果酸脂质体的制备、检测及应用

第五期 二oo二年 十 月 香料香精化妆品 FLAVoUR FRAGRANCE CoSM ETICS NO．5 October，2002 果酸脂质体 的制备 、及应用 穆筱梅 钟振声 陈焕钦 (华南理工大学化工学院。广州 510640) The Preparation and Testing of Alpha--Hydroxy ● ● l - - 一 ● ⋯ ● l ● ● Acid。’c0ntainin~Liposome and its Application M u Xiaomei Zhong Zhensheng Chen Huanqin (College of Chemical Engineering。South China Univ．of Tech．，Guangzhou 510640) Abstract The alpha—hydroxy—acid—containing liposome was prepared via reversed phase evaporation with soya lecithin．The structure of the liposome was observed by transmission electron microscopy，showing that the diameter of liposome was in the range of 100—200nm ．The effect of concentration of alpha—hydroxy—acid on encapsulation rate and the effect of sta— bilizer concentration on liposome stability were investigated．The best encapsulation rate，which reached 30％ ，was ob— tained when the concentration of alpha—hydroxy—acid was 0．3mg／m1．Stable liposome was obtained when the concen— tration of propanediol was 5—15％ ．The application of the liposome in cosmetics was alSo studied． Key words：Alpha—hydroxy—acid Liposome Encapsulation rate Stabilizer Cosmetics 摘要 以大豆卵磷脂为包封材料 ，用反相蒸发法制备果酸脂质体 。并用透射电子显微镜表征 了其形态结构 ，证实其直径在 100纳米 200纳米之间。研究 了果酸浓度对包封率 ，稳定剂浓度对脂质体稳定性的影响。结果表 明 ，果酸浓度 为0．3 mg／ml时可 以得到较好的包封率 ，丙二醇的适宜浓度是 5％ 一15％，最终将脂质体应用于化妆品中，并证 明是可行的。 关键词 ：果酸 脂质体 包封率 稳定剂 化妆品 60年代 Bangham 在 电镜下发现⋯：当磷脂 分散在水中时可以形成脂质体(1iposome)。它是 一 种多层囊泡的结构 ，而且每一层为脂质双分子 层 ，每层之间被水隔开。脂质体的直径从几十个 纳米到 几十微 米之 间。 由于脂质体的结构类似于细胞 ，所以又称为 人工生物膜(artificial biological membrane)。它 作为药物载体的研究 已有很多-2 J。近十年来 ，脂 质体在化妆品方面的研究正蓬勃发展。相 比较于 传统化妆品，脂质体化妆品与皮肤有超强的亲和 力 ，缓释性，以及安全性。脂质体化妆品在国外已 经比较广泛，1986年 Dior开发了第一个商品名 为 Capture的脂质体化妆品，而国内在这方面的 研究还处于初级阶段。 收稿日期 ：2002—02—28 果酸是一类从柠檬 ，甘蔗 ，苹果等水果中提取 的 a一羟基酸 (AHA)有较强的保湿作用。同时 作为剥离剂使皮肤老化细胞迅速剥离 ，促使细胞 分化 ，增殖，产生新的细胞 ，皮肤因此而光滑【3~ 。 本文以大豆卵磷脂为原料，对果酸进行包封 ， 用反相蒸发法制备 了果酸脂质体。探索实验条 件 ，并且测定了产物的包封率和适宜的稳定剂浓 度。并最终将其应用于化妆品配方 ，得到积极的 结果 。 1 实验部分 1．1 实验仪 器及试剂 $52紫外分光光度计(上海棱光公司)；JEOL 一 100CX 电子 显 微 镜 (日本 电子 光 学 公 司 )； ZFQ81旋转蒸发仪(上海 医疗器械厂)；DL一360 — 25 — 维普资讯 http://www.cqvip.com 第五期 果酸脂质体的制备、检测及应用 总第七十四期 超声仪(浙江海天仪器厂)；1L—SFE超临界萃取 器(广州轻工研究所)；GL一20B超速离心分离机 (上海安亭科学仪器厂)；HP一1100高效液相色 谱(美国惠普)。 大豆卵磷脂 (上海伯奥生物科技公司)，其他 化学药品均为 CP级 以上。 1．2 实验方 法 1．2．1 脂质体的制备【5 J：大豆卵磷脂和胆固 醇以 1：1的摩尔比加入到 50ml茄形瓶中，加 3ml 氯仿使其溶解 ，减压蒸发氯仿 ，脂质在瓶 内壁形成 一 层薄膜 ，再加入 3ml乙醚 ，溶解脂 质膜后 ，加入 lml含果酸的磷酸缓 冲液 (PBS)形成两相体系， 然后在超声仪上超声处理 4min，将此混合物在旋 转蒸发仪上减压蒸发，以除去有机溶剂直至形成 凝胶，继续减压 5min，形成水性悬浊液 即是脂质 体 ，继续在蒸发仪上干燥 5—10min，进一步去除 残留的有机溶剂，最后充氮气至乙醚味消失。 1．2．2 脂质体的显微形态鉴定：采用负染法 染色后【6l，用透射电子显微镜观察并拍照。 1．2．3 包封率的测定【7 J：用超速离心分离机 将脂质体分为两部分 ，然后分别测定离心上清液 和沉淀的紫外吸收，都以空白脂质体作为对照 ，按 下式计算包封率：包封率 (％)=离心沉淀 A34o／ (离心上清夜 A34o+离心沉淀 A34o)X 100％。 1．2．4 稳定剂浓度的测定 ：将脂质体加入不 同浓度的丙二醇溶液中，然后分别放置在冰箱(一 10℃)，40℃烘箱和紫外灯下各 24h，观察是否有 沉淀来判断其稳定性。 2 结果与讨论 2．1 果 酸脂 质体的显微 形 态结构 图 1是反相蒸发法制的的脂质体的透射电镜 照片，可见所制备的脂质体是一种球形结构 ，直径 大多数在 100～2O0纳米之间，与文献报道的其它 脂质体相似，达到了预想的要求 。 2．2 果酸脂质体的包封率与果酸浓度的关系 包封在脂质体中的物质量与其总量之比称为 包封率。脂质体的包封率越高，其效果越好。因 此包封率的测定是脂质体质量评价的一个重要指 标 。 褂 辅 圈 图 1 脂质体透射电镜照片(3万倍) 果酸 的浓 度(mg／m1) 图 2 果酸的浓度与包封率的关系 图2为本研究测定得到的果酸浓度与包封率 的关系。从图中可以看出，随着果酸浓度的增大， 包封率是逐渐增加的，但是当果酸的浓度高于0．3 mg／ml时。包封率的增加不明显。所以果酸的适 宜浓度应 该是在 0，3mg／ml左右 ，其包 封率 为 30％ 。 2．3 丙二 醇对果酸脂质体稳 定性 的影响 脂质体的稳定性是另一个重要的评价指标， 它在很大程度上决定 了脂质体的存放和使用期 限。为了增加脂质体的稳定性 ，通常要加入稳定 剂。本实验用丙二醇作为稳定剂 ，是因为它常作 为化妆品的组分和防腐剂。在不同的丙二醇用量 下 ，果酸脂质体的稳定性表现出较大的差异。有 关实验数据见表 l，从 中可以看出，丙二醇作为稳 定剂的最佳浓度范围是 5％～15％ 表 1 脂质体稳定剂的测试结果 丙二醇浓度(％) 0 5 10 l5 20 25 30 40 50 测 40℃ 略有沉淀 无 无 无 无 略有沉淀 沉淀 沉淀 沉淀 试 条 紫外线 无 无 无 无 略有沉淀 略有沉淀 沉淀 沉淀 沉淀 件 冷冻 略有沉淀 无 无 无 略有沉淀 沉淀 沉淀 沉淀 沉淀 一 26 — 维普资讯 http://www.cqvip.com 香料香精化妆品 二oo二年十月 2．4 脂质体在化妆品中的应用 脂质体在化妆 品中作为有效组分的传递体 系，可将一些皮肤难于吸收的物质带人皮肤深层 ， 并可降低某些物质的刺激性 。Suzaki[8 J Lauten— schlager[9— 0j)和 Hayward[ J等人对脂质体在化 妆品中的应用作了详细的研究。 脂质体的特殊结构决定了在配制含有脂质体 的化妆品时，较其它产品的制法有所不同。首先 脂质体会受到其他组分相容性的限制，例如表面 活性剂 ，高离子强度的物质，吸水性强的溶剂 ，这 些物质都会对脂质体有较大的影响，改变脂质体 的稳定性，所以这些物质应尽量少用。其次，天然 磷脂容易被氧化，可配人 Vc，VA，VE或它们衍生 物，也可添加 BHA和 BHT来抗氧化。而且阳光 也会使磷脂变黑 ，产品中最好加入紫外线吸收剂。 脂质体在添加时，应避免剧烈的搅拌混合，最 好在最后阶段并且温度低于 40℃时添加比较安 全。若脂质体化妆品在 40℃下稳定保存 3个月， 二次冷冻一熔化循环粒子的大小不变，可认为该 产品是稳定的ll2 J。 下面是我们实验中设计的乳液配方 (质量分 数％)： 硬脂 酸 2 十六醇 1．2 单甘酯 1．5 PEG一2一十六醇醚 0．5 丙二醇 6 棕榈酸异丙酯 2 脂质体 15 BHT O．O5 防腐剂、香精 、 适量 水 — — 100 紫外线吸收剂 经过稳定性考察，证明是稳定的。 3 结论 1．本文采用高纯大豆卵磷脂 ，运用反相蒸发 法制备得到果酸脂质体 ，简单。国内公开文 献未见相同的研究报道。 2．通过负染电镜法，证 明了脂质体的存在和 形态，并且粗 略确定其直径在 100～200纳米之 间。而这种微小的脂质体容易渗入皮肤 ，活性组 分与皮肤的接触更加全面，使化妆品更有效果。 3．通过研究果酸浓度与包封率的关系，确定 果酸的适宜包 封 浓 度是 0．3mg／ml左右 ，通过 研 究丙二醇对脂质体稳定性的影响，确定它的最佳 使用浓度范围是 5％一15％。 4．脂质体在所设计 的乳液配方 中是稳定的。 参考文献 [1] Bangham A．D．Diffusion of Univalent Ions across the Lamellae of Swollen Phospholipids．J．Mo1．Bio1．1965．13： 238～252 [2] 吴芳．脂质体制剂的研究及应用 ．中国医药工业杂志，1999． 30(12)：564～568 [3] S．Sargisson．The AHA Phenomenon Drug& Cosmetic Industry．1994．1：24 [4] E．J．Van Scott．R．J．Yu．Alpha—Hydroxy Acids Science & Therapeutic Use，Cosmetic Dermatology Supplement． 1994．10：12 [5] Szoka F．Preparation of unilamellar liposome of intermedi— ate size by a combination of reverse phasc evaporation and extrusion through polycarbonate membranes．Biochem Biophys Acta，1980，601：559～ 571 [6] 陈渊卿等 ．甘露醇 一PVS对脂质体体外稳定作 的验研究． 药学学报 ．1982，17(1)：847～850 [7] 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