大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒说明书大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒说明书
大鼠乳酸脱氢酶(LDH)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称:
通用名:大鼠乳酸脱氢酶(LDH)酶联免疫分析试剂盒
使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、或相关组织液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。 实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中大鼠乳酸脱氢酶(LDH)水平。用纯化的大鼠乳酸脱氢酶(LDH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的乳酸脱氢酶(LDH)标准品和未...
大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒说明书
大鼠乳酸脱氢酶(LDH)酶联免疫
(ELISA)
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称:
通用名:大鼠乳酸脱氢酶(LDH)酶联免疫分析试剂盒
使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、或相关组织液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。 实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中大鼠乳酸脱氢酶(LDH)水平。用纯化的大鼠乳酸脱氢酶(LDH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的乳酸脱氢酶(LDH)
品和未知浓度的乳酸脱氢酶(LDH)待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乳酸脱氢酶(LDH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠乳酸脱氢酶(LDH)浓度。
试剂盒组成
20倍浓缩洗涤液 50ml×1瓶 标准品S1(6 IU/L) 0.5ml×1瓶 1
链霉亲和素-HRP 6ml×1瓶 标准品S2(4 IU/L) 0.5ml×1瓶 2
酶标包被板 12孔×8条 9 标准品S3(2 IU/L) 0.5ml×1瓶 3
生物素标记的抗-IgG抗体 6ml×1瓶 标准品S4(1IU/L) 0.5ml×1瓶 4
显色剂A液 6ml×1瓶 标准品S5(0.5 IU/L) 0.5ml×1瓶 5
显色剂B液 6ml×1/瓶 密封袋 1个 6 10
终止液 6ml×1瓶 封板膜 3张 7 11
样品稀释液 6ml×1瓶 说明书 1份 8 12
标本要求
1(不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2(标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20?保存,但应避免反复冻融
操作步骤
1. 根据待测样品数量加上标准品的数量
所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做
复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品
孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl,在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样
品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37?温育45
分钟。
3. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
1
4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复4次,拍干。
5. 加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37?温育30分
钟
6. 洗涤:操作同4。
7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37?温育30
分钟。
8. 洗涤:操作同4。
9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37?避光显色
15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
(试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未1
用完,板条应装入密封袋中保存。
2(浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3(各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4( 如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先将样本稀
释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。 5( 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6(本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。
7(严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8(所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
检测范围:0.312 mU/ml-20 mU/ml
灵敏度:0.078 mU/ml
规格:
96人份/盒
保存条件及有效期
1(试剂盒保存:;2-8?。
2(有效期:6个月
2
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