HPLC同时测定虎杖及其提取物中4种有效成分的含量

HPLC同时测定虎杖及其提取物中4种有效成分的含量 HPLC同时测定虎杖及其提取物中4种有效 成分的含量 第3l卷第3期 2OO6年2月 中国中药杂志 ChinaJournalofChineseMateriaMedica Vo1.31,Issue3 February,2006 [3]陈妙华,刘风山.沙苑子油化学成分的研究.中国中药杂志,1990.15(4):33 GC-MSanalysisofthefattycomponentsofPollenTyphae andafterbeingcarbonized MAHong-fei,LIUBin,ZHANGGui-yan,SialRen-bing,MAChang-hua,YIJMi—rni (BeijingUnivenityofChineseMedicine,Beijing100102,Cblna) [Al~raet]Objective:TostudythechangesofthefattycomponentsofPollenTyphaebeforeandafterbeingcarbonized.Method: PollenTyph~eandPollenTyphaccarboni~tuswereextractedwithpetroleumether(60-90cc)respectively.Thetwokindsofextractswerean- alyzedbyGC?MSaftersaponifieatedandmethanolized.andtheirconstituentsweresearchedthroughNIST.Thecontentsoftheconstituents weredeterminedbymethodofnormalizationResult:EitherinPollenTyphaeorinPollenTyphaecarbonisatus,32componentswereidenfi— fled,amongwhich20componentswerethesameand6Weredifferentrespectively.Amongthesamecomponents,therehtivecontentsof3一 methyl-2一butenoicacid,2-phenylethylester,hexanedioieacid— dimethylester,dimethylphthalate,diethylphth~te,diphenylamine,sebaeie aciddimethylester,1,2-benzenedicarboxylieacid,ethylmethylester,methyl一2一 ethylhexylphthalateanddiisooctylphthalateete.increased obviously,andtherelativecontentsofnonanedioieacid— dimethylester,diisobutylphthalateandstigmastan-3,5-alienetc.decreasedgreatly. Amongthedifferentcomponents,8-hydroxy—octanoieacid-methylester,9-hydroxy— nonanoieacid-methylester,lO-octadeeenoicacid-methyl ester,m-hydroxyeinnamicacid-methylester,3-[4-(acetyloxy)一3一methoxypheny1]2一pmpenoieacid—methylestermad11一octadecenoieacid-methyl esterweredetectedinPollenTyphae,3一hydroxyspirost-8一en-ll— one,benzenepropanoieacid-methylester,2,4-dimethylhexanedioicacid;2,4- his(1,1-dimethylethy1)phenol,undecanedioicacid-dimethylesterand9,10-dihydroxy-oct adeeanoieacid-methylesterweredetectedinPollen Typhaecarbonistatus.Conduslon:ThespeciesandcontentsofthefattycomponentsinPollen Typhaechangedbeforeandafterbeingear- benized,buttheirchemicaltypesdidn'tchangetoomuch. 【Keywords]PollenTyphae;PollenTyphaecarbonistatus;GC—MS [责任编辑刘睨] HPLC同时测定虎杖及其提取物 中4种有效成分的含量 杨红美,-,陈波H,曾建国2,缪建荣2 (1.湖南师范大学化学生物学及q-药省部共建教育部重点实验室,湖南长沙 410081; 2.湖南九汇现代中药有限公司,湖南长沙410329) [摘要]目的:建立同时测定虎杖及其提取物中自藜芦,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚4 种有效成分含量的高 效液相色谱法.方法:HypersilCl8色谱柱(4.6lnln×200mm,5舢),流动相为乙腈和 1%HAc水溶液,梯度洗脱,流速 [收稿日期]20054)1一l】 [基金项目]国家"十五"重大专项及湖南省杰出青年基金 (03JJY10O2,2001BA746C.2001BASO4A21,2003AA2Z3515) [通讯作者]陈波,Tel:(0731)8865515,E—mall:dr-chenpo@vip.sina.toni ? 202? 第3l卷第3期 2OO6年2月 中国中药杂志 ChinaJournalofChineseMateriaMedica Vo1.31.Issue3 February,2OO6 1mL?min,,检测波长287ilnl.结果1方法的平均回收率及RSD分别为:白藜芦醇101馏%,1.7%;大黄素96.2%, 1.4%;大黄酚99.7%,1.O%;大黄素甲醚98.6%,O.97%.结论:该方法可用于虎杖药材及其提取物的质量控制. 【关键词]虎杖;白藜芦醇;大黄素;高效液相色谱 【中图分类号]R284.1[文献标识码】A[文章编号】1001.5302(20o6)o3020204 虎杖为蓼科植物虎杖Polygoruancuspidatum Sieb.etZucc.的干燥根和根茎,主要有效成分为蒽醌 类和芪类化合物_1].虎杖及其提取物具有祛风利湿, 散瘀定痛,止咳化痰等功效,用于关节痹痛,湿热黄 疸,闭经,瘢瘕,咳嗽痰多,水火烫伤,跌扑损伤,臃肿 疮毒等症状.目前,对于这些有效成分的分析多为分 光光度法及HPLC,但大多为某一类化合物或某单一 化合物的测定[2-4].本实验建立了虎杖药材及其提取 物中白藜芦醇,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚同时测定 的HPLC分析法,方法专一性强,灵敏高,可有效监测 药材质量及提取物中的成分含量变化情况. 1仪器和试药 Waters1525高效液相色谱仪包括2996PDA检测 器,717自动进样器,Empower色谱工作站. 白藜芦醇,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚对照品 (Sigma公司),水为二次蒸馏水,乙腈为色谱纯;虎杖 药材(湖南沅陵,由湖南师范大学生命科学学院植物 学系刘客明教授鉴定);虎杖提取物1,2(湖南九汇 现代中药有限公司). 2方法 2.1色谱条件HypersilC18色谱柱(4.6mln×200 mln,5);流动相:A乙腈,B1%醋酸水溶液,流速 为1.0mL?min,,检测波长287ilm,进样量20,柱 温30?,梯度洗脱程序见1. 表1梯度洗脱程序 2.2供试品溶液的制备精密称取0.1g虎杖原药 材于50mL量瓶中,加适量甲醇超声提取20min,冷却 后定容,备用.分别精密称取虎杖提取物1,2各5 嘴,置于50mL量瓶中,甲醇超声溶解,定容,备用. 2.3对照品溶液的制备分别精密称取白藜芦 醇,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚对照品21.78, 23.15,7.69,2.51n1g于50mL量瓶中,加甲醇适量使 之溶解,定容,得对照品贮备溶液. 2.4线性关系考察精密吸取上述白藜芦醇,大 黄素,大黄酚,大黄素甲醚各对照品溶液各0.5,1, 2,3,4于50mL量瓶中,甲醇定容,得5个不同含量 的混合对照品溶液.分别精密吸取20,按上述色 谱条件分别进样色谱分析.以各组分对照品质量x (g)为横坐标,峰面积y为纵坐标,得到线性方程 (n=6).白藜芦醇l,=3612000X一25710,r= 0.999;大黄素l,=4495000X一32910,r=0.999;大 黄酚Y=258467.534X一6986,r=0.999;大黄素甲 醚l,=3110108X一5786o,r=0.996.结果表明白 藜芦醇,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚的线性范围分 另0为0.087,0.697,0.093,0.741,0.031—0.246, 0.010,0.080. 2.5精密度试验连续对虎杖提取物样品溶液测 定5次,计算得白藜芦醇,大黄素,大黄酚,大黄素甲 醚的峰面积的RSD分别为1.0%,1.0%,1.2%, 1.4%.表明精密度良好. 2.6稳定性试验取样品溶液分别于1,2,3,4,6, 8,12h,按上述色谱条件测定峰面积.结果表明,样 品溶液于12h内,色谱峰面积无明显变化,白藜芦 醇,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚的RSD分别为 1.0%,1.0%,1.2%,1.2%.因此样品溶液在12h 内基本稳定. 2.7加样回收试验精密称取已测含量的虎杖提 取物样品,分别加入白藜芦醇,大黄素,大黄酚,大黄 素甲醚对照品储备液,按样品制备方法制得供试品 溶液,平行制备5份溶液,每次加标量分别为白藜芦 醇0.434mg,大黄素0.460mg,大黄酚0.154mg,大 黄素甲醚0.500mg.5次平均回收率及RSD分别 为:白藜芦醇101.8%,1.7%;大黄素96.2%,1.4%; 大黄酚99.7%,1.0%;大黄素甲醚98.6%,0.97%. 加样回收率结果见表l. 2.8样品含量测定取虎杖和虎杖提取物样品, 按2.2项下供试品溶液的制备方法操作,分别制成 供试品溶液,均过孔径为0.45的微孔滤膜.准 确吸取混合对照品溶液20,供试品溶液10, 在上述色谱条件下,每个样品测5次,用外标法测 ? 203? 第3l卷第3期 20O6年2月 中国中药杂志 ChinaJournalofChineseMateriaMedica Vo1.31,IBSUe3 February,2006 表1虎杖提取物中白藜芦醇,大黄素,大黄酚,表2虎杖及其虎杖提取物中的白藜芦 醇,大黄素, 大黄素甲醚加样回收率大黄酚,大黄素甲醚的含量(=5)% 定,并计算各样品中白藜芦醇,大黄素,大黄酚,大黄 素甲醚的含量.样品和对照品的色谱图见图1,样 品测定结果见表2. 2 图1虎杖对照品,虎杖原药材,虎杖提 取物的HPLC图 1.白藜芦醇;2.大黄素;3.大黄酚;4.大黄索甲醚 A.对照品;B.虎杖原药材;C.虎杖提取物 3小结与讨论 3.1首次建立了同时测定虎杖及其提取物中的4 种有效成分含量的高效液相色谱法,使虎杖中的4 个有效成分获得基线分离且具有快速,准确,重复性 好等特点,可用于虎杖药材和提取物的质量控制. 3.2在供试品溶液制备方法的选择时,分别比较了 用甲醇超声5,10,20,30min的提取效果,结果表 明超声20min最好.为进一步确定提取是否完全, 又对上述超声提取的残渣用30mL甲醇继续超声提 取20m_in,取滤液进样分析,计算4种有效成分的残 留量.结果表明,超声提取20m_in即可将测定的成 分提取完全,故本研究中供试品溶液制备均用甲醇 超声提取20min. 3.3在建立分析方法的过程中以乙腈,水为流动 相,用等度淋洗无法同时分离上述4种物质,而按 梯度淋洗方法可以达到基线分离且峰形尖锐,对 称.另外由于白藜芦醇和大黄素等具有酚羟基, 在较高的pH呈亲水状态,在较低的pH呈疏水状 态,尝试了在流动相中加用1%,0.5%,0.1%(醋 酸和水的体积比)的醋酸,结果发现1%醋酸的效 果最佳. [参考文献] [1]潘明新,王小阳.虎杖的化学成分及其药理作用.中药材. 2000,23(1):56. [2]唐小波.吴健儿,赵绪元.高效液相色谱法测定虎杖中大黄索 的含量.基层中药杂志,2OOO,14(4):17. [3]陆豫,黄志纾,马林,等.虎杖中乇要蒽醌的提取分离及 HPLC分析测定.应用化学.2004.21(5):433. [4]曾建国,侯团章,张胜.高效液相色谱法测定虎杖提取物中 白藜芦醇的含量.中国中医药科技.2OOO.7(3):175. ? 204? inrootof YANGHong-mei一,CHENBo,ZENGJian-guo2,MIAOjiml-rong2 (1.Key./x~ratoryofChemicalBiology&TraditionalChineseMedicineResearch,Mini stryofEducation, 第31卷第3期 2OO6年2月 中国中药杂志 ChinaJournalofCh{n~MateriaMediea Vo1.31.Issue3 February,2OO6 HtamaNormalUniversity,咖410081,China;2.Phymwaylnc,410329,Ch/na) [Abstract]Objective:ToestablishaHPLCmethodforsimultaneousdeterminationofresvera trol,emodln,chrysophanol,physeionin rootofPolygomartcuspidatumanditsextract.Method:TheseparationwasperformedinaHy persilODSClacolumnwithamobilephaseof Acetonitrile-1%HAc.Theflowratewas1.0mL?rainanddetectionwavelengthWasat287帅.Result:ThemeanrecoveryandRSDof resveratrol,emodin,chrysophanol,physeionWas101.8%,RSD1.7%;96.2%,RSD1.4%:99.7%,RSD1.0%;98.6o%,RSD0.97% respectively.Caactu~on:Themethodisaocurate,simileandreliable.ItCallbeusedforquality controlofJP.cuspidatumanditsextract. 1KeywordsjPolygonumcuspidatum;resveratrol;emodin;HPLC [责任编辑刘观】 表面氨基游离的白藜芦醇壳聚糖纳米粒制备方法研究 姚倩,侯世祥,何伟玲2,冯骥良2,王新春,费洪新2,陈正华2 (1.四川大学华西药学院,四川成都610041; 2.甘肃亚盛集团北京博士后科研工作站,北京100101) [摘要】目的:探索表面氨基游离的白藜芦醇壳聚糖纳米粒制备方法,以便连接配体 实现主动靶向.方法:采 用氯化钠沉淀法制备表面氨基游离的壳聚糖纳米粒;比较不同固化程度纳米溶液 的浊度,体外释放,包封率,载药 量和粒径等性质.结果:固化程度不同的纳米溶液经超声或水浴加热处理后,浊度 降低值不同;含不同固化剂的纳 米溶液均有明显缓释效果,随固化剂加入量增加,释放速度减慢;固化程度对包封 率和载药量无明显影响.加固化 剂200t,L的壳聚糖纳米粒粒径为487帅,多分散指数为0.144.结论:制备的白藜芦 醇壳聚糖纳米粒粒径相对较 小,表面氨基游离,可用于主动靶向给药系统的. 【关键词]白藜芦醇;壳聚糖;纳米粒;固化 【中图分类号】R283[文献标识码]A[文章编号】1001.53O2(2OO6)O3-0205—04 靶向给药系统是目前制剂研究的热点.其 中,主动靶向给药系统由于可将药物定位输送到 病变部位,进一步提高了治疗效果,降低了毒副作 用,更为国内外学者所关注.壳聚糖(chitosan,CS) 常被用于制备各种新型给药系统,纳米粒是其应 用最广泛的一类新剂型,如能使cs纳米粒(chi. tosannanoparticles,CS.NP)表面氨基游离,具主动寻 靶作用的单抗或配体则可通过化学修饰与氨基相 结合,获得具有定位传输功能的主动靶向制剂. cs.NP目前多采用聚合法制备【,引,虽然此法具有 制备工艺简单,未使用有机溶剂,制得的纳米粒粒 径小等优点,但微粒表面的氨基已失去了与单抗 或配体相结合的能力.采用脱溶剂制备法虽可使 [收稿日期】2005-07.17 [通讯作者】侯世祥,Tel:(028)85502809,E.mail:housx@263 cs氨基游离,但制得的粒子粒径大于lL3j.因 此,如何制备一既能使cs氨基游离,又可保证粒 径在1肿以下的纳米粒,是设计CS.NP主动靶向 给药系统前必须解决的问. 本实验以中药有效成分白藜芦醇为模型药物, 采用氯化钠沉淀法制备了CS.NP.确定固化剂加入 量是此制备方法的关键,适宜的固化程度应既能使 纳米粒被体液稀释时不溶解,又有足够的氨基保持 游离状态.因此对含不同固化剂的CS.NP的相关性 质做了进一步考察,为设计CS.NP主动靶向给药系 统奠定基础. 1仪器与试剂 Et本ShimadzuLC一10AT高效液相色谱仪,美 国HimaxCP80MX超速离心机,瑞士PrecisaXS125A 型分析天平,美国Elma660/H型超声波粉碎仪,美 国Brookhaven90Plus激光粒度分析仪,Et本JEM一 ? 205?