � +Δ7Ε : !和 ∋� � ( . 土 ( +#留: ! , 表 现出明显的种属差异 , 其意义尚不清楚 。 。6 基因的表达 与脂肪细胞的分化程度密切 相 关 , 完全分化的 4Ψ4 一 脂肪细胞可高水平表达 56 : Λ Μ / 。这种分化依赖性的表达可能与 88 / /ΨΕ 增强 子结合蛋白 。∋8 尼ϑ #;+ 转录因子有关 0Κ 。 56 基因的 : Λ Μ/ 表达也受激素 、寒冷 、运动等 许多因素调节 , 其中激素对 56 基因 : 丑Μ / 表达影响 最大 。 早期研究发现进食可增加脂肪组织 56 : Λ Μ / 和血 !∀# ∃%& 水平 , 禁食则引起相反的变化 , 重饲可逆 转禁食引起的变化 。在培养的脂肪细胞中加人胰岛素 能上调 56 基因的表达 , 静泳注射葡萄糖 4� : %& 以 后 , 。6 : 丑Μ / 水平升高 � 倍以上 。 这些结果表明 ,胰 岛素和葡萄糖能促进小 鼠 56 : Λ Μ / 的高表达 , 揭示 胰岛素在转录水平调节 56 基因的表达 。 体外研究证 实 0.∴ , 糖皮质激素可增加 56 : Λ Μ / 的表达和 !∀# ∃%& 的分泌 , 而增加儿茶酚胺类 邵 肾上腺素能受体激活 剂则减少 56 : 丑Μ / 的产生和 !∀ Δ∃%& 的释放 。 其机制 是儿茶酚胺类通过兴奋性 Ω 蛋白通路激活 #] / , 进 而抑制脂肪细胞 56 基因的表达 , 使 !∀# ∃%& 释放减少 。 整体动物实验中也发现 了 郎 肾上腺素能受体激动 剂 ϑΛ⊥ 4 ( 4 / 可以降低小 鼠血浆 !∀# ∃%& 水平 。 可见 , 儿茶酚胺类 阶 肾上腺素能受体在 !∀# ∃% & 基因表达及 合成释放调节中起重要作用 。这与地塞米松增加人体 内 !∀ #∃ %& 表达的结果一致闭。 还有研究者调查了甲状 腺功能对 !∀#∃ %& 水平的影响 , ∋扮。廿。 等 01Β 调查显示短 期高甲状腺功能对男性 !∀# ∃% & 水平无影响 )而 _; %Π ;_% 等〔!�Β 则发现甲减病人 !∀# ∃%& 水平下降 。 这些结果表 ’ 明 , 正常甲状腺激素水平对于 56 基因表达是必需的 。 通过靶细胞膜上 的受体及相应的信号转导体系而实 现的 , 因此搞清其受体是阐明其作用机制的关键 。 1 1 ( 年底 ,从;7% %; 等‘川克隆了 !∀ Δ∃%& 受体∋!叩∃%& 一Λ + , 大 鼠 >6 基因编码 !∀# ∃%& 一 , 对 此基因作图发现 , 其长 为 ( !55 6Δ , 编码 Κ� 个氨基酸 , 位于第 Χ 号染色 体 。 而在人类位于染色体 2# 4 〔川 。 序列分析表明 , 人 的 !∀# ∃%& 一 由 Κ ( 个氨基酸残基构成 , 与小鼠有近 ∗� Φ 的同源性 , 其中第 一�( 氨基酸是负责 !∀# ∃%& [Λ 分泌到细胞膜上的信号肤 )第 �Κ 、∗ Χ 氨基酸组成胞 外 区 ) 第 ∗ (、∗ 4 Κ 氨基酸形成跨膜区 )第 ∗ 4 .一 Κ ( 氨基酸形成胞内信号传导区 。!∀# ∃% & 一Λ 的胞外区 、单一 的跨膜 区和胞内区 4 个各区段具有相对保守的结构 特征 , 在信号传递中发挥不同的作用 。 其中胞内区含 有 � 个相对保守的结构域 , 个可以激活 Τ;& 93 激酶 , 另 个可以和转录蛋 白的激活因子相互作用 , 借以调 节转录 。 此外胞内区还有不少的丝氨酸残基 , 是潜在 的磷酸化位点 , 在介导胞内信息传导中起重要作用 。 这些结构特点提示 , !∀# ∃% &一 可 以直接参与并启动脑 内信号转导 , 调节细胞功能 。 目前 已知的 !印∃% & 受体 有 Κ 种类型 , 其中最主要的是 Υϑ 一Λ ;∋Υ ϑ 一Λ[ 3+ 、Υ ϑ [ Λ6 ∋Υϑ Γ Λ Γ ⊥+ 两种 。 Υ ϑ 一Λ 一Ν 比较短 , 广泛分布于许多 组织 中 , 小鼠尤以脉络丛和软脑膜处分布密集 。 Υϑ [ Λ 一⊥ 比较长 , 含有胞内信号传导 区 , 主要分布于下丘 脑中能表达 Μ #⎯ 的细胞表面。 >6Ε>6 小鼠的 Υ ϑ一⊥ 因为发生了异常拼接而失去信号传导功能 。后来的研 究证明 ∃ 4 , 小 鼠糖尿病基因 >6 正是编码 叩∃%& 受体 的基因 。 !∀Δ∃%& 与 !∀#∃ %& 受体结合后 , 其受体后机制是 通过 Τ/] Γ ΝΨ / Ψ 通路实现其调节功能的 0!Χ 。 在 !∀# ∃%& 一Λ 受体的 Κ 种剪切形式中 , 除 !∀# ∃%& 一Λ∀ 为可溶性受体外 ,其他几种形式均为单一跨膜蛋白质 , 且在 !≅Ν ∗∗1 之前的 8 端序列是相同的 ,但胞内序列不 同 。 恻%& Γ Λ ; 主要存在于脉络膜 ) !∀#∃ %& 一Λ6 主要存在 于下丘脑 。 除此之外 , !∀# ∃%& Γ Λ 6 在皋丸组织 , !∀# 血一∀ 在脂肪组织 , 心脏及辜丸组织存在低水平的表达 。 由 于脉络膜及下丘脑存在高水平表达的 !∀# ∃%& 一 , 用化 学物质诱发下丘脑受损后可致动物食物摄取增加 ,将 低剂量 !∀# ∃%& 导人侧脑室或第三脑室可使 56 Ε56 肥 胖小鼠的体重减轻 , 这些均说明 !∀#∃ %& 的作用靶点在 大脑 。 !∀ #∃ %& 调节能量代谢与体重 的神经机制主要可 能由两部分构成 , 一是黑皮素 Χ ∋: ∀ !;&5 ∀ 5 =∃ %& Χ , Ζ8 Χ + 受体系统 )二是神经肤 ⎯ ∋& ∀ 9= 5 Δ ∀# ∃% >∀ ⎯ , Μ’2, 钓递质 系统 , 分别在高和低 ⊥α #Ψ & , 水平时发挥作用 〔” · ΚΒ 。 � !∀ #∃%& 受体基因 !∀# ∃%& 是一种多肤类内分泌因子 , 其作用必然是 4 !∀ Δ∃%& 主要的生理作用 从 1 1Χ 年发现至今 , !∀# ∃%& 的研究工作已经取得 了很大的进展 , 但是 目前人们对于 !∀#∃ %& 的认识仍然 第一军医大学学报 � �� 年第 � 卷第 � 期增刊 很局限 。 随着研究的进展 , 人们发现 , 叩∃%& 的生物学 效应并不像人们最初认为的那样具有单一而明显 的 “抗肥胖 ”作用 。 !∀# ∃%& 的作用不仅仅局限于调节进食 量 、调节脂肪贮存量和维持能量平衡 , 而且在生殖系 统 、造血系统和其它神经 内分泌系统如甲状腺 、肾上 腺轴等都有一定的作用 。 4 Γ 对体质童和脂肪稳 态的调节 很早人们就认识到 , 机体脂肪含量的调节是一个 负反馈过程 , 即随着机体脂肪组织含量的增加 ,脂肪 组织将释放某种物质 ,后者作用到下丘脑抑制摄食以 减少能量来源 , 同时促进能量代谢以增加脂肪的消 耗 。 实验表明给 56Ε 56 小 鼠注射基因重组 !∀#∃ %& , 其体 质量明显下降 〔 .Β 。 这个结果在多个实验室得到了验 证 。 每天给小 鼠腹腔注射 !∀#∃ %& , Χ > 以后 , 比沁6 小鼠 的食量 较对照 组下 降 Κ� Φ , Χ 周后 体质 量 下 降达 Χ� Φ 。 机体脂肪体积的减少引起你体质量降低的直接 原因 。 同时 , 小鼠的活动增加 , 代谢加强 , 血浆胰岛素 和血糖水平降低 。 正常小鼠给以同样治疗 , Χ 周后体 质量下降了 � Φ 。 这说明 , 址#∃ %& 对于肥胖小鼠和正 常小鼠的脂肪都有明显的下调作用 。 8 ; : Δ?% ∀! > 等发 现 , 直接向小 鼠下丘脑注人蛋 白 , 其抑制食欲和减肥 效果更加显著 。 说明 !∀#∃ %& 的主要作用部位很可能位 于下丘脑内 。现在可以肯定 , !∀ #∃ %& 就是脂肪组织所释 放的反馈性抑制脂肪合成的主要激素 ,在调节机体脂 肪和体重稳态中具有重要作用 。当机体摄人热量增多 脂肪储备增加时 , !∀#∃ %& 分泌增加 , 它经血液运输至下 丘脑 , 产生抑制食欲 、减少摄食 、促进 能量代谢等效 果 ,最终降低体重减少体内脂肪含量 , 这些作用可能 是 !∀#∃ %& 最重要的生理功能 。 !∀Δ∃!& 抑制摄食和食欲 的作用与它对下丘脑神经肤 ⎯ ∋Μ#均能神经元有关 , 因后者具有促进摄食的作用 。 !∀#∃ %& 受体存在与下丘 脑的弓状核 、室中间核 、室背侧核等核 团 , 与 Μ#⎯ 神 经元分布相同 , 而且二者在同一神经元表达 , 外源性 !∀#∃ %& 可以抑制Μ# ⎯ 的合成及Μ# ⎯ 神经元活动 。 此 外与 Π Π][ ∗ 能神经元也有关系 。 !∀#∃ %& 促进能量代谢 的作用与下丘脑 一 垂体 一 甲状腺轴有关 , 它可使 Ψ4 和 ΨΧ 的血清水平升高 。 4 Γ � 可能参与生殖功能的调节 遗传性肥胖的 比Ε。6 小 鼠伴有生殖能力低下 , 因 此当 !∀# ∃%& 被克隆后立 即开始了它对生殖功能的研 究 , 已有的文献表明它对人和鼠的生殖功能都有促进 作用 , 在小鼠 , 外源性 !∀# ∃%& 可 以促进雌性子宫内膜 和输卵管上皮的增生发育 , 使子宫 、卵巢和输卵管的 重量增加 , 血清中黄体生成素 ∋⊥β +水平升高 。 在雄 性 比陌6 小 鼠 , !∀# ∃%& 有 意义 地 升高卵 泡 刺 激 素 ∋<Νβ + 水平 , 增加皋丸和输精管的重量和精子 的数 量 。 !∀# ∃% & 在生殖调节中另一重要作用是它对青春期 发育的调节 , 给幼 鼠持续注射 !∀#∃ %& 可使其提前进 人 发情期 , 人在进人青 春期时 !∀# ∃% & 的血清水平显著升 高 , 因此有人提出 !叩∃%& 是机体进人青春期的重要启 动信号 0, ∗〕。 4 Γ 4 具有刺激造血功 能的活性 !∀#∃ %& 受体的细胞内 >5 : ;% & 与细胞介素受体类 似 , 因此是否它对血细胞功能产生影响也引起注意 。 现已经发现 , 脾 、胸腺等造血器官有 !∀# ∃%& 受体表达 , 注射外源性 !∀# ∃%& 可以促进造血干细胞增生 , 并引起 血液中淋巴细胞数量增多 。 4 ΓΧ 对甲状眯 、 肾上腺轴的作用 !∀# ∃%& 与胰腺 、肾上腺 、性腺 、 甲状腺等多个内分 泌腺密切相关 。 !∀# ∃% & 是胰腺胰岛素分泌的抑制剂 , 与 体内脂肪含量 、空腹血浆胰岛素水平正相关 , 而胰岛 素可调节 !∀# ∃%& 的分泌 。糖皮质激素是 !∀# ∃%& 分泌的强 烈刺激物 , 中枢性给予 !∀ #∃ %& 可刺激肾上腺皮质功能 , 而外周性应用 !∀# ∃%& 则显著抑制皮质激素的分泌 0!1 川 。 Χ 展望 经过许多实验室的共同努力 , 目前对 56 基因及 其产物的结构 , 功能和调控均有了一定的认识 , 但仍 有若干问题有待深人研究 。 例如 ,许多激素特别是胰 岛素 、糖皮质激素 、甲状腺素以及垂体轴在生理和病 理状态下对 !∀#∃ %& 的表达和调控有什么变化χ !∀# ∃%& 除了对维持人体内环境稳定 、食欲 、能量平衡 、脂肪成 熟和消耗以及调控胰岛素活性之外 , 还对人体生命的 哪些主要系统或功能 ∋如生殖系统 、胎儿及青春期 的 生长发育等 +有着重大影响 χ在人体内 , !∀# ∃%& 基因是 否是调节肥胖产生的最关键的因素χ是否还有其它蛋 白因子参与肥胖产生的调节 , 它们间相互关系如何 χ 人们相信 , 随着对 !∀#∃ %& 和肥胖发生的深人认识 , 人 们对肥胖的控制和治疗将进人一个新的阶段 。 参考文献 , 【 δ% !!∀∃ δ 8 , 压∀∃Η δ β , 8 5 !>% ∃Η Ω / Γ 8山> ∀ !%& ∀3 ?5 = 6∀; !∃Ι≅ Α∀ %7Ι ∃ 〔ΤΒ Γ Μ α&7! ΤΖ∀> , 1 1 1 , 4 Χ ∋4+, Χ � .一4 4 Γ 【� Β 许婉宁, 丁宗一 肥胖基 因表达研究的方法学及进展【Τ! Γ 中华儿 科杂志 , 1 1 1 , 4 .∋ + , . � ( 一. · 04 Β 及;& 7 ≅ , Λ 叱。Π; ΛΓ Ζ; ?∀ % Ζ , ∀ 忿;! Γ Δ 5 3%∃% 5 &;! ∀ !5&%& 7 5 ?∃Ι ∀ : ΥςΝ∀5 6∀ 3∀ 7 ∀ &∀ ;& > %∃3 6切: ;& Ι5 : 5 !57ς ∀ 0Τ〕Γ Μ ; ∃⊥叮∀ , 1 1 Χ , 4 . � ∋� + , Χ � ( 一4 Γ 0Χ Β 8 !∀: ∀&∃ ], 8; 6= 5 ! Ν , #∀ !!59ε φ , ∀‘ ;! Γ 2&>% Π; ∃%5& ?5= !%&Ο ;7 ∀ 5 ? ∃Ι∀Ι切叮 ;& � ϑ 7∀&∀ =∀ 7% 5& Α% ∃Ι ∀ε ∃= ∀: 已。比 3%∃≅ 0ΤΒ Γ Ρ %; 6∀ ∃∀3 , 1 1 Κ , 41 ∋Κ+ , Κ ∗ . 一1 � [ 0( Β Ζ 5 &∃; 7ς ∀ 8Ψ , <即叫 ( , _刀!%∃∀ Ι∀;> Τ# , ∀ ∃ −2 · 8 5 & 7∀&% ∃;! !印∃%& > ∀?%Π %∀ & Π≅ ( ;3 , 祀 %; ∃∀> Α% ∃Ι 3∀ _ ∀=∀ ∀ ;= 】≅Γ 5&3∀ ∃ 5 6∀ 3%∃≅ %& 6切: ;&3∋下转 ∗ . 页 + 第一军医大学学报 �� � 年第 � 卷第 � 期增刊 ∗ . 〔∗ Β Ν%∀ ; /, δ ;& 7 Τ从肋!5 ∃∃; <, ∀ 名;⊥ Ζ5& 5Π ≅∃ ∀ ∀ Ι∀ : 5 ∃;Π ∃% ∀ ; & > ;Π ∃%_;∃ %& 7 ?;Π ∃5 = 7∀&∀ ∀ ε#=曰铝 %5 & %& >9 ∀ ∀> %& ∀& >5 ∃Ι∀ !!; ! ∀∀ !!3 6≅ 2⊥ 一 ;& > 山: 5 =&∀8=ΥΝ %3 ?; ∀ ∃5 = 0Τ Β Γ Τ ! !!&9&5 !, 1 1 � , ΧΧ ∋3+, 4 � 4 Χ 一∗ Γ01 Β φ %!!%7 ∀= #Ζ , Ψ ∀=Ο∀ !∃; 9 6 民 ⊥Ρ ∃Σ Ζ Γ #=5> 9 ∀∃%5 & 5 ? :5 Γ 5Π ≅比 比∀ [ :5 ;比=; Π∃;& ∃ #= 5∃∀% & 一 6≅ %& &;!& ∀> 3≅& 5 _% ;! ∃%3 39∀ ;& > Π9 !∃ς =∀> 3≅Ρ 5 _ %;Π ≅∃ ∀Ν 〔ΤΒ Γ Τ恤叻 9 & 5 !, 1 1 � , Χ 1∋� +, . � � 一. 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