反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的含量法学论文

反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的含量法学 反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的含量法学论文 【摘要】 目的采用反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定竺黄复方片中甘草酸的含量。 采用kromasilC18柱（200mm×4.6mm,5μm），以甲醇-0.2mol?L-1乙酸铵-冰乙酸（65?35?1）为流动相，流速1ml?min-1，柱温30?，检测波长250nm。结果在0.402～2.010μg之间，峰面积与进样量的线性关系为A=673028.2878C-67302.7076（r=0.9998），平均回收率为99.66％。测得3批样品中甘草酸的含量（以甘草酸铵计）分别为1.034，1.103和1.008mg/片。结论所建方法简便、准确、重复性好，可用于竺黄复方片的质量控制。 【关键词】 竺黄复方片；甘草酸；反相高效液相色谱法 Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodtodetermineglycyrrhizicacidfromprescriptionofZhuhuangTab let.MethodsThecolumnwaskromasilC18(200mm×4.6mm,5μm),themobilephaseconsistedofMethanol～0.2mol?L-1Ammoniumacetate-Glacialacrticacid(65:35:1),withtheflowrateof1ml?min-1andtheUVdetectorwassetat250nm.ResultsThemethodshowedagoodrangeof0.402～2.010μg(r=0.9998).Theaveragerecoverywas99.66%.Theglycyrrhizicacidcontentsofthreebatchsampleswer e1.034,1.103，1.008mg,respectively.ConclusionThismethodissimple,accurate,repeatableandsuitableforthedetermi nationofglycyrrhizicacidinprescriptionofZhuhuangTablet. Keywords：PrescriptionofZhuhuangTablet； Glycyrrhizicacid; RP–HPLC 竺黄复方片由甘草、力嘎都、牛黄、红花、榜嘎（唐古特乌头）等九味药材组成，具有 利肺、消炎、止痛的功效，用于小儿流感引起的肺炎、上呼吸道感染等［1］。该方收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册，标准未收载鉴别项和含量测定项，不利 于生产和使用的相关部门控制其药品质量。本文拟建立甘草酸含量测定方法，增加含量测定 项，提高其质量标准。 1 材料 Waters2695/2690分离系统，2996（2487）检测器，Empower色谱管理系统，岛津UV-2100型紫外分光光度计，AtutoScienceAS5150超声波清洗仪，Sartorius公司BP211D电子天平。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 甘草酸的含量测定 2.1.1 色谱条件和系统适用性实验用kromasil色谱柱（200mm×4.6mm,5μm），流动相为甲醇-0.2mol?L-1乙酸铵-冰乙酸（65?35?1），流速1ml?min-1，柱温：30?，检测波长250nm［2］，按甘草酸铵峰计，色谱柱理论塔板数不低于2000，甘草酸铵峰与其它峰达到基线分离，峰形对称，色谱图见图1。 2.1.2 溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取甘草酸铵对照品适量，置10ml量瓶中，加甲醇-0.2mol?L-1乙酸铵-冰乙酸（65?35?1）溶解并稀释至刻度，摇匀,使成为每毫升中含对照品0.201mg的溶液即得。 样品溶液的制备：取竺黄复方片适量，研细，取1.5g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.2mol?L-1乙酸铵-冰乙酸（65?35?1）溶液45ml，称定重量，超声处理30min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶 液，用0.45μm滤膜滤过即得。 阴性样品溶液的制备：取缺甘草的阴性样品，照上述样品溶液制备方法处理即得阴性样 品溶液。 2.2 方法学考察 2.2.1 线性范围精密量取上述甘草酸铵对照品溶液2，4，6，8，10μl注入液相色谱仪，色谱图，测定其峰面积，并以峰面积A为纵坐标，进样量C（μg）为横坐标，进行回归，得回归方程：A=673028.2878C-67302.7076，甘草酸铵在0.402～2.010μg之间，进样量与峰面积线性关系良好（r=0.9998）。 2.2.2 精密度实验精密吸取对照品溶液10μl，连续进样5次，甘草酸铵峰面积的RSD为0.97％，表明仪器精密度良好。 2.2.3 重复性实验取竺黄复方片品（批号20040301）研细，取1.5g，5份，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.2mol?L-1乙酸铵-冰乙酸（65?35?1）溶液45ml，称定重量，超声处理30min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作 为供试品溶液。按上述色谱条件测定，记录色谱图，并计算含量，结果甘草酸含量（以甘草 酸铵计）平均含量为2.75mg?g-1,RSD为1.81％。上述实验表明，该方法的精密度较好。 2.2.4 稳定性实验取样品供试液（批号20040301）与甘草酸铵对照品分别于0，2，4，6，8h，分别进样10μl注入色谱仪，记录峰面积，平均峰面积为533271，RSD为1.97%,样品溶液8h内稳定。 2.2.5 加样回收率实验精密量取甘草酸铵对照品溶液（0.2010mg/ml）10ml，5份，分别置100ml具塞锥形瓶中，水浴上挥干甲醇，取已知含量的样品（批号20040301）约0.8g，5份，精密称定，置上述锥形瓶中，加入甲醇-0.2mol?L-1乙酸铵-冰乙酸（65?35?1）溶液45ml，称定重量，超声处理30min，放冷，称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀， 滤过，取上清液，用0.45μm过滤膜过滤，作为供试品溶液。按上述色谱条件，注入高效液 相色谱仪，记录色谱图，并计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率实验结果（略） 2.2.6 专属性考察精密吸取阴性样品溶液10μl，注入色谱仪，结果表明干草酸铵位置上 无干扰峰。 2.2.7 样品测定样品按2.1.2项下方法制备样品溶液后，再按上述重复性试验项下方法测 定含量。3批样品中甘草酸铵含量分别为1.034，1.103和1.008mg/片。 3 讨论 在甘草酸的含量测定中，提取溶媒比较了甲醇提取和流动相提取，结果表明用流动相提 取效果更佳。 本实验用RP–HPLC法测定竺黄复方片中甘草酸的含量，所建方法简便、准确、重复性 好，可用于竺黄复方片的质量控制。 【参考文献】 ［1］国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准?藏药，第一册［S］.1995:251. ［2］国家药典委员会．中国药典,?部［S］.北京：化学工业出版社，2005：59.