血小板抗体检测方法的比较

血小板抗体检测的比较 ?310? 盘章绾号:1ool一2087(2oo1)o5一o31o一02 上 血小板抗体检测方法的比较 罔火根,单筠. (1.浙江省永康市中心血库,浙江321300;2.浙江大学医学院附属第一医院,浙江310003) 摘要:目的对抗原捕获酶联免疫吸附试验(MACE)法和周相红细胞牯附试验(SPRCA)法的2种血小扳抗体 分检测方法进行比较.方法l5倒确定血小扳抗体阳性样本和5O倒阴性对照样本,别用2种方法进行血小扳抗体 检测.结果MACE法敏感性为93.3.特异性为96+SPRCA法敏感性为93.3~A,特异性为84结论2种检 的敏感胜,MACE法比SPRCA法具有更高的特异性,但SPRCA法操作简便,更省时 关键词:血小板;抗体;检测 中圉分类号:R331.1文献标识码:A 血小板抗体可以引起多种临床疾病或症状,如 输血后紫殿,血小 同种或自身免疫性血小板减少症, 板输注无效等血小板抗体的检测方法,已报道的有 多种],如血小板免疫荧光试验,固相红细胞粘附 试验(SPRCA),单克隆抗体特异性血小板抗原固定 术(MAIPA),改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验 (MACE)等.我们以流式细胞术法作为参考方法,对 MACE和SPRCA这2种检测血小板抗体的方法进 行了比较,觋报道如下. 材料和方法 一 ,材料 1.试剂SPRCA试剂盒购自美国IMMU— COR公司;MACE试剂盒购自美国GTI公司;流式 细胞仪试剂:PE标记的鼠抗人IgG和同型对照PE 标记小鼠IgG,购自美国BD公司 2.仪器酶标仪为法国巴斯德公司产品,型号 LP~0;流式细胞仪为美国BD公司产品,型号为 FACSCalibur 二,方法 SPRCA法具体操作参见文献].流式细胞术操 作参见文献],MACE法操作简述如下:富血小板 血浆离心去血浆,用血小板保养液洗2次,加100l 待检血清混匀,37~C温育30min,取出,洗2次,加 120l细胞离子缓冲液,混匀.取对应的两排反应条 (上端分别用蓝色和红色标明含单克隆HLAI类抗 体和GP?b/Ia抗体),分别加50I上述致敏的血 小板于对应的孔中,37?温育30rain.洗涤,加5Ol 抗人IgG,37"C温育30min.洗涤,显色,室温避光孵 育30min.终止反应测405llmA值.A值等于或大 于2倍阴性对照A值的结果即为阳性 三,检测对象 1.正常对照组50例,均为男性,年龄18,50 岁(平均29岁). 2.特发性血小板减少性紫癜(ITP)组15例, 男5例,女10倒,年龄15~46岁(平均27岁),按文 献诊断. 结果 结果见1,表2 表13种方法硷测血小板抗体的结果 注:ITP组样本为选择性样本,印渡式!町盼术{击橙血小板抗 体阳性者.3种方法结果,经妒检验.3.02.P>0.05 表2MACE法和sPRcA法检测血小板抗体的比较 方法真阳性幢阴性真阴性假阳性敏感性()特异性() 注:以渡式细胞术法作为参考方{击 讨论 在血小板抗体检测方法中,MAIPA法可以认 为是一种参考方法,而流式细胞术法与MAIPA法 有几乎相同的敏感性和特异性].因此,在本研究 中,我们用流式细胞术法所做结果作为参考结果从 表l结果可知,虽然SPRCA法有较高的假阳性,但 是3种方法检测血小板抗体的结果无显着性差异, (下转第320页) 测期缩短至感染后7,8周.重组免疫斑点检测法 (RIBAs).--f用于证实EIA法出现的假阳性,不推荐 其作为高危易感人群的感染诊断.HCVRNA检测 可作为活动性HCV感染的检测指标,并能在急性 感染后1,2周的血清中检测到(早于ALT异常和 HCV抗体出现数周).尽管还未得到FDA批准,逆 转录PCR法检测HCVRNA已经常应用于临床实 践中,其最敏感检测限为<i00HCVRNA拷贝/ ml.HCVRNA检测法还未化,其定量检测结 果在不同实验室间和不同方法间存在着显着差异 对接受抗丙肝治疗的病人来说,HCVRNA持续低 于1000拷贝/mL的最低检测限6个月预示着 9O,95的治愈可能性,而HCVRNA高于3.2 ×10拷贝/ml则可能预示着治疗失败,因此有必要 建立一个HCVRNA从<1000到>3.2×10拷 贝/mL的检测动态范围. 建议:丙型肝炎基回型检剥必须能区分所有 HCV6种基目型并能区分1a和lb(III;B和III;E) 讨论HCV共有6种主要基因型,在世界范围 内存在着大于90种变异的基因亚型.HCV具有高 度自由突变率.在美国的HCV感染有三分之一是 由基因型la和1b引起. (四)丁型肝炎病毒(HDV) HDV是一种需要HBV存在才能复制的缺陷 病毒.对HBsAg阳性,有急慢性肝炎症状的病人, 尤其是肝炎爆发流行及有高度HDV感染危险性的 上 情况下(如静脉注射吸毒)才应考虑HDV感染检 DV血清学检查是检测HDV 查.唯一广泛应用的H 总抗体.病毒廓清的病人,其抗体的消失需要1,5 年.对大部分临床病例来说,HBsAg,抗一HBe—IgM, HDV总抗体等3项检查足以用于诊断HDV感染. 目前尚无足够的有关HDV检测的资料来对其操作 特性作出建议 (五)戊型肝炎病毒(HEV) 建议:对HEV抗体的检测必须能测定出针对 ORF2抗原的抗体以保证足够的临床特异性(III;B 和Ill;E) 讨论:HEV是经肠道传染的病毒,多在发展中 国家引起流行或非流行急性肝炎.临床上多运用免 疫学检查诊断HEV抗体能在15,25男性同性恋 者或静脉注射吸毒者体内检测到,说明其缺乏特异性. HEV检测的方法问差异较大,因此推荐测定针对 ORF2抗原的抗体.以保证足够的临床特异性. (致谢:上海科华公司给予本文大力支持) 参考文献 [13RobertDufourD.LottJA,NoheFS,eta】.Diagnosis andmonitoringofhepaticinjuryI.Performancechar— acteristiesoflaboratorytests[J].ClinChem,2000, 6(12):2027—2049. '(收稿:2001—03—09) (本文编发:龚晓霖) (I-接第310页) 这可能与流式细胞术法,MACE法和SPRCA法检 测的都是IgG型抗体有关.MACE法和SPRCA法 具有相同的敏感性,而特异性则以MACE法为高, 这可能与SPRCA法的试验原理有关0]. MACE法的整个操作过程需时约4h,而 SPRCA法则不超过1.5h,从操作上比较,SPRCA 法具有简便,快速的优点.但是,SPRCA法由于是 通过肉眼观察指示红细胞粘附现象(实质为红细 胞凝集现象)而判断结果,因而该法的结果受人 为因素影响较大.另外,MACE法除了特异性比 SPRCA法高外,还能对血小板抗体的类型(HLA 或HPA抗体)进行区分.综合比较2种血小板抗 体检测方法,我们认为,SPRCA法适合于初筛试 验,而MACE法适用于确诊试验和血小板抗体类 型区分. 参考文献 [1]HelmbergW,FolschB,WagnerT,eta1.Detection anddifferentiationofp[atelet-specificantibodiesby flowcytometry:thebead—mediatedplateletassayEJ]. Transfusion,1997,37:502—506. E83MKohler,JDittmann.TJLegler,ela1Flowcyto- metricdetectionofplatelet—reactiveantihodiesandap- plicafioninptateletcrossmatching[J].Transfusion, l996,38|250-255. [3]傅启华,金蕾.严力行.固相红细胞粘附试验用于血小板 交叉试验[】]临床检验杂志,2000,18(2):165. [胡张之南.血液病诊断及疗效标准[M].第2版.北京:辩 学出版社,1998.279—285. (收稿:2001—06-22修回;2001—08—20) (本文编发:储怡星)