植酸酶

植酸酶 水 产 动 物 营 养 学 生命科学学院 水产养殖第8组 引言: 大部分鱼类饲料都以植物性原料为基础，而60,,80,的磷结合在植酸中，很难为鱼类消化利用。为满足鱼类对磷的需要，饲料中又添加了大量磷， 由于鱼体内缺乏分解植酸的内源性植酸酶，未被动物体利用的大量植酸磷排出体外，造成磷的浪费;排出体外的磷进入土壤和水中，造成BOO(生化需氧量1和COD(化学需氧量)值升高，水中溶氧量减少、水质恶化等，养殖水体中排放的饲料磷促使水体中浮游植物大量繁殖，甚至可能诱发赤湖，造成海中浒苔泛滥，给江河湖泊及海水带来巨大的损失。本实验在饲料中添加浓度(3,)植酸酶，探讨其对尼罗罗非鱼的生长性能、表观消化率及血清非特异免疫的影响。 一、实验 1.材料与方法 1.1 实验用鱼:罗非鱼，河南新乡 中文学名: 罗非鱼 亚纲:辐鳍鱼亚纲 拉丁学名:Tilapia 目:鲈形目 别称:非洲鲫鱼、南鲫、越南鱼 亚目:鲈 形亚目 界:动物界 科:丽鱼科 门:脊索动物门 属:罗非鱼属 纲:鱼纲 罗非鱼(Tilapia)为一种中小形鱼。现在它是世界水产业的重点科研培养的淡水养殖鱼类，且被誉为未来动物性蛋白质的主要来源之一。原产于非洲，属于慈鲷科之热带鱼类，和鲈鱼相似。通常生活于淡水中，也能生活于不同盐份含量的咸水中，可以存活于在湖，河，池塘的浅水中。它有很强的适应能力，且对溶氧较少之水有极强之适应性。绝大部分罗非鱼是杂食性，常吃水中植物和碎物。此鱼在面积狭小之水域中亦能繁殖。甚至在水稻田里能够生长。食物是促进鱼类生长的最重要的因素之一，鱼类吸取的食物及营养物质的分配利用是有效提高养鱼产量的前提。 1.2 实验与实验饲料 80尾平均体重为5g的罗非鱼，选自河南新乡。随机分为两组:对照组和实验组，每组三个重复，每个重复20尾罗非鱼。各组的饲料配比如表1。 表1 各试验组饲料配比及成份 原料 对照组?(%) 试验组 ?(%) 试验组?( %) 试验组 ?(%) 次粉 20 20 20 20 鱼粉 25 25 25 25 大豆粕 25 25 25 25 菜粕 13 13 13 13 麸皮 12 12 12 12 大豆油 60ml 60ml 60ml 60ml 多维 0.6 0.6 0.6 0.6 多矿 1.2 1.2 1.2 1.2 胆碱 0.6 0.6 0.6 0.6 三氧化二铬 0.5 0.5 0.5 0.5 水 5 5 5 5 植酸酶 0 0.1 0.2 0.3 1.3 饲养管理 试验在河南师范大学水产养殖基地流水养殖系统中进行，六天的暂养，之后用实验饲料投喂。每天饲喂3次:7:30、12:30、19:30，投饲率为2%-4 %，饲喂期为21d。饲养结束后测定各组罗非鱼的生长性能、血液溶菌酶活性和表观消化率的表达。 2 .测定指标 2.1 生长指标 试验结束后，各组的试验罗非鱼采用电子天平逐条称量体重(精确到0.01g)和体长，计算试验罗非鱼的存活率、增重率、饲料系数及饲料转化率。 2.2 血液免疫指标测定 2.2.1 采样 每重复随机取4到10尾鱼，取头肾在生理盐水中研磨制备血清，将所抽取 的全血离心10 min，取上清，冰箱中冷藏待测。 2.2.2 溶菌酶活性测定 每个样品取3 ml菌悬液，吸取0.04 ml血清加到3 ml菌悬液中，混匀后立刻在25 ?，540 nm处测定0 min和30min的吸光度值。以每分钟吸光度值降低0.001为1个酶活单位 2.3 表观消化率及饲料干物质的测定 2.3.1 收粪 投喂试验饲粮 15天后， 采用虹吸法，在每天投喂 2 h后开始收集粪便,收集时用捞网捞起条状粪便， 用镊子选择新鲜、 外表带有包膜、尽可能完整的粪便放人干净培养皿中，6O?烘干，共收集9天的粪便，4?保存，待测干物质、表观消化率等 2.3.2 饲料干物质的测定 洁净称样皿，在105??2?烘箱中烘1h(以温度到105?开始计时)，取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min称重。再同样烘干1h，冷却称重，直至两次称重之重量差小于0.002g。 称取1克饲料，在105??2?烘箱中烘2h取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min称重。再同样烘干1h，冷却称重，直至两次称重之重量差小于0.002g。将称样皿放在干燥器中，待测表观消化率。 2.3.3表观消化率的测定(三氧化二铬的测定) 称取样品1g ，置蒸发皿中，加入20%碳酸钠溶液5ml ,使充分浸润,先低温炭化,待浓烟挥尽，移入580?高温炉中灰化成白色灰烬,冷却。用25ml水分次洗入150ml 三角瓶中,加2%高锰酸钾溶液5滴,使成紫红色,煮沸5,10min ,煮沸过程中应保持溶液呈紫红色,否则应补充2%高锰酸钾溶液。然后沿瓶壁加入乙醇2ml，继续加热至溶液变为黄棕色,冷却,用5mol/l 硫酸调节溶液呈酸性(pH=1,3) ,摇匀并过滤于50mL容量瓶中,用水洗涤三角瓶和滤纸,合并滤液。溶液经Cr3+定性检查已不显色,证明Cr3+完全转化为Cr6+。加入2.5ml 二苯胺基脲溶液摇匀,加水至刻度,10 min后于(540?1)nm 波长处测定其吸收度。用此法还需测定标准溶液的吸光值，绘制标准曲线。 二、实验结果处理及分析 1、溶菌酶活性的测定 组 1 2 3 4 时间 0 min 0.722 0.718 0.719 0.740 40 min 0.700 0.702 0.703 0.718 每分钟吸光度值降低0.001为1个酶活单位 ,计算结果绘制曲线如下图 2、罗非鱼的饲料利用率,1、2、3试验组,4对照组, 饲料利用率 =所喂饲料/(喂料后体重-喂料前体重)×100% 由于水体中饲料比较难以收集且量比较少，所以不计算鱼类未摄入的量。 罗非鱼:饲料饲喂情况如下表: 4.25 - 5.6 5.7 - 5.20 5.21 - 5.30 5.30 - 6.2 合计总量 日 期 12天,2.00,, 14天 10天,5.33,, 3天, 20.00,, 组数 ,3.00,, 1(g) 35.1744 61.5552 78.1164 87.9359 262.78 2(g) 32.4984 56.8722 72.1735 81.2460 242.79 3(g) 30.5808 53.5164 67.9748 76.4520 228.52 4(g) 29.6544 51.8952 65.8574 74.1360 221.54 罗非鱼,饲料利用率及饲料系数,饲料系数,饲料消耗量 / 增重量 ×100%) 组数 1 2 83 4 项目 初始体重,g, 146.56 135.41 127.42 122.04 试验末体重,g, 205.34 187.28 182.49 220.57 55.07 98.53 净增体重,g, 58.78 51.87 增重率 40.10% 38.31% 43.21 % 80.73% 投喂饲料量,g, 262.78 242.19 228.52 221.54 饲料利用率,,, 22.37% 21.42% 24.10% 44.48% 饲料平均利用率 22.635 44.48% 饲料系数 4.47 4.67 4.14 2.25 平均饲料系数 4.43 2.25 3、三氧化二铬(CrO)的测定(4为粪便，1、2、3为饲料) 23 试验饲料的干物质的表观消化率 =(1 - 饲料中 c r 2 0 3 含量 /粪中C r 2 0 3 含 空坩埚,g, 材料重量,g, 坩埚和材料,g, 项目 组数 加热前 加热后 两次差 初始 末尾 第一次 第二次 两次差 1,g, 26.8271 26.8770 0.0001 0.3050 0.2 354 27.1168 27.1122 0.0046 2,g, 25.8473 25.8472 0.0001 0.3035 0.2866 26.1369 26.1338 0.0031 3,g, 28.2133 28.2132 0.000 1 0.3023 0.2793 28.4975 28 .4925 0.0050 4,g, 25.4651 25.4647 0.0004 0.0 857 0.0800 25.5458 25. 5447 0.0011 量)× 100, 注,两次之差?0.002g。 干物质的量的测定 组数 m0 m2 m1 干物质的 干物质平 量% 均值% 实验组 26.877 27.11220.3050 77.1148 s1 实验组 25.8472 26.1338 0.3035 94.4316 s2 87.979 实验组28.2132 28.4925 0.302392.3917 s3 实验组 25.4647 25.5458 0.0857 94.6324 94.6324 f 标准曲线, 浓度mol,L 0 1.6 3.2 4.8 6.4 8 吸光度值 0 0.61 1.122 1.633 2.002 2.356 组数 1 2 3 45,对照, 吸光值 0.065 0.317 0.429 1.144 0.1750 表观消化率结果 浓度 吸光度值 表观消化 率% 实验组s1 4.585034 0.065 16(39 实验组s2 4.510204 0.317 实验组s3 4.554422 0.429 实验组f 5.57483 1.144 三、讨论 实验数据:在做增重的实验实验，统计最后的数据明显发现，和别组相比罗非鱼增重不是很明显，鱼类的饲料利用率不高。可能和添加的植酸酶有关，因为第4组对照组明显比较重。 最后的表观消化率和对照组相比，还是偏低。 实验体会:收获了很多的操作知识和基础知识，增强动手能力。从饲料的配制，鱼类的投喂，到后来的取脾脏，吸粪便，收残饵。 参考文献 1( 王广军，吴锐全，谢骏(军曹鱼饲料中用豆粕代替鱼粉的研究(大连水产学院 学报，2005，20(4):304—307 2( 王桂芹，周洪琪，陈建明(翘嘴红鱼fI对饲料蛋白的营养需求及豆粕对鱼粉的适 宜替代量(中国水产科学，2006，13佗1:277(285 3. 冷向军，王文龙，周洪琪(不同大豆产品替代鱼粉饲养南美白对虾的试验(淡 水渔业，2006，36(3):47--49 4( 张文兵，谢小军，付世杰(南方大口鲶饲料的最适蛋白质水平(水生生物学报， 2000，24(6):603—60 5(张玲华，丘银清，田兴山(微生物发酵大豆蛋白在养殖业中的应用前景(兽药 与饲料添加剂，2005，10(3):17-19 6( 陈冬梅，邰秀琳，周克勇(植酸酶和柠檬酸对肉鸡生产性能的影响(西南农业 大学学报，2003，25(2):111-114