动物模型中幽门螺杆菌的检测

· 918 · 4 Hiltfcs．Oberwater JM，BoydAE Increasedin c．~MPlevelsin beta—c el】line 6 lm n at ir~u]in seur~~ion~thout alt~rlng t∞d free⋯ ca]j~jt 口l fion nab∞ ，1987，36(4)一440 5 ~ehmmn HC，Habemer J『Into]inc~o])ic hf~ le agm—like i~'ptidc—J 7 t7—37j sbrⅢl m pmim~in n￡expi re and pmimu]m 】⋯ in ms,&n~vna13TC一】calls End⋯ ．1992，130(1)：159 N ．2唧 ．、'ol 21，No H ∞ ，L CA．Haben~JF hc'iivafi cm a c^MP— med Cd 一 s path~yin P ∞ c 0一edls bythemsu]inctropic horn．one uc 一 like p 一【．J B】 Cht~n，1995 27叭3o)：[7749 F毅 ， 沽韫，王国华 胰岛糖采样肚 曲P—lc7—36) {起的胰 岛3细胞内游离钙变化 广琦、医学．2OOO．21(4J：286 模型中幽门螺杆菌的检测出f．]螨 氓 动物模型中幽门螺杆菌的检测 ¨‘1 查 ； 给 撞 补 拈 f) ．铱名、 李秋生 徐德 兴 孙桂华 田 野 ’ ‘ 的 滓 M ⋯ ， 螂 ㈣ ， 、午 幽门螺杆菌(H口)是慢性胃炎及消化 性溃疡的主要致病固素，并与胃癌发生密 切相关，已被 WHo列入第 一级致癌物 质t 。目此，准确检测 Hp对防治胃炎、消 化性溃疡有重要意义。我们应用细菌培 养鉴定 、尿素酶试验、染色直接镜 捡和 PCR四种方法检测动物模型中的 }I口， 比较这些方法对 Hp的植出率，为临床检 测 Hp提供参考 同时，本文还就 HP在消 化道不同部位的感染进行了分析 1 材料与方法 1．1 实验动抽 中国一号小型猪，由北 京农业大学提供。足月妊娠母猪出现先 兆后，于手术间内无菌剖腹取胎 将乳猪 置于无菌隔离器内给予灭菌牛奶饲养 1 2 }Ip接种与标本来源 Hp为本实验 室自己分离的菌种，鉴定为 Hp；小睹分试 验组 l0只，对照组 2只，在无菌条件下饲 养2用后，试验组从口接种 Hp，每只 3 tnl 浓度 3×1 cfi~／ra]，每 3天 1次 共 3次， 给予 Hp结束后第 30天处死小睹．分别取 口腔、食管、胃体、胃窦、十二指肠、小肠、 大肠等处黏膜各 2～5份不等送检；对照 组不接种 H口，其他均按试验组处理 1 3 细茵培养鉴定 标本接种于 5％绵 羊血布氏琼脂，5％ 02，10％ c ，85％ N2 37 培养3～4 d后出现灰色、透明、凸起 的菌落 革兰阴性杆菌，不发酵葡萄糖，氧 化酶、尿素酶、过氧化氧酶均阳性，吲哚、 硝酸盐还原及 马尿酸水解均 阴性 ，此 为 阳 性结果 培养一周后不生长为阴性。 1 4 染色直接镜检 采用特异的 Warthin — Smrc~银染色法，镜下见胃幽门螺杆菌 呈棕黑至黑色，其余组织灰黄至黄棕色 1 5 尿素酶试验 试剂自配，无菌2％尿 素水溶液，酚红磷酸缓冲液各 3滴1扃于标 本上，37℃温育 30 min，变红色者为阳性 1 6 PCR方法 采用 上海复瑞生物工程 公司的试剂盘，操作按试剂说明书；采用 空肠弯曲苗、解脲支原体作l为对照菌进行 PCR，以此作为 PCR方法的特异性对照。 2 结果 四种方法分别榆测消化道黏膜标本 }I口共220舒、捡出阳性数为 PCR方法 87、 尿素酶试验 6l、镜榆 45、培养 4o：埘照组 及 PcR方法中的特异性埘照结果均为阴 眭。消化道黏膜每处 2～5份标本各种方 法中有 1倒为阳性即认为该处结果为阳 性 ，结果见 1 表 1 4种检谢方法检测不同 部位 }l口的砬染情况 只 3 讨 论 3 1 4种检 测万 法的比较 从结果可 以 看 出 ，4种检测 方法 的结果 是有 差异 的 ， 各种植测方法各有其特点．其中细菌培养 鉴定的阳性结果表明有活菌的存在 其 阳 性结果最基本、最可靠的 但由于细胞培 养费时、繁琐、影响因素多等影响了检出 率 2 J 四种方法中其检出率最低的。镜控 法我们 采 用 了特 异 性 的 Wardan—Strarry 银染色法，镜下判断结果 比较容易，但 当 Hp球形变及 H 灶性”感染、取材、切片、 镜检等均存在局限性．其检出率仍然较 低。尿素酶试验在传统方法中是公 的 简便、快速、准确的方法，本试验也证明了 (收稿口蜩：2OOO一02—12) ⑨ 这一点，其检出率较前两种方法高，但 H口 本身有一部分尿素酶转阴或酿弱，及 }I口 数量很少时，易出现假阴性；另外产生尿 素酶的常见菌有变形杆菌、耶氏菌、假单 胞菌等，可导致 H口假 阳性：从结果可以 看出P(．TL方法在 4种方法 中其检出 H口 的检出率最高，当 H口球形变、死亡或菌 量过少时，用常规方法难 检 出而 PCR 方法则可 榆出，但 PCR方法认为 Hp的 死菌、活菌、甚至裸桩酸、有救棱酸片段均 为阳性结果。综上所述 PER方法和尿素 酶试验快速、准确，甜 H口的检出率优于 细菌培养和镜捡方法 是}盘测 H 较为理 想的方法。 3 2 不同部位的感染差异 胃黏膜是 Hp的自然定植部位，Hp在消化道的感染 主要是通过特异性的粘附因子与消化道 黏膜上受体的结合，胃窦部黏膜的受体含 量高于胃体的含量，从结果可“看出．在 PcR方法中 10侧胃窦黏膜结果均为阳 性，而胃体为 7倒 在大肠、十二指肠分 别为4和 5例，这主要与该处黏膜的胃化 生有关 有关报道在肠黏膜上皮未见 Hp 定植，本试验在小肠黏 膜中有 1倒是 阳 性 可能是路过菌或路过核酸。本试验结 果表明 Hp在消化道的不同部位的感染 是有差异的，其主要感染部位为胃窦 虽 然与消化道的解剖结构 、局部 pH值等有 关 但我们认为进主要是 H口音有特异性 的粘附因子及消化道黏膜 主要是胃黏膜 及胃黏膜化生的黏膜上皮舍有与特异粘 附因子结合的受体．至于是哪一种粘附因 子及受体，有待避一步的研究 参考文献 1 McFarlan GA．M⋯ A Hdieobacter ntoil and g~smc ．HT J Surg．[997，84(9)：1190 2 王雪梅． 沮廷 检测 }I口不吲方法之比较 北京 医科l^学学报 ，1997,． {6J：564 (收稿 口期 2000—03—20) 维普资讯 http://www.cqvip.com