Integrinβ3，Survivin 在CINⅢ及宫颈鳞癌中的表达及对宫颈鳞癌化疗的意义研究

Integrinβ3，Survivin 在CINⅢ及宫颈鳞癌中的表达及对宫颈鳞癌化疗的意义研究 Integrinβ3，Survivin 在CIN?及宫颈鳞癌中的表达 及对宫颈鳞癌化疗的意义研究 暨南大学硕士学位论文 中文 摘要 研究目的 本课通过研究 CIN?及宫颈鳞癌 中 I nt e gr i n β 3, S ur vi vi n 的表达, 以及它们在宫颈 鳞 癌 NACT 前 后 的 变 化 , 了 解 其 与 宫 颈 鳞 癌 的 临 床 病 理 特 征 之 间 的 关 系 , 进 一 步 探 讨 其 在 宫 颈 鳞 癌 的 发 生 发 展 中 的 作 用 , 同 时 观 察 化 疗 药 物 作 用 后 二 者 的 表 达 变 化 与 疗 效 的 关 系 。 研究方法 1.选取 C I N ?20 例 ,宫颈鳞癌组织 62 例(31 例患者,新辅助化疗前后各取材一次) , 按 F I G O 2000 年修订的临床分期, ?B 期 5 例, ?A 期 1 1 例, ?B 期 15 例,另外取 10 例正常宫颈组织作对照。 2.采用免疫组织化学二步法, 检测正常宫颈组织、 CIN ?及宫颈鳞癌组织 ( NACT 前后) I nt e gr i n β 3, S ur vi vi n 的表达。I nt e gr i n β 3 阳性表 达为肿瘤细胞膜或细胞质呈棕黄色。 S ur vi vi n 表现为肿瘤细胞浆及部分细胞核 出现淡黄至棕黄色颗粒,凡胞质或胞核与背景 无明显差异者均为阴性。 3.通过图象分析软件 I m a ge - P r o P l us 6.0 对组织标本中的 I nt e gr i nβ 3, S ur vi vi n 阳性表达 进行半定量分析,其阳性表达采用 OD 值,用 ?S 形式表示。采用 SPSS-17.0 数据处理 , 采用 t 检验, Fisher 确切概率法 ,方差分析及 Spearman 相关分析进行统计学分析。 结果 1. I nt e gr i nβ 3 在 CIN ? 及 宫 颈 鳞 癌 NACT 前 组 织 的 中 表 达 逐 渐 增 强 , 有 统 计 学 意 义 (F12.731 , P0.000) 。 I n t e gr i nβ 3与临床分期 、 组织分化及淋巴结 状态相关 (P <0.05) , 而与患者年龄 无相关 ( P>0.05) 。 S ur vi vi n在CIN?及宫颈鳞癌NACT前 组织的中表达逐渐 增强, (F 12.877 ,P0.000 ) 。 S ur vi vi n与宫颈鳞癌的临床分期、 组织分化及淋巴结转 移相关(P< 0.05) ,而与患者年龄无关(P>0.05) 。 2. I n t e gr i n β 3 、S ur vi vi n 在 NACT 后 阳性表达均明显降低,有统计学意义( t2.112,P < 0.05;t2.118 ,P<0.05。 3.21 例 临 床 有 效 组 病 例 中 , NACT 后 I n t e gr i nβ 3 、 S ur vi vi n 表 达 明 显 减 弱 , 差 异 有 统 计 学意义( t 2.742, P 0.05;t2.648, P 0.05) ;10 例临床稳定组化疗后二者下降不明 显。 NACT 后 有效CR+PR 组 I nt e gr i nβ 3, S ur vi vi n 下调的比例均要明显高于 NACT 稳定组 SD, I暨南大学硕士学位论文 比较均有统计学差异 P 0.040。 4. I n t e gr i n β 3与S ur vi vi n 阴性患者化NACT后完全缓解率均明显高于对应的阳性患者。 5.NACT 后, 组织学?、 ?级分化组 , Integrinβ3表达降低( P 0.05) 。 NACT后I nt e gr i n β 3阳性表达变化与年龄、临床分期、组织学?级分化、淋巴结状态无关P 0.05 。 S ur vi vi n在?、?级分化组及淋巴结无转移组 NACT后表达降低( P 0.05) 。而与年龄、临 床分期、组织学 ?级分化、淋巴结转移无关P 0.05。 结论 1.I nt e gr i n β 3 从 CIN?到宫颈鳞癌的阳性表达增强,其 阳性表达与患者的临床分期 、 病 理分级、淋巴结转移均 有关。 2.S ur vi vi n 从 CIN?到宫颈鳞癌的阳性表达 也是增强的, 其阳性表达 与患者的临床分期、 病理分级、淋巴结转移均 有关。 3. NACT 后 I nt e gr i nβ 3 ,S ur vi vi n 表达水平显著下降,化疗后 二者表达明显下调的,相 应的临床疗效好 。 关键词 宫颈鳞 癌;新辅助化疗 ;nt e gr i n β 3; S ur vi vi n I I暨南大学硕士学位论文 A A A A B B B B S S S S T T T T R R R R A A A A C C C C T T T T O O B B JE JE C C T T I I V V E E O O B B JE JE C C T T I I V V E E B y s t udy e x pr e s s i on of I nt e gr i n β 3, S ur vi vi n i n C I N ? a nd c e r vi c a l s qum ous C a r c i nom a be f or e a nd a f t e r ne oa dj uva nt c he m ot he r a py ,t o e x pl or e t he r e l a t i ons hi p be t w e e n t he t w o i nde x e s a nd t he c l i ni c a l a nd pa t hol og i c f e a t ur e s of c e r vi c a l di s e a s e , t o a s s e s s t he r ol e i n a ppr a i s i ng t he e f f i c a c y of ne oa dj uva nt c he m ot he r a py f or c e r vi c a l c a nc e rM M E E T T H H O O D D S S M M E E T T H H O O D D S S 1.C I N ? of 20 c a s e s a nd C e r vi c a l s qum ous C a r c i nom a of 62c a s e s 31 c a s e s , be f or e a nd a f t e r N e oa dj uva nt c he m ot he r a py t o dr a w n t he m a t e r i a l s ,f ol l ow e d F I G O 2000 c l i ni c a l s t a nda r d: T he r e w e r e 5 c a s e s of ?B ,1 1 c a s e s of ?A ,15 c a s e s of ? B , e x c e pt t ha t ,10 c a s e s of nor m a l c e r vi c a l t i s s ue s f or c ont r ol g r oup. 2.W e a dopt e d T w o- s t e ps i m m unohi s t oc he m i c a l s t a i m i ng m e t hod t o de t e c t t he e x pr e s s i on of I nt e gr i n β 3 a nd S ur vi vi n i n nor m a l c e r vi c a l t i s s ue s ,C I N ? t i s s ue a nd C e r vi c a l s qum ous c a r c i nom a be f or e a nd a f t e r N A C T .P os i t i ve e xpr e s s i on of I nt e gr i nβ 3 c a n be s c a ne d a s br ow m g r a nul a r s ubs t a nc e i n m e m br a nc e or c y t opl a s m ; E xpr e s s i on of s ur vi vi n c a n be c he c ke d a s y e l l ow t o br ow m pa t i c l e s ,m a i nl y i n c y t opl a s m a nd nuc l e us .I f t he c y t opl a s m or nuc l e us ha s no di f f e r e nt w i t h ba c kgr ound,i t w a s ne ga t i ve e f f e c t3.T he i m a g e a na l y s i s s of t w a r e of I m a ge - P r o P l us 6.0 w a s ut i l i z e d f or s e m i - qua nt i t i ve a na l y s i s of I nt e g r i nβ 3 a nd S ur vi vi n e x pr e s s i on,i n a f or m of opt i c de ns i t y O D w i t h , m e a n ? s t a nda r d de vi a t i on.S P S S 1 7.0 w a s us e d f or s t a t i s t i c a l a na l y s i s ,i nc l udi ng t T e s t ,F i s he r s E x a c t T e s t , V a r i a nc e a na l y s i s a nd S pe a r m a n r a nk c or r e l a t i ons a na l y s i sR R E E S S U U L L T T S S R R E E S S U U L L T T S S 1.T he e x pr e s s i on of I nt e gi nβ 3 a nd S ur vi vi n g r a dua l l y e nha nc e d f r om C I N ? t o c e r vi c a l s qum ous C a r c i nom a ,w hi c h ha ve s t a t i s t i c a l s i g ni f i c a nc e ( F 12.731,P 0.000 ; F 12.877 ,P 0.000 ).T he r e i s a r e l a t i on be t w e e n I nt e g r i nβ 3 a nd c l i ni c a l s t a g e s 、or g a ni z a t i on di f f e r e nt i a t i on a nd l y m ph node s t a t us (P < 0.05 ) ,how e ve r i t w a s not r e l e va nt w i t h t he pa t i e nt a ge P 0.05S ur vi vi n w a s r e l a t e d w i t h c l i ni c a l s t a g e s ,or g a ni z a t i on di f f e r e nt i a t i on a nd l y m ph node m e t a s t a s i s of c e r vi c a l s qua m ous c e l l c a r c i nom a P < 0.05 ) ,ha s no c onne c t i on w i t h pa t i e nt a ge P >0.052.B ot h e xpr e s s i on of I nt e gr i n β 3 a nd S ur vi vi n w e r e s i g ni f i c a nt l y r e duc e d a f t e r ne oa dj uva nt I I I暨南大学硕士学位论文 c he m ot he r a py (t 2.1 1 2, P < 0.05; t 2.1 1 8 ,P < 0.053.I n c l i ni c a l e f f e c t i ve g r oup 21 c a s e s ,bot h e x pr e s s i on of I nt e gr i nβ 3 a nd S ur vi vi n w e r e s i g ni f i c a nt l y r e duc e d a f t e r c he m ot he r a py (t 2.742, P 0.05; t 2.648, P 0.05 ) ; N o s i g ni f i c a nt de c l i ne i n 10 c l i ni c a l l y s t a bl e g r oup a f t e r N A C TT he de c l i ne pr opor t i on of I nt e g r i nβ 3 a nd S ur vi vi n w e r e obvi ous l y hi g he r i n c l i ni c a l s t a bl e g r oup t ha n t o t he e f f e c t i ve C R + P R g r oup P 0.0404.T he c om pl e t e r e m i s s i on r a t e of I nt e gr i n β 3 a nd S ur vi vi n w i t h ne ga t i ve w a s s i g ni f i c a nt l y hi g he r t ha n t he c or r e s pondi ng w i t h pos i t i ve5.T he e x pr e s s i on of I nt e g r i nβ 3 de c r e a s e d a f t e r N A C T i n t he hi g h- m i ddl e di f f e r e nt i a t i on g r oup (P 0.05 ) .T he e x pr e s s i on of I nt e g r i nβ 3 i n C e r vi c a l s qua m ous c a r c i nom a a f t e r N A C T w a s not a s s oc i a t e d w i t h a ge ,c l i ni c a l s t a ge , l ow di f f e r e nt i a t i on a nd l y m pha t i c m e t a s i t a s i s s t a t us P 0. 05 .T he e x pr e s s i on of S ur vi vi n de c r e a s e d a f t e r N A C T us e d i n t he hi g h- m i ddl e di f f e r e nt i a t i on g r oup w i t h no l y m pha t i c m e t a s i t a s i s g r oup ( P 0.05 ) , T he pos i t i ve e x pr e s s i on c ha nge of S ur vi vi n i n c e r vi c a l s qua m ous c a r c i nom a be f or e a nd a f t e r N A C T w a s not a s s oc i a t e d w i t h a ge of pa t i e nt s ,c l i ni c a l s t a ge ,l ow di f f e r e nt i a t i on a nd l y m pha t i c m e t a s i t a s i s P 0. 05C C C C O O O O N N N N C C C C L L L L U U U U S S S S I I I I O O O O N N N N 1.T he pos i t i ve e x pr e s s i on of I nt e gr i n β 3 r i s e f r om C I N ? t o c e r vi c a l s qum ous C a r c i nom a .T he r e i s a r e l a t i on be t w e e n I nt e gr i n β 3 a nd c l i ni c a l s t a g e s ,or g a ni z a t i on di f f e r e nt i a t i on a nd l y m ph node s t a t us2.T he pos i t i ve e x pr e s s i on of S ur vi vi n r i s e f r om C I N ? t o c e r vi c a l s qum ous C a r c i nom a .T he pos i t i ve e x pr e s s i on of S ur vi vi n ha s c onne c t i on w i t h c l i ni c a l s t a ge s ,or g a ni z a t i on di f f e r e nt i a t i on a nd l y m ph node s t a t us3.S i g ni f i c a nt l y de c r e a s e d e x pr e s s i on of I n t e gr i n β 3 a nd S ur vi vi n a f t e r N A C T , i ndi c a t e d t ha t t he y a r e c l os e l y r e l a t e d t o t he e f f i c a c y of ne oa dj uva nt c he m ot he r a py f or c e r vi c a l c a nc e rK K K K E E E E Y Y Y Y WO WO WO WO R R R R D D D D S S S S C e r vi c a l s qum ous C a r c i nom a ; N e oa dj uva nt C he m ot he r a py ; I nt e g r i nβ 3; S ur vi vi n I V暨南大学硕士学位论文 英文 缩略 表 C I N C e r vi c a l i nt r a e pi t he l i a l ne opl a s i a 宫 颈上皮内瘤变 N A C T N e oa dj uva nt or pr i m a r y c he m ot he r a py 新辅 助化疗 D A B 3,3- di a m i no be nz i di ne 3,3- 二氨基邻本胺 O D opt i c a l de ns i t y 光密度 A O D A v e r a ge O pt i c a l de ns i t y 平均光密度 C R C om pl e t e r e m i s s i on r e s pons e 完全缓解 P R P a r t i a l r e m i s s i on r e s pons e 部分缓解 S D S a bl e di s e a s e 稳定 P D P r ogr e s s i on di s e a s e 进展 T P P a c l i t a x e l C i s pl a t i n 紫杉醇与顺铂 S P S t r e P t a vi di n 一 P e r os i da s e 链毒菌抗生物素蛋 白 一过氧化物酶连结 法 I A P i nhi bi t or of a p opt os i s pr ot e i ns 凋亡抑制蛋白 M M P s M a t r i x m e t a l l opr ot e i na s e 基质金属蛋白酶类 P C D P r ogr a m m e d c e l l de a t h 细胞程序性死亡 E C M E xt r a c e l l ul a r m a t r i x 细胞外基质 F A P F oc a l a dhe s i on pl a que 粘着斑 S T 6G a l I a 2 , 6 一 S i a l y l t r a ns f e r a s e a 2, 6 一唾液酸转移酶 V暨南大学硕士学位论文 目 录 中文摘 要……………………………………………………………………………………? Abstract……………………………………………………………………………………? 英文缩略 表 …………………………………………………………………………………? 目 录…………………………………………………………………………………………? 前 言……………………………………………………………………………………… … 1 第一章 I nt e gr i n β 3,S ur vi vi n与宫颈鳞癌的关系……………………………………… 7 资料和方 法 ………………………………………………………………………………… 7 1 研究对 象 ……………………………………………………………………………( 7 2 实验方 法 …………………………………………………………………………… 8 3 统计学方 法 ………………………………………………………………………… 10 结 果…………………………………………………………………………………………11 讨 论…………………………………………………………………………………………13 第二章 I nt e gr i n β 3,S ur vi vi n 在宫颈鳞癌新辅助化疗前后的变化及意义………………15 资料和方 法 …………………………………………………………………………………15 1 研究对 象 …………………………………………………………………………… 15 2 实验方 法 …………………………………………………………………………… 15 3 统计学方 法 ………………………………………………………………………… 17 结 果………………………………………………………………………………………… 18 讨 论………………………………………………………………………………………… 25 结 论…………………………………………………………………………………………(29) 参考文 献……………………………………………………………………………………(30) 附 图…………………………………………………………………………………………(35) 在校期间发表论文及参与课 题……………………………………………………………(37) 致 谢…………………………………………………………………………………………(38) V I暨南大学硕士学位论文 前 言 I n t e g r i n 1 I n t e gr i n 的特点及功能 I n t e gr i n 也称整合素, 是一类重要的细胞表面粘附分子 , 由α 和β 两个亚基组成的异源二 聚体跨膜蛋白,组成至少 24 种整合素 [ 1] 。I n t e gr i n 作为细胞内外的桥梁 , 一方面负责介导 细胞与细胞 、 细胞与细胞外基质以及细胞与病原体的相互作用, 另一方面可以双向传递跨 膜信号,其多样性和复杂性 ,决定了它生理功能的多样性和重要性 。 I n t e gr i n α vβ 3、 α 6β 4 与肿 瘤的形成相关 , 而α ?bβ 3、 α 2β 1 与血栓的形成相关, 而α 4β 7 等整合素与炎症形成相关 ( 如 图 A ) 。 I n t e gr i n 对于免疫反应 、 免疫细胞的组织定位 、 凝血组织愈伤、 癌细胞转移以及组 织 和器官的发育等都至关重要(如图 B ) 。这些功能都是通过由内到外 i ns i de 一 out 和 由 外到内 out s i de 一 i n 双向传递跨膜信号 [ 2- 4] 。 I n t e gr i n 与 其 相 应 配 体 结 合 , 可 引 起 细 胞 内 多 个 信 号 转 导 通 路 的 激 活 , 瀑 布 式 激 发 下 游 通 路 , 从 而 完 成 各 项 生 物 学 功 能 。 一 种 配 体 可 以 和 多 种 整 合 素 结 合 , 同 时 一 种 I n t e gr i n 也 可 以 与 多 种 配 体 结 合 。I n t e gr i n 与 其 配 体 的 结 合 是 一 种 动 态 可 逆 的 过 程 , 该 过 程 是 由 其 与 配 体 的 低 亲 和 力 l ow a f f i ni t y 构 象 、 中 间 亲 和 力 i nt e r m e di a t e a f f i ni t y 构 象 以 及 高 亲 和 力 hi gh a f f i ni t y 构象调节变化实现的[ 5] ,并且各种亲和力构象之间处于动态的平衡。 2 I n t e gr i n 与肿瘤的侵袭及转移 不同于正常组织和细胞, I n t e gr i n 在肿瘤细胞出现异常的高表达,或出现新的表达, 这 1暨南大学硕士学位论文 些异常表达改变了肿瘤细胞与基质的黏附从而使得细胞更具有侵袭性 , 同时I n t e gr i n 与其配 体 结合后向细胞内传递信号介导的 F A K / R a s / M A P K 、 F A K / P I 3 K 、 F A K / S T A T 等 多条通路 信号转导, 进而影响肿瘤细胞的粘附变化及迁移; 影响细胞的增殖及存活; 导致细胞的生 长停滞及调节分化。 近年的研究 也证实了 I n t e gr i n 表达缺失或过表达 , 可使干细胞不能按正 常途径进行分化增殖 , 从而导致上皮细胞病变乃至癌变[ 6, 7] 。 恶性肿瘤之所以危害严重,原因主要在于具有侵袭性、 转移性, 而粘附在肿瘤扩散中 起重要作用 , 而整合素在粘附中起到了重要作用。 整合素对肿瘤细胞的侵袭及转移影响可 从以下分析中明确。 首先, 异质粘附发挥作用, 致肿瘤细胞由原发瘤游出,并穿过基底膜, 进入间质及脉管 系统。 基底膜成分包括有纤连蛋白 F N 、 层黏蛋白 L N 、 ?型胶原等 , 而许多类型的肿 瘤细胞表面具有丰富的 L N 受体,随着肿瘤形成, 其L N 受体 如α vβ 3、 α ?bβ 3 数目也增 多。 而肿瘤细胞表面的α ?bβ 3以纤维蛋白原作为介导参与肿瘤细胞之间的聚集以及肿瘤细 胞与血小板 、 内皮细胞的相互作用, 从而参与瘤栓的形成。 其次, 肿瘤细胞的侵袭及转移, 必须突破基底膜 。 完整的基底膜是限制肿瘤细胞浸润及转移的有效屏障 , 肿瘤细胞只有突 破了基底膜才能向远处播散转移 。 而这个过程需要降解基底膜 。 金属蛋白酶类 M M P s 则 在肿瘤侵袭和转移中发挥了重要作用。 肿瘤细胞的侵袭转移能力与其诱导产生蛋白酶降解 细胞外基质尤其是基底膜的能力有关,而且 I nt e gr i n的高表达会促进 M M P s 和其他基质降解 蛋白酶的生成增加 [ 8] [ 9] 。 最后, 肿瘤细胞的移动可以是随机的 , 也可朝向趋化物的 。 虽然 整 合 素 族 细 胞 外 基 质 受 体 与 其 配 体 结 合 的 亲 和 性 不 高 , 但 由 于 在 细 胞 表 面 数 量 较 多 , 通 过 调节结合, 从而实现受体在胞外基质迁移过程中的的反复结合与分离。 此外, 由于肿瘤细 胞 表 面 I n t e gr i nβ 3 的 高 表 达 , 促 进 了 血 小 板 的 聚 集 ; 而 I nt e gr i nβ 2 与 白 细 胞 的 结 合 , 促 进 肿 瘤 细胞与血管的黏附的保护层, 有利于肿瘤细胞逃避免疫攻击 , 这些作用共同促进了肿瘤的 转移[ 10] 。 3 I n t e gr i n β 3与肿瘤 目前有一些对 I n t e gr i n β 3与肿瘤的形成及发展转移的研究。如α vβ 3 与生长因子受体的 相互作用可促进肿瘤细胞的有丝分裂,促进肿瘤形成。 而且α vβ 3的重新表达或上调与许多肿 瘤细胞的表型和能动性增强密切相关, 如乳腺瘤[ 1 1 ] 。 研究还发现, 表达α vβ 3的瘤细胞是血 源性扩散所必需的 , α v β 3功能被抑制后将大大阻碍瘤细胞向靶器官的侵 袭。这很可能进一 步说明α vβ 3可调控瘤细胞的迁移和侵袭,[ 12] 。C he n 等[ 15] 研究表明软骨肉瘤中I n t e gr i nβ 3 2暨南大学硕士学位论文 可以诱导M M P 9和骨桥蛋白的表达促进肿瘤的转移。 由此看出, I n t e gr i nβ 3对肿瘤的迁移有 重要影响。 此外,I n t e gr i n β 3还可以通过激活 V E G F 信号通路或通过E G F R 调控和促进 E phA 2 激活V E G F 信号通路进而调控血管的生成 [ 13,14] 。 以上报道均证实了, 整合素的异 常表达与肿瘤的形成、发展及转移密不可分。 Y u 等 [ 16] 的研究证实了m i c r oR N A 30 可以通过降低I n t e gr i n 的表达从而减少了乳腺癌 细胞的原发位增殖 。 R e bhun 等[ 17] 在研究中发现在鼠黑色素瘤中I n t e gr i n α 4的表达不仅可以 促进原发位的肿瘤增生 , 还可以促进淋巴转移而促进肿瘤转移。 在肝癌和前列腺癌的研究 中也观察到了 I n t e gr i n 的表达与原发位的增殖密切相关。 早先的研究表明I nt e gr i n可以通过影 响p53 等信号通路的调控从而促进肿瘤细胞的增殖[ 18] ,近来研究发现I nt e gr i n 通过偶合蛋 白与E G F R 发生对话激活 E G F 信号通路的胞内部分对原位肿瘤细胞起到了增殖作用 [ 1 9] 。 同时K e nny 等[ 20] 研究还表明了,卵巢癌上与转移密切相关的 α 5β 1与α vβ 3整合素可以增加 M M P 2 的表达 , 并能激活M M P 2 , 从而促进肿瘤细胞的迁移。 这些研究提示了I nt e gr i n与肿 瘤关系的同时, 也提示我们如果 应用整合素抑制剂可以收到良好的抑制肿瘤的效果。 S u r v i v i n 1 S ur vi vi n 的分子生物学特性 S ur vi vi n也称存活素、 生存素, I A P (凋亡抑制蛋白) 家庭的一个成员, 相比其他I A P 家庭成员, 它具有独特的结构和表达 , 基因长度为14. 7 kb, 位于17q25染色体上 。 S ur vi vi n 为晶体结构 ,有棒状区I A P 重复的指状Z n 氨基端, 通过 Z n 原子连接,形成二聚体, 其C 端α 螺旋结构相互作用诱变。有分析显示 S ur vi vi n 的二聚体和带负电荷的伸展表面是抗凋 亡和保护细胞所必需的结构,这决定了其对细胞凋亡和细胞分裂周期具有双重调控作用。 其表达受到细胞周期的调节。 2 S ur vi vi n 的表达特点 S ur vi vi n 的表达有肿瘤特异性: S ur vi vi n 几乎表达于所有肿瘤。 T a m m 等 [ 21] 采用 N C I 抗肿瘤药研究了 60 种人类肿瘤细胞株中 S ur vi vi n 的表达情况,结果所有细胞株均有 S ur vi vi n 表达, 其表达与肿瘤增殖、 凋亡、 血管形成[ 22] ; 病理分级、 临床分期, 患者预后 [ 22 ] ;肿瘤侵袭、转移[ 22] 和放疗、化疗抵抗 [ 23,24] 均有密切关系。 3 S u r v i v i n 的主要功能 3暨南大学硕士学位论文 3.1 拮抗细胞凋亡 细胞凋亡 a popt os i s , 是由基因控制的细胞自主的有序性死亡 , 是生物体借以拮抗有丝 分裂所致的细胞增殖,调节细胞群体数目相对恒定的重要方式。S ur vi vi n 发挥抗凋亡功能 主要作用机制有 : ?经 c a s pa s e 途径抑制凋亡 。 哺乳类 I A P s 阻断细胞色素 C 释放, 直接抑 制 c a s pa s e - 3 和 c a s pa s e - 7 或干扰了 c a s pa s e - 9 的活性,从而阻断下游细胞死亡的共同通路。 ?与 S m a c 分子结合抑制凋亡。 S m a c 能够直接结合 I A P 成员,从而阻断后者对 c a s pa s e 的 抑制作用。 ?与纺锤体微管有关。 S ur vi vi n 是已知的 I A P 家族中唯一与纺锤体微管相关的 蛋白。S ur vi vi n 可能通过对纺锤体微管的作用调节细胞有丝分裂过程,进而发挥其抗凋亡 作用。?通过抑制 p53 的功能阻断凋亡过程[ 25] 。 3.2 调节细胞周期和细胞有丝分裂 L i 等[ 26] 用细胞分裂阻断剂将 H e L a 细胞分别阻断在 G 1 期、S 期和 G 2/ M 期,发 现 S ur vi vi n m R N A 在 G 1 期检测不到,G 2/ M 期达到 40 倍,说明 S ur vi vi n 在 G 2/ M 期特异性 高表达,这提示 S ur vi vi n 与细胞有丝分裂存在密切关系,其过表达可能使肿瘤细胞加快向 S 期转换,抑制 G 1 期静止,通过逃避与细胞凋亡相关的 G 2/ M 期检查点(c he c kpoi nt ) , 以 抗拒细胞凋亡并快速增殖。 3.3 调节细胞分化与转化 当细胞发生转化或恶性变时 S ur vi vi n 又重新表达, 在几乎所有恶性肿瘤中均呈高表达; 另外,它在癌组织中的表达是一个渐进的过程,随着癌前细胞向癌细胞的转化,S ur vi vi n 的表达也逐渐升高,进一步证实了 S ur vi vi n 可调节细胞的分化与转化[ 27] 。 3.4 影响血管形成 肿 瘤 新 生 血 管 的 形 成 是 肿 瘤 生 长 、 局 部 侵 犯 和 远 处 转 移 的 必 要 条 件 。 V E G F 在 血 管 生 成中发挥关键作用 。 S ur vi vi n 表达异常增高可促进 V E G F 诱导的 血管内皮细胞增殖和毛细血 管 网的形成。由此带来的丰富血供可促进肿瘤细胞的生长 , 并 且肿瘤细胞可经由血管发生 转移。 4 S u r v i v i n 与肿瘤 4.1 S ur vi vi n 与肿瘤诊断 4暨南大学硕士学位论文 S ur vi vi n m R N A 和 蛋白几乎在所有被研究的肿瘤中表达 , 并 可能参与了肿瘤的发生、 发展和侵袭转移等过程 [ 28- 32 ] 。 S ur vi vi n 在 癌 组 织 中 的 表 达 是 一 个 渐 进 的 过 程 , 随 着 癌 前 细 胞 向 癌 细 胞 的 转 化 , S ur vi vi n 的表达逐渐升高。目前有研究显示,膀胱癌中尿液 S ur vi vi n 蛋白对诊断膀胱癌的 敏 感 性 近 100% , 特 异 性 达 到 95% , 故 尿 液 S ur vi vi n 检 测 可 能 为 膀 胱 癌 的 诊 断 提 供 新 的 高 敏感性、 高特异性和无创的检测指标 [ 33,34] 。 R oha y e m 等[ 35] 使用纯化重组 S ur vi vi n 和 p53 蛋白 E L I S A 法分别检测 51 例肺癌和 49 例结直肠癌患者的血清, 发现肺癌患者和结直肠癌 患 者 的 血 清 存 在 S ur vi vi n 抗 体 ; Y a g i ha s hi 等 [ 36] 也 采 用 E L I S A 法 检 测 了 63 例 胃 肠 道 肿 瘤 患者的血清,显示血清中有 S ur vi vi n 抗体。这些发现均提示检测体液中的 S ur vi vi n 有助于 早起发现肿瘤,成为检测肿瘤的又一方法。 S ur vi vi n抑制细胞凋亡, 促进细胞分化与转化, 在多种肿瘤中都有高表达, 其在妇科肿 瘤也有着广泛的阳性表达。T a ka i 等[ 37] 通过免疫组化荧光分析法分析31例子宫内膜癌和 20 例正常子宫内膜中 S ur vi vi n表达情况 。 发现在正常子宫内膜组织中S ur vi vi n 几乎无表达,在子 宫内膜癌组织中 S ur vi vi n呈高表达。 对于上皮性卵巢癌,宣樟标[ 38] 等用S - P 法检测了60 例 上皮性卵巢癌及 52例正常卵巢组织,发现上皮性卵巢癌中的S ur vi vi n阳性表达率为73.3% , 正常卵巢组织中 S ur vi vi n的表达率为 15.4% 。 提示S ur vi vi n 的异常表达与上皮性卵巢癌的发生 发展密切相关,对上皮性卵巢癌的早期诊断及预测预后有较高的临床参考价值。 4.2 S ur vi vi n 与宫颈癌 最早研究 S ur vi vi n 在宫颈中的表达是 Y a g i num a 等[ 46] 检测的宫颈癌细胞株及宫颈癌 标本中发现,宫颈组织分化越低,S ur vi vi n 的阳性表达越强,且淋巴结转移组明显高于无 淋巴结转移组 。 Y i n [ 39,40] 等发现在正常宫颈组织中 S ur vi vi n 无表达, S ur vi vi n 表达随宫颈 病变加重逐渐增强,而且与淋巴结转移呈正相关。 从宫颈病变的发展演变研究来看 , K i m 等[ 41] 发现从轻度非典型增生到宫颈癌 , S ur vi vi n 表达率逐渐升高 。 Y o s hi da 等 [ 42] 对比宫颈鳞癌和腺癌的中 S ur vi vi n 表达 , 表明腺癌中 S ur vi vi n 表达更强。 可见, 随着病变恶性程度的升高, S ur vi vi n 的表达水平也升高, S ur vi vi n 参与 了宫颈癌的发生和发展,浸润和转移。 5 以 S u r v i v i n 为靶 向 的肿瘤治疗 近 年 来 靶 向 S ur vi vi n 肿 瘤 基 因 治 疗 方 法 主 要 有 反 义 寡 核 苷 酸 技 术 、 反 义 R N A 技 术 、 5暨南大学硕士学位论文 核 酶 ( r i boz y m e ) 技 术 、 显 性 负 性 突 变 体 技 术 、 免 疫 基 因 治 疗 技 术 以 及 R N A i 技 术 等 , 此 外还有 S ur vi vi n 靶向重组蛋白技术。 有报道, Y M 155 是临床试验成功 的 S ur vi vi n 抑制剂 , 它 在体外实验中可抑制 H e L a 细胞,诱导细胞晚期凋亡, 可增加肿瘤治疗的敏感性。 6 研究目的及方向 本 文 通 过 检 测 CIN ? 及 宫 颈 鳞 癌 患 者 石 蜡 切 片 标 本 的 I nt e gr i n β 3 和 S ur vi vi n 的 表 达 , 以及治疗后 I nt e gr i n β 3 和 S ur vi vi n 的变化,与临床表现和肿瘤的分期分级 的关系, 分析了 与治疗应答的关联 , 探讨它们与宫颈鳞癌发生发展的关系以及能否作为判断疗效和和提示 患者生长情况的指标 。 (实验思路如下图) 。 S Su ur rv viiv viin n? R Re ec cu ur rr re en ntt,,C Ce ellll a ad dh he es siio on n,, s su ur rv viiv va all,,S ST T6 6G Ga all II M Me etta as stta as siis s d dr ru ug g r re es siis stta an nc ce e IIn ntte eg gr riin n? 6暨南大学硕士学位论文 第一 章 I n t e g r i n β 3 、S u r v i v i n 与宫 颈鳞 癌的 关系 资料与方法 1 研究对象 选 取 2008 年 1 月 至 201 1 年 12 月 暨 南 大 学 附 属 第 一 医 院 及 安 徽 省 肿 瘤 医 院 新 辅 助 化 疗 前 宫颈鳞癌患者 31例 (石蜡包块) 、 C I N ?患者20例为研究对象 。 另10例正常宫颈组织作对照 。 其中宫颈鳞癌患者年龄范围在 32- 87 岁,中位年龄为 50岁。C I N ?患者年龄范围26- 62岁 , 中 位 年 龄 46 岁 , 两 组 患 者 年 龄 经 L e ve ne 法 方 差 齐 性 检 验 , 差 异 无 统 计 学 意 义 , 具 有 可 比 性 (P 0.172 ) ,具体患者临床信息见表1。 表 1 患者资料 指标 例数 指标 例数 年龄 岁 组织分化 <50 16 ?、 ? 21 ?50 15 ? 10 临床分期 淋巴结状态 ?B-11A 19 阳性 9 ?B 12 阴性 22 肿块大小 ?4cm 31 1 .1 纳入标准 : ? 所有宫颈癌患者术前均经宫颈病理活检证实为宫颈鳞癌。 ? 宫颈鳞癌患者都为首次就诊。 ? 按照国际妇产科联盟(FIGO分期标准确定临床分期。 ? 排除呼吸、循环、消化系统等的器官病变。 ? 术 前 进 行 血 常 规 、 尿 常 规 、 生 化 电 解 质 、 肝 肾 功 能 、 心 电 图 、 胸 部 正 侧 位 片 、 妇 科 B 超检查无异常。 ? 既往无恶性肿瘤病史或同时存在其他系统的恶性瘤。 1 .2 排除标准: ? 非首次入院,院外已