猪0型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效果试验

猪0型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效果试验 江苏畜牧兽医职业技术学院(设计) 猪0型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效果试验 摘要 目前在生猪口蹄疫的防控措施上，主要采用的是以免疫为主的防控策略。苏州市从上世纪末开始，相继推广使用猪0型口蹄疫灭活疫苗、猪0型口蹄疫进口佐剂浓缩苗(206疫苗)，为口蹄疫综合防控工作发挥了重大作用。但是由于疫苗自身的不足，使我市的养殖户产生了抵触拒免心理，在推广上受到了很大阻力。为寻找一种更优质的疫苗，苏州市动物疾病预防控制中心与几家公司合作选用了猪0型口蹄疫合成肽疫苗，并分别在常熟等地区进行了临床试验，结果明:新型疫苗能产生很好的免疫保护效力，为广泛使用猪0型口蹄疫合成肽疫苗奠定了基础。 关键词 猪0型口蹄疫合成肽疫苗;口蹄疫;免疫效果试验 口蹄疫是一种偶蹄动物烈性、高度传染性疾病，给世界畜牧业造成很大损失。国际兽疫局(OIE)将该病列为国际动物卫生法典中A类疾病之首，在许多国家和地区都有该病的发生与流行。口蹄疫的控制和扑灭，必须推行合理的免疫和实施生猪强制免疫。目前，苏州市养猪业普遍使用的是猪口蹄疫灭活疫苗。但近年来我市引进并开发了一种以人工合成肽为抗原的新型口蹄疫合成肽疫苗，它是采用固相多肽合成技术，在体外人工合成口蹄疫病毒主要抗原位点(合成肽)并连接人工T细胞位点，以此作为免疫原与进口佐剂混合配制而成的油乳剂疫苗。我们通过其免疫原性、安全性、抗体持续性进行了实验和临床应用，取得了理想的效果。 1. 材料和方法 1.1 试验动物分组与设计 在海虞镇随机抽取了性能、日龄等比较相近的几个猪圈中的6头仔猪，并对其进行唯一编号，编号分别为:A、B、C、D、E、F。其中前三头为合成肽试验组，后三头为灭活苗试验组。所有试验仔猪在1月龄左右时进行初免，在初免结束30天左右进行二免，合成肽试验组每组接种疫苗1ml/头，灭活苗试验组每组接种疫 1 江苏畜牧兽医职业技术学院(设计) 苗2ml/头。 1.2 疫苗和试剂 猪合成肽O型口蹄疫疫苗，购于申联生物医药(上海)有限公司生产，批号:20080905 猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株)，购于中农威特生物科技股份有限公司，批号:2008010 口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒，购于申联生物医药(上海)有限公司，批号:200708034 O型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒，购于中国农业科学院兰州兽医研究所，批号:20071002 1.3仪器 微量移液器、酶标仪 1.4方法 VP1结构蛋白抗体ELISA检测方法按试剂盒书进行。 液相阻断ELISA检测方法按试剂盒说明书进行。 2.结果 2.1 VP1结构蛋白抗体ELISA检测结果见表1。 表1:VP1结构蛋白抗体ELISA检测抗体的消长规律 VP1结构蛋白平均OD值 疫苗种类 OD值 首免3.周 首免4周 二免2周 二免5周 二免9周 A 1.024 1.387 1.913 1.905 1.882 合格率% 76.2 100 100 100 100 合成肽 B 1.124 1.258 1.788 1.874 1.737 疫苗 合格率% 65.1 84.5 100 100 100 C 1.113 1.331 1.925 1.847 1.693 合格率% 66.2 82.5 100 100 100 注:本次试验阳性的OD值判定界为0.5到2.0之间，阳性对照孔平均OD值×0.23=临界值，若被检样品孔OD值?临界值时，判为阳性。 2 江苏畜牧兽医职业技术学院(设计) 由表1可见:合成肽疫苗首免3周平均抗体水平较高，且抗体水平合格率达80%以上，二免2周后抗体一直维持在较高水平，且合格率达100%。 2.2 液相阻断ELISA检测抗体结果见表2。 表2:液相阻断ELISA检测抗体的消长规律 疫苗 平均 液相阻断ELISA检测抗体的平均效价 种类 效价 首免3周 首免4周 二免2周 二免5周 二免9周 D 49.3 72.3 188.9 284 229.9 合格率% 22.2 44.5 55.6 67.5 68.5 灭 活 E 16 63.5 211.3 284.1 205.3 浓 缩 合格率% 11.1 30.2 66.6 66.7 77.8 疫 苗 F 38.4 68.4 204.9 285.1 215.3 合格率% 15.9 35.9 58.7 66.9 72.5 注:抗体效价?128，判为阳性 由表2可见，首免后3周抗体水平仍处于较低水平且抗体合格率也较低，二免2周后抗体水平升高，但是抗体水平及检测的抗体合格率并不是很理想。 3.小结与讨论 3.1 本次试验中，使用猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后不良反应较猪口蹄疫O型合成肽疫苗要小的多，基本上无任何不良反应。猪O型口蹄疫合成肽疫苗的多肽抗原纯度高，生产过程中不需要灭活剂灭活，不存在异体蛋白，是一种单一的抗原，能够有效的避免异体蛋白引发的过敏反应。 3.2 从免疫效果来看，由上表的实验数据明显可以看出两者的差距，合成肽疫苗所产生的抗体水平高，且持续时间长。而抗体水平高的主要原因就是合成肽疫苗的核心成分即口蹄疫病毒VP1蛋白的合成及细胞位点的结合系采用全球最先进的合成仪控制，抗原含量精确稳定。据资料报道，目前应用细胞生产口蹄疫灭活苗，其灭活剂BEI只灭活口蹄疫病毒，对培养液中的酶等没有明显作用，而酶在疫苗存放过程中可能会逐渐裂解灭活的口蹄疫病毒，使其效力逐渐减退。而猪口蹄疫O型合成肽疫苗则完全克服了这一缺点，从而使其产品质量非常稳定。 3.3 从接种的剂量上来看，合成肽疫苗一般注射1ml可以保证动物体产生坚强的保护力。而猪口蹄疫O型灭活疫苗要诱发有效的免疫应答，通常需要较大量的抗原， 3 江苏畜牧兽医职业技术学院(设计) 因此，为保证免疫效果而采用2ml注射;其次，猪口蹄疫O型灭活疫苗随着时间的延长，抗原成分会不断被酶降解，免疫效力大大降低，临床应用中也证明了这一点。因此，也需要足够量的抗原，这就造成在增加注射剂量的同时，免疫副反应也相应的增大。 3.4 从检测方面来看，合成肽的检测试剂盒比浓缩灭活苗检测的液相阻断试剂盒方便、高效、且成本低。 口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果明显优于灭活苗，在首免4周后抗体大幅提升，免疫期维持时间长，发生的应激反应小，几乎没有任何不良反应，且注射剂量小，在用专用的VP1结构蛋白抗体ELISA检测抗体时，合格率高，且检测抗体结果所需的时间短，于目前我市防控口蹄疫采取一年春秋两次防疫具有重大的意义。 参考文献 1(胡仁莉,俞小红. 推广使用猪O型口蹄疫合成肽疫苗[J].苏州农业信息，2008,9(13):25-26. 2(唐彩华,毛江森,陈勇.合成肽疫苗的免疫原性[J].国动物检疫, 2007,4(2):30-31. 3. 张永光,刘湘涛,朱长光等. 2006年口蹄疫发生趋势预测分析及其防控对策[J].中国兽医科学,2007,37: 619- 622. (徐新红,刘佩红,屠益平等. 猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果试验[J].规模养猪, 4 2008,5:40-41. 5. 周静华,高永兴,朱斌.合成肽免疫效果试验[J].上海畜牧兽医通讯，2009,2:50-53. 6. 潘君，祝俊杰，韦海涛，等.牛O型口蹄疫灭活疫苗免疫程序的试验,J,.中国兽医杂志，2008，44(10):91-92. 4