鹿蹄草用于低盐酱菜保藏的研究

鹿蹄草用于低盐酱菜保藏的研究 77—2}} 第ll巷蓠1期北京农学院No1.Volll 鹿蹄草用于低盐酱菜保藏的研究 ,r/ 垄李强 (北京农学院食品系.北京1.2206)了乡ff; 摘要本实验对鹿蹄草应用于酱菜保藏的使用方法,条件和浓度进行了研究.实验结果表 明.鹿蹄草对于导致酱菜败坏的酵母菌,细菌,霉菌均有较好的抑制效果.可使低盐酱菜在室 温下韵保质期延长2d主右.抑菌圈实验表明.100mg/L的鹿蹄草水煎液具有与同维度的山 梨酸钾和丙酸钙溶液相近或更好的抑菌效果. 关键词鹿蹄草;酱菜;保藏;天然防腐剂 ————…———————’—一. 鹿蹄草(Pyrolarotundlfolia,L)又名鹿衔草,鹿寿茶,破血丹,柴背金牛草等,属鹿蹄草科 (Py?laceae)植物.主要分布于亚欧北温带的中国,印度,日本,波兰以及前苏联等地区[1.在 我国,鹿蹄草作为一种中草药在医药领域得到广泛应用[2一据我国中医药文献记载.鹿蹄草 性甘,苦,平.入肝,肾经,具有祛风湿,强筋骨,解毒,止血,朴气血,利尿,镇咳等功能[4,5].其 水煎剂对金黄色葡萄球菌(Staphyloco~usaureus),肺炎球苗(Pneumonococcuspneumoniae),脑 膜炎球菌(Neisseriamenigitidis),绿脓杆菌(Pseud—onlofl&$aeruginosa)等细苗均有抑制作 用在实验中我们对鹿蹄草应用于酱菜保藏的使用方法,条件和浓度进行了研究,并嗣常 规食品防腐剂山梨酸钾和丙酸钙作为对照,进行了抑菌圈实验.实验证明,鹿蹄草不但对细菌 有抑制作用,而且对酱菜中致败酵母菌和霉菌也有很强的抑制作用. 1材料与方法 鹿蹄草(干样)采自陕西省太自山 酱菜(多昧乳瓜)赌自北京天源酱园 山梨酸钾食品级 丙酸钙食品级 牛肉膏蛋白胨培养基(培养细茁) 察贝克培养基(培养霉菌) PDA培养基(培养酵母菌,真菌) 1.2实验方法 1.2.1鹿蹄草浸提液的制备 称取1.00g的鹿蹄草粉末3份,分别装入250ml的三角瓶中并各加入自来水100ml.将l 慢稿日期l996—0326 北京农学院第?卷 份放入100?的水潜中.保温浸提2h;1份放在电炉上煎煮2h,使煎煮液保持沸腾状态并适时 添水;1份放在高压灭菌锅内,加热到12l?并保持20min.提取完毕后分别用滤纸将提取液 过滤到100ml的容量瓶中,用无菌水定容到lOOml,制成1%的溶液备用. 1.2.2山梨酸钾和丙酸钙溶液的制备 称取山梨酸钾和丙酸钙各1.OOg分别装入lOOml的容量瓶中并用无菌水定容,分别制成 1%的山梨酸钾和丙酸钙溶液.吸取上述溶液各1ml,放lOOml容量瓶中并用无菌水稀释定 窖,制成100mg/L(O1‰)的山梨酸钾溶液和lOOmg/L(01‰)的丙酸钙播液备用. 1,2.3抑菌圈实验 分别用牛肉膏蛋白胨培养基,察贝克培养基,PDA培养基制成无菌平板.将经过170~C干 热灭菌.直径15ram的滤纸圆片分别浸入0.1‰浓度的鹿蹄草水煎液.山梨酸钾溶液和丙酸钙 溶液中,然后将浸有上述药液的滤纸片分别放入干燥无菌的培养皿中,并在37?条件下鼓风, 制成干燥的含药纸片.将从腐败酱菜中分离,纯化出的7种腐败菌分别制成菌悬液.在做好 上述准备工作后,用无菌吸管吸取0.5ml菌液,加到无菌平板上并用刮铲将菌液涂抹均匀,然 后向培养皿中放入上述3种含药滤纸各1片.将培养皿放入培养箱中进行培养(酵母菌,霉菌 在(28:1)?下培养1周.细菌在(3611)?下培养24h).培养结束后取出培养皿并量取抑菌 圈直径 1.2.4不同浓度鹿蹄草提取液的抑菌实验 用1%的鹿蹄草水煎液分别稀释成50,100,200,300mg/L的溶液.将新鲜酱菜分别放入 上述溶液中进行短时间浸泡,然后取出;控干水分并分别装入塑料小袋中.置于室温(20, 25’12)下存放.每天称取经不同浓度的鹿蹄草水煎液处理的上述酱菜各10g,用研钵充分研 磨,并加少量生理盐水(含8.5‰的NaC1)制成匀浆,然后用生理盐水稀释.分别制成10,, 1O,,1OI3的含菌液.用无菌吸管吸取lml含菌液分别注入无菌平板内,用刮铲抹匀后置于 培养箱中进行培养.培养结束后菌落数. 1.2.5不同PH值的鹿蹄草提取液的抑菌实验 用1%的鹿蹄草水煎液稀释成100mg/L的溶液,并用柠檬酸调节其PH值,使溶液的酸碱 度分别为PH=4.PH=5,PH=6,PH=7.用上述不同PH值的鹿蹄草提取液分别处理酱菜, 并进行散生物的培养观察.方法同上. 【.2.6不同提取方式对抑菌效果的影响实验 分别用lOOmg/I的鹿蹄草水煎液,水浸液,高温提取液处理酱菜,并同时进行微生物的培 养观察.方法同上. 在进行上述各实验的同时,对各个处理样品进行同步观察.上述实验中.每个处理设3个 重复,各个水平平板设2个平行样. 2结果与分析 2.1浸提方法对鹿蹄草抑菌效果的影响 由图1可以看出,在3种浸提方法中.用水煎法制得的鹿蹄草溶液的抑菌效果最好.处理 1996年第l期艾启俊等:鹿蹄草用于低盐酱菜保藏的研究79 第3d的真菌总数水平与对照第ld的水平接近,而且在整个观察期内,处理的菌数水平比对照 要低约1,2个数量级,这说明鹿蹄草水煎液对真菌的抑制效果十分显着.实物观察显示.经 鹿蹄草水煎液处理的酱菜(含盐量2.64%)的保质期比对照延长2d以上,而低盐酱菜(含盐量 在8%下)在夏季的保质期仅3d左右.水浸法制得的溶液的抑菌效果稍差,但仍很明显. 高温法制得的溶液的抑菌效果极差.逸可能是高温高压条件下,鹿蹄草中抑菌的有效成份分解 失活所致.根据上述结果可以确定,鹿蹄草中抑菌成份的提取以水煎法为最佳. 3 345 图l不同浸提方法对庸蹄草抑菌怍用的髟唷(室温) ×空白对照?水煮群2h 0高温L20~C/20min?开水浸泡2h 2.2鹿蹄草提取液浓度对抑菌效果的影响 由图2可以看出,鹿蹄草提取液的抑苗效果并不随浓度的增加而增强,而是表现出一种负 相关性.高浓度的鹿蹄草提取液在第ld的抑菌效果极差.菌量变化曲线的斜率与对照接近. 第2d茁量变化曲线出现拐点.抑菌效果明显增强.分析上述现象的原因,主要与下述的因素 有关.庸蹄草含有多种抑茁成份,也含有丰富的营养物质.据文献介绍,鹿蹄草中含有 16种氨基酸?氯基酸计的蛋白质含量高选6.15g/lOOg干样.鹿蹄草中还含有葡萄糖等营养 北京农学院第ll卷 物质.在高浓度的提取液中,这些营养物质的浓度也较高,它们的存在对抑菌成份有一定的吸 附干扰作用.并为微生物的生长发育提供了较好的营养条件.有利于初期菌量的增加,导致抑 菌效果的降低.另外,样品在鹿蹄草中浸泡时.样品台盐量也会有所下降,有利于微生物的生 长发育. 25 囤2不同浓雎飕唏覃蒂的椰日怍用(量韫’ 0空白对照?50xi0?100x10一 x200×l0口300×10 2.3不同PH值对鹿蹄草抑菌作用的影响 由图3可看出.鹿蹄草的抑菌效果受到PH值的影响.PH4时的抑菌效果最好,随着PH 值的升高,抑菌效果降低.熊果甙和高熊果甙是鹿蹄草中重要的抑菌成分,它们分解时可产生 对苯二酸,对苯二酚经氧化可形成氢醌.而这两种物质都具有较强的抑菌作用.酸性条件 有利于对苯二酚的生成.而碱性条件醌则有抑耕作用.所以,在酸性条件下鹿蹄草的抑菌效果 较在碱性条件下要好. I996年第l期艾启俊等:鹿蹄草用于低盐酱菜保藏的研究8l 图3不同PH值对鹿碲草抑茁作用的影响{室温) ?PH4×PH6 ?PH50PH7 2.4鹿蹄草与常用食品防腐剂抑菌效果比较 从表1可看出,100mg/I的鹿蹄草水煎液对腐败酱菜中分离出来的7种优势微生物茁群 表1100mg/l鹿蹄草木煎液与相同浓度的两 种常用食品防腐剂抑菌效果比较表 均有显着的抑制效果.同目前在食品工业中食用的化学防腐剂山梨酸钾和丙酸钙比较, 100mg/I的鹿蹄草水煎液对两种酵母菌的抑制能力要强于同浓度下的山梨酸钾和丙酸钙溶 液;对两种细菌的抑制能力与同度下的山梨酸钾和丙酸钙溶液相同; 对3种霉菌的抑制能力则 稍差一些.实验结果再次证实了鹿蹄草的抑菌功能,并揭示出它对腐败酱菜中的酵母茁和霉 北京农学院第l1卷 菌也具有极强的抑制能力.对2种酵母菌的抑制效果甚至超过了目前食品工业中常用的化学 防腐剂山梨酸钾的丙酸钙. 3.讨论 1)根据实验结果,可以认为鹿蹄草具有广泛的抑菌性能,尤其对酵母菌的抑制效果更为突 出. 2)鹿蹄草抑苗成份的提取以水煎法最好,高温高压对其抑菌成份具有较强的破坏作用. 3)鹿蹄草可作为一种酸性防腐剂使用,在低PH值条件下抑苗效果较好. 4)鹿蹄草具有很强的抑菌能力,其水煎液在50,100mg/L的浓度下就能达到较好的抑菌 效果.可使低盐酱菜的保质期延长2d以上. 5)鹿蹄草作为一种天然的野生植物资源.在食品领域具有很好的开发应用前景 基文在写作时得到黄万荣先生的指导帮助.在此表示衷心的感谢. 参考文献 l刘存海.艾启倥鹿蹄草研究现状概述.工业技术经挤1994,(6):75,76 2江西新医学院.中药太辞典.上海:上海人民出版社.1975.2243 3全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编.北京:人民卫生出版 杜.1991,125 4中国药物太全编委台.中国药物太全.中药卷,北京:人民卫生出版 杜,1991,125 5贺士元等.北京植物志(修订题)北京北京出版杜,1984,711,713 6李世全.秦岭巴山天然药物志.西安:陕西科技出版杜.1987.722 7刘存海,艾启倥.鹿蹄草有效成份分斩及应用初撵.北京农学 院,1994.9(1):lo4,108 8天津大学有机化学教研室.有机化学.E京:人民教育出版 杜,1978,231 AStaudyOilthePreservatioofalow—saltPickle withPv,olaRotundffoliaL. AiQijunChenJingLiGiang (Bei.jingAgriculturalCollege,Bei]ing102206) AbstractThisexperimentStudedthemethods,conditins,andconcentrations usingPyrola,— tund(如,I—forPreservingthepickle.Theresultsshowedtheusing0fPyrolar otundifoliaL canextendthepreservingtimeofthelow—saltPickleovertwodaysinordinar ytemperature—The expermentsofthebacteriostraticcircleshowedthesolutionoflOOmg/1ofPvr otMndilinL bydecoctinghadalikeorbetteresuhscomparedwiththesameconcentrations olutionofPatassiam sorbateandPropioniccalcium. keywordspyroliarotundifoliaL.Pickle,Preservation,preservative 第?卷第l期北京农学院No.1.Vol11 1996年6月jOUR!!OF—B—EU—INGA—GRI—CUI.T—uRALCOLLEGE 试论”先使用权’’ 隋文香 北京表学院经贸秉北京102206) 根据”先申请原则’即两个或两个以上的申请人分别就同样的发明创造申请专刊的.专利 权授予最先申请的人.在实际中会出现这样的矛盾,不同的人就其分别创造的相同发明创造. 先申请人享有专利极,后申请人不享有专利权.由于专利权的排他性,后者未经专利权人许 可.不能实施自己发明的发明创造,显然,对后者是不公平的.与专利鼓励发明创造的宗旨 是相悖的.为懈决这一矛盾,凡采用先申请原则的国家,规定了”先使用权”.本文就”先使用 权”作浅显探讨. 1先使用权与专利权 自从1623年英国颁布第一部以”垄断法”命名的专利法以来.至今已有120多个国家和地 区制定了专利法,赋予专利权人对其发明创造享有专利权.即未经专利权人许可,他人不能以 盈利为目的实施其发明创造.专利权以其排他性的本质特征,在法律上得到确认.正由于这 种专利制度.促进了人类科学技术的进步和繁荣.专利制度之所以被世界大多数国家所承认, 不仅仅在于它鼓励发明创造,而且也不损害其他独立发明创造人的利益.使享有专利权的人和 没有或不想享有专利权的人,对发明创造的利用,在利益上得到”和平共处”.这主要表现在确 立”在先使用人”享有”先使用权”. 先使用权,是指某项发明创造在申请日或优先权日之前.其他人已经制造相同产品,使用 相同方法或者已经作好制造,使用的必要准备,在该发明刨造授予专利杈后,可以仅在原有范 围内继续制造或者使用该发明创造的权利.专利法中之所以确认”先 使用权”其目的有二.第 一 更彻底地体现专利制度对发明创造的鼓励.专利制度主要目的之一是将专利权授予最先 搞出发明刨造的人,作为一种法律制度.必须设定一个标准来衡量”最先发明的人”,并使这个 标准既能体现立法宗旨又便于实际操作.所以大多数国家都奉行”先申请原则”,也就是说,在 法律上认为最先申请人”即为”最先发明人”.但这里并不能排除,”最先申请人”非”最先发明 人”的情况.因此,法律上规定了”先使用权”来弥补”先申请原则”所带来的缺陷,更完美地体 现专利法的立法宗旨.第二.保护就同一发明刨造而未获专利权的单位或个人的最低利益.即 为实施该发明创造所作必要准各进行投资的回报.使发明创造的独创人.在法律上都得到公 平保护. 先使用权并不是一项独立的权利,依专利权的存在而存在,当专利权消灭时,先使用权也 没有存在的必要.先使用权和专利权二者的区别在于:?主体不同.先使用权人和专利权人 是相同发明创造的相互独立的不同的人.专利权人是在先申请并获 取专利权的人,先使用权 人是在后申请(或未申请)但已作好发明创造实施的必要准备而未获取专利权的人.?权和不 同.专利权人享有对发明创造实施的排他权.先使用权人享有对获得专利权到”在先使用人”最低利益的实现.因此.依法确认”先 使用权”尤为重要,换句话说,”先使用权”的取得有严格的法定条件.根据专利法的规定,”先 使用权应同时具备以下四个条件: 2.1时间上的条件 同一发明创造在申请日或优先权日之前已经制造,使用或已经作好制造,使用的必要准 备.这意味着,在申请日或优先权日之前,该发明创造已独立研制出来,否则,将违背”先申请 原则”也有悖于确认”先使用权”的根本目的. 2.2独立性条件 发明创造是”先使用人”独立完成的且与专利权人无关.也就是说,获得先用权的人,其发 明创造不仅是在申请日或优先权日之前研制的,而且是自己独创的,这里的独创并不排斥与他 人台作完成,关键是该项发明创造的研制与专利权人毫无关系.如何判断呢?有两大基本思 路.第一,该项发明创造,分别由不同的人独立完成,且其中的专利权 人与他人没有任何技术 上的合作关系这种情况,其”独立性”的判断较容易,只要他人提供独立完成发明创造的证 据,便可确认.第二,两个或两个以上的人共同完成的发明创造与专利权人是否存有关系呢? 这里无非有三种情况,其一,两 方独立完成.若一方申请在先获得专利权,后者可能台取得先使用权.如果一方未完成发明 创造,不能以曾经与专利权人有过台作关系而要求”先使用权”.其三,两个或两个以上的人在 发明创造完成之后合作破裂,应视为第一种情况,因为该项发明创造已由各方合作完成,至于 以后是否台作为该项发明创造的完成没有关系. 如果该发明创造是他人从非专利权人处合法取得的,是否具备独立性”条件呢?这里要 区别两种情况,第一,在国外台法取得或者在本国范围内秘密的合法取得,受让人可以成为”先 使用人.第但束作好制造.使用的必要准备.其发明剖造人是无权获得”先使用权”的c因 为.发明创遣只有实施才具有价值.正由于此,法律上确认先使用权并不是对其研究发明创造 本身投资的回报而是对其实施发明创造投资的回报.何为”必要准 备”呢?专利法中并未明确 规定,在司法实践中,主要指以下几种情况:?生产上的准备.包括为生产该发明刨造条件的 准备.如为实施该发明创造而筹建工厂或企业等;或者为实施该发明创造准备的实质条件.如 建立了厂房,购买了专门机器,设备等.?完成了产品的试制.并且已符合技术书的要求.当 然.”必要准备”是不同的发明创造.所表现的具体内容不同,但该条件衡量的标准.应是为实施 该发明创造,他人弓完成了工业上的投凡: 2.4将来实施限制条件 他人制造或使用行为,仅限于原有范围.何为”原有范围”,从立法本意上看,可以把握以 下几点.?”原有概念,应是专利申请目或优先权日之前.也就是说,在专利申请日或优先权 日之前其实际或预计生产规模多大就多大.在专利申请日或优先权日之后不能再扩大.?其 规模大小主要以产品数量来衡量.其产品数量以申请日或优先权日之前所作好的必要准备所 能达到的生产能力为标准. 当上述四个条件同时具备时,同一发明创造的非专利权人方能获得”先使用权. 3先使用权人的权利 先使用权保护先使用人的最低利益,是以不损害专利权人的根本利益为条件的.所以.专 利法对先使用权人的权利作了严格的限制.先用牧人的权利主要包括以下躲避方面:?可以 在合法的范围内,不经专利权人的许可无偿地制造,使用该专利.?可以用:”先使用权”对抗 专利权人的侵权控告先使用权人权利的限制包括:?无权单独转让”先使用权”,因为”先使 用权”的行使不能超过”原有范围”,所以.如果转让只能为其企业一并转让.?无权用”先度用 权”进行投资,抵押. 4先使用权的修定 据上所述.在先使用权的存在是基于保护专利权人之外的”在先使坩人’’的最低利益而设 置的a但这种最低利益目前专利法的规定,只是在”原有范围内制造和使用”而没有销售的权 利.那么”先使用权人”的最低利益是无法实现的.因为发明创造只有通过销售活动,才能获 得收益其工业投资才能得到回报.所以,专利法除赋予先用权人在台法范围内制造使用专 利之外.还应赋予其销售权’ 北京农学院 高卢麟主编 高卢麟主编 第11卷 参考文献 专利基础专利文献出版社,1994 专利法释义 祁成思.知识产权甚通论 专利文献出版社,1994 法律出驻社,1986 汤宗舜.专利法教程.法律出版社,l989 程永顺.关于先用枫的几个问题中国专利报.1993