组织病理切片的制作过程

组织病理切片的制作过程 组组病理切片的制作组程 1,取材组组取材的是制作切片的一重要程序～根据、科及外组的具要求取自人;外科手组切除组个教学研体体 本、活组组本、尸组组本,或组物～定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖、组组、病理的基本理组知组～组要掌握并确学学学 组组操作技组～每组组器官的取材都有一定的部位和方法～不能任意切取组组作组制片材料～不然～无法到、科和个达教学研 组床组的目的～具要求如下,断体 (1)材料新组,取材组组愈新组愈好～人组组一般在后～组物组组在组死后迅速固定～以保组原有的形组组组。体离体学构 (2)组组组的大小,所取组组组组理想的组组体2.0cm×2.0cm×0.3cm～以使固定液能迅速而均地渗入组组部～但根据制匀内 片材料和目的不同～组组组的组理想组也不同～如制作病理外组、科切片～其组组组可以薄取体研0.1,0.2cm可～组组可以组即 短固定水透明的组组～若制作切片厚取脱教学0.3 ,0.5cm～组组可以同一组制作出组多的切片。蜡教学 (3)勿组组组组组: 切取组组组用的刀剪要组利～切割组不可回组组。组取组组组切勿组组～以免因组组而使组组、组胞组形。来 (4)组范取材部位: 要准地按解剖部位取材～病理组本取材按照各病组部位、性组的不同～根据要求组范化取材。确 (5)组好组组组的切面:根据各器官的组组组～定其切面的走向。组切或切往往是组示组组形组组的组组～如组管器官以构决横构状 横切组好。 (6)保持材料的组清:组组组上如有血液、组物、粘液、食物、组便等～可用水洗干组后再放入固定液中。冲 (7)保持组组的原有形组:新组组组固定后～或多或少组生收组组象～有组甚至完全组形。组此可组组展平～以可能组持原会将尽 形。 2,固定 (1)小组组组固定法,组是最常用的方法～人或组物取下的小组组组～组立置入液组固定组中组行固定～通常～组本从体体即 与固定液的比例组1:4,20～但组组组不宜组大组厚～否组固定液不能迅速渗透。故取组组组的大小一般组 2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法,某些组组组由于组组大或固定液组渗入部～或需要组整组器或整组物组行固定。组组宜采体极内个个体 用注射固定或灌注固定法。固定液注入血管～组血管分支到整组组和全身～而得到充分的固定。将达个从 (3)蒸汽固定法,比组小而厚的组本～可采用组酸或甲组蒸汽固定法。如血液片～组组在血片未干燥前采用组酸或甲组涂蒸汽接固定。触 最常用的固定液有10%甲组固定液和95%乙醇固定液。 3,水透明脱组本组组固定和洗后～组组中含有组多的水分～必组组组组的水分置组出～组一组程叫做组水。无组是用冲将内来脱 石切片～组是用火棉切片～都必组除去组组中所含水分～因含水组组石、火棉等包埋材料不相容～常用的水组组蜡胶与蜡胶脱 一系列不同组度的乙醇。 脱水的步组是,80%、90%、95%、100%各组组度乙醇2小组～此组程可用水机自控完成。脱 1 丙组也是一组水能力强的水组～但因其水能力强～组组组有组烈收组作用～在制作科、切片组一般不用组脱很脱脱很研教学 组组。因乙醇、丙组等不溶于石～组要组组一能溶于石的溶组替代组程组透明。常用的透明组有二甲、三组甲组、水组酸甲组蜡个蜡称苯 等。 4,浸、包埋蜡 (1)使石浸入组组中～取代组组中含有的透明组。蜡 (2)包埋,浸后的组组置于融化的固石中～石凝固后～组组被包在其中～组～此组程组包埋。将蜡体蜡蜡即称蜡称 5,切片和组片 (1)修整组,可组其组组的大小～在组组组组组蜡0.1,0.2cm组～切去余部分～否组易造成组组组组不平。蜡 (2)准组好切片用具,切片刀、毛、眼科组子;,、漂烘控组笔弯温 (3)安组,修好的组安在金或装蜡将蜡装属蜡木制持器上。 (4)安切片刀,切片刀安在切片机的刀装将装台上～把刀台上的组固螺组旋组～使切片组不组生振组～能保持一定的切片厚度。 (5)切片的厚度,切片机的厚度组组器上刻有0,50μm或0,25μm～可任意组组其厚度～石切片的厚度一般在蜡4,6μm。 (6)切片 (7)组片,用眼科组子组起蜡组组组平组在40,45?的水面上～借水的组力和水的度～温将蜡略组的组自然展平。 (8)组片、烘片,待切片在恒温将蜡玻玻水面上充分展平后～片组到组片的中段组组去组片上的余水～置入60,65?恒温内温内烤箱或切片漂烘控组的烘箱片15,30分组～去溶化组组组脱蜡隙的石。 6,染色和封片常用的染色方法是组木素-伊组;Hematoxylin-Eosin,染色法～组称H.E染色法。组组方法组任何固定液固定的组组和组用各组包埋法的切片均可使用。组木素是一组性碱染料,可使组组中的嗜碱性物组染成组色～如组胞核中的染色组等～伊组是一组酸性染料～可使组组中的嗜酸性物组染成组色～如多组胞的胞组、数核仁等在H.E染色的切片中均呈组色。 H.E染色程序如下:、、组水、脱蜡脱苯脱染色、水、透明、封固 常组组木素染色中的组比染色是用伊组,近年来国在英、美家的一些组组室组采用焰组;phloxine,,此外也有用桔黄G;OrangeG,、比布里希猩组(Biebrich scarlet)、波组多组(Bordeaux red)等作组组比染色。伊组组染胞组、原组组、胶肌组组、嗜酸性组粒等常用的染料。 1 . 取材 　　取材的好～坏响医来直接影切片的组量。生在取材组～首先要有一把组利的取材刀～在切割组组组要避免取材刀回拖拉～切取的组组组厚薄要均～一般厚度以匀0.2 ,0.3cm组 适～组容易组脆的组组如甲状当腺、肝组、血组、淋巴组、大组癌组组等可适厚一点～而脂肪组组、肺组组、组组性组瘤、平滑肌瘤等致密的或组组不易渗入的组组组取薄一些～ 淋巴组组修掉两并尽内碰组球冠～量剔除周组的脂肪组组。在取材中组组十分注意组组是否有组组或骨组组～如到不可避免的组化组组～ 2 组技组与室组明～在切取组组组组、肌肉 组组、胃组道组～组注意组组及肌肉的走向～取材组可能按组组平行走向切取组尽与佳。 　　2 . 固定 　　固定是技组室工作的第一步～也是在整制片组程中无法组个离体救的一步。所组“固定”～就是组组后～用各组组法使其组胞的物组内尽状构量接近其生活组组的形组组和位 置的组程。固定的目的是组了防止组组组胞自溶与内内腐组～防止了组胞的组组蛋白组的分解作用～使组胞的各和成分如蛋白组、脂肪、水化碳合物或组组组组组不溶性物组～以 保持原有的组生活组相。外～组组固定后～均构与仿另状呈一定的硬化组～增加组组组性～而且不易组形～有利于以后的组组组理。所以组组一旦离体必需及组固定～固定液的量 组组组组的5倍。固定的组组主要固定的及组性、固定液的组组、固定液的组度、固定的度和组组有组。最常用的固定液组与温10,福组组林。者组组～笔10,福组组林由于受到福 组组林的组量、使用组的组组和取材组组入的水分影响～组度被降低致组组固定不足～而高组度的福组组林～降低了组组组的穿透性～形成周组固定好而中央固定不到的组象。通 组组～本人组组以酸性践12,15,的福组组林最佳。大组本;2cm厚,一般需要6,12小组～小组本一般需要个3,6小组个～当温室低18?组～可在37?以下的温内温箱加4,6小 个 组。由于HE染色最佳着色PH组3.5,4.5, 中性福组组林组组木素染色有一定影响,组胞核容易组灰,核染色组不佳。所以, 管中性尽很数来很没福组组林组抗原有好的保存作用～但酸性福组组林组组大多抗原组也有好的保存作用～所以在有特组组理的情况下常组HE用12,15,酸性福组组林也可 以;每100毫升12,15,福组组林液内加5毫升醋冰酸,。骨髓、组组组组固定以Bouin液组佳～组Bouin液固定后的组组必组流水洗冲4小组以上。有条件的组位可根据不同要求组用 二组或二组以上的固定液～少组位组可数建立组组冷组组～以便适组各组特殊的组理要求。 　　3. 水洗 　　固定后水洗;10,20分组,～通常被多人所很脱学忽组～而水洗不组底～容易造成片和染色不组组。组需做免疫组组化的组组～更不组当内忽组。福组组林不利于组组组抗原 的保存 　　4 . 水和透明脱 　　所组水脱脱将内就是利用水组组组的水分置组出～以利于有机溶组的渗入～组一组程组水。组水是否组来称脱脱底～直接组系到组组是否能充分透明～而水组度;原因是组组 脱 在组酒精内温温组组组久～组生组组组地组生组化,容易造成组组组脆。造成组组组脆的原因组有加;度超组35?,、水组脱内加有丙组、 3 浸用的石中二甲组多等等。一般 蜡蜡苯 我组组组组组组组脆高跟与组度酒精有组～而忽组了低组度的酒精组系～其组低组度的酒精具有强大的穿透力～比组酒精更容易渗透到组组组部使内脱之水～组组如果在低组度酒 精里充分水～在脱脱从份高组度酒精里只需去低组度到高组度之组的水～因此～组需短组组就可完成～如果组组不组短组酒精的组组～便会脱温引起组组组脆～如果水组加～使用 丙组～组可引起组组收组～并响学蜡内既与脱与蜡影免疫组组化的组组。组了使石浸入到组组组～必组组组一组能水组混合～又能石相溶的媒介物组～组组程透明。目前最好 个称 的透明组是二甲。多人组组二甲容易使组组组苯很苯极个很温脆～组组点片面～在常下～如果不是组组组组;超组,4小组以上,二甲不苯并会份会引起组组组组脆～相反使某些组 组组比组组组的组组,比如子组构当当苯温肌瘤等相好切,～但是二甲度超组35?以后～易极引起组组组脆。所以本人组组～大小组本最好分组水～一般脱况脱情下～大组本水组 组;室温18?,以80,酒精2小组、95,酒精;2道,各1个半小组至2小组、组酒精;3道,各1个半小组至2小组～二甲苯;2道,各30-60分组组宜～小组本水组组组相组组短。 脱脱 水组组组短～与温践温室高低有密切的相组。我组在组中组组～室在12,15?组～可作组一组个温当温温界度范组。室高于此度范组组～组组容易水～可脱当脱适组短水组组～而 室低温温当脱个温于组度范组组～组适延组水组组;如能保组在一恒定的度下最佳,。更组组组～组以量组基组～定量更组～不能等到切片不好组再去更组。否组～至少有会2,3 批组组切片不好。根据我科组组～如组组用量组500ml～每500组个蜡更组一次组宜。 　　5. 浸蜡 　　组组透明后～在熔化的石浸组的组程组浸。用其蜡内称蜡胶胶内称他浸透组;如火棉、明等,渗入组组部的组程可组浸透或透入。浸度组蜡温高;超组60?,～在蜡内加入二 甲或由于透明组组组的二甲组多～都组苯蜡苯会会内坏蜡蜡致组组组硬～组使组组的抗原受到破～所以作者主组浸用的石熔点在56?;三道,～第一道,石蜡30分组～第二道,石 蜡90分组～第三道,石～蜡90分组。浸度控制在蜡温56,58?左右。;第一道也可用硬脂酸石蜡1,3混合浸～不组蜡可组化组组～特组适用于比组组、硬的组组～而且由于硬脂酸 是弱酸性的～组组胞核有媒染作用～核组比组明～但容易片脱条～同组组疏松组组容易散片,。有件的可以每天打组第一道石蜡苯蜡蜡的盖子～组二甲组组。浸所用的石如有组组 尽划可能组组～以防附在组组上～造成切片刀刀口受组～或切片破碎和痕增多。 　　6. 包埋 4 　　用包埋组支持组组的组程包埋。最常用的是石包埋法。包埋的组组一是平整～二是方位。要求在包埋组～组采用组子组来称蜡 组组组组拱起部～使份之平组于底部～通常采用 组组的最大面包埋。囊壁、管腔组组组组直包埋。小组多组组组～组尽并个两蜡两量放在一起～保组在一平面上。修去组的余;所组的组～指切片组切片刀与两垂直的组,。包埋 组组组注意有无组组～组絮～如有一定要去除。胃膜黏活组组本～不能按一般的组律取最大包埋面～组采取窄面组起包埋。包埋的蜡蜡更组组组～留有组组的石～容易造成组染或 刀口受组。的蜡熔点组在56,58?之组组组～不提倡在冬天使用组。因组用组包埋的组～到蜡蜡蜡会了夏天～粘在一起～不利于组料的保存～而且即蜡蜡使在冬天～用硬包埋的组 也比用组包埋的组要好切。蜡蜡 　　7. 磨刀 　　要想切好一组切片～首先要有一把组利的切片刀。磨刀是从坏事切片技组人组的一组最基本技组～刀磨的好～直接组系到切片的组量。磨刀的手法各人不同～但都要求用力均 匀触两～使刀口和磨刀石全面接～手的用力点组在刀口上～而不是在刀背上。切片刀组用一次磨一次～每次组需10,15分组～组组组组的磨刀～容易把已组磨出的组刃磨掉～组组 切片刀是否组利～用手组摸刀口的方法不并学真十分科～不组不能组明切片刀是否正组利～而且容易组害刀口～最组组的组法是每次磨好后拿一组组切一下。每个蜡次磨好刀后～ 组将会很磨刀石用盖子盖好～以防灰组掉在磨刀石上～用有灰的磨刀石磨刀～使切片刀组生组多组小的缺口。组在多组位都组了磨刀机～磨刀机用组刀组和来确磨缺口的不组～但 由于磨刀的角度和组组不易精确并真很来很掌握～故效果不理想。根据我组的组组～正的组刃组用机器磨出。一次性刀片在大程度上解决个了组组组。如用一次性刀片～必组及组 更组刀口。一刀个口切小组本不组超组20,25只蜡组～切大组本不组超组10,15只蜡组。 　　8. 切片 　　切片的第一步必需粗切。粗切的厚度大组在,0,100微米左右～组地组硬的组组或组小的组组组再薄一些～粗切致组组全部暴露后～才组行组切。组切至组组组面均一匀致 ～无白点后～再把切的片放入水中。切片组要求用力均、蜡温匀会柔和～组速不易组快或组慢。组快组致切片厚薄不均～机器磨组～组慢会使切片增厚。切片厚度一般组3,5微米 。切片的要求是完整、薄、均。切下的片匀状与膜其大小形组组组组一会将致～切片的不完整～常重要病组组漏～组致组组、漏组。在切片放组组～组注意组组包埋的方向～组 蜡 组的组次～组组、肌肉等的走向组切片刀平行～组组切的部分组放在上面～如与皮组的表皮～组组的包膜～胃组道的组膜等～组组可 5 以少组组的减断裂组象。操作切片机组组用力 均～匀脱减避免用力组重。组组组组、骨髓～以及已知的组化组组～组组用固定的刀口～以少其他部位出组缺口的可能性。在使用毛展片组要笔笔防止组组入刀口～因组每切到一 根组～笔会个就增加一缺口。切片厚度一般组4,6微米～有人组组,只要切片机刻度组着微米几个来几～切出的片子就是个当匀微米。其组不然～切片刀不组利～或切片组速度不 ～或切的组慢组～切的片子都组厚～会匀况真碰只有在切片刀十分组利、切片速的情下～才能正保组其厚度。下面是切片组到的组组的原因及可能组理的方法,(1)组组组脆,一般 是水、透明、浸组组组组、度组脱蜡温并与蜡气会高～组组本身组地也有组～在切片组～组切组用嘴向片吹～可能好些。(2)切片卷起～可能是刀不组利～或刀组在一面～或刀另角 度组大～切片太厚等等。(3)片蜡弯与蜡曲,可能是刀组不均～切片刀未磨直～切片刀组不平行。(4) 透明、浸组组组组、蜡温度组高～组组本身组地也有组并与(5)厚薄不均,可 能是刀、刀座及组未组组～组组蜡太硬～或切片机主组太向前～或切片机已磨组。(6)切片出组裂痕,可能是刀有缺口～石蜡内有组组～组组有组化、内骨片或有组组, 也可能有 会 棉组组组等。(7)切片不组片～切不下片～切片厚～或者切片后组组很蜡内脱将蜡白～陷,组组水不佳。组救组法,可先组溶解～取出组组～放入加组水浴的丙组;内80?,～30, 60分组～再组行透明浸包埋切片～也组好一蜡会点。 　　9. 展片组片与 　　展片水组在温42?至47?之组～组主要和包埋的蜡熔点有组,水组温会温高～引起组组组胞散组～水组低～切片组摺无法组平。包埋中如有二甲～也造成石溶解组象。 蜡苯会蜡 而用一次性刀片切的片子～一到组水～片子上的组碰个决摺就无法再展组～组有二方法可以解,第一、可以在切片组组切组向片蜡气会吹～组组的片子就非常平整～放到组水里就 会会自然展组～比组方便快捷～但组组的片子略微厚一点～第二、在切完片子后～先把切片放在30%酒精水溶液中～组酒精的组力自组把组摺展组～然后再切片将移到组水～组组的 片子组薄会;如酒精组度组高～容易引起切片破碎～出组裂隙～像脂肪之组组胞组粘附性组小的组组一到碰会酒精就散组～故不能用此法。最后组片组片要干组～要组组玻那些完整 、无组摺的切片～粘组于片中玻1/3和下1/3的中组。 　　10. 片和烤脱蜡 　　烤片～一般在60?的温内烤箱片0.5,1小组左右～度组温会高～引起切片组胞收组～组组太短(少于20分组)～容易造成片。也相重要～如脱脱蜡当脱蜡果不干组～切片不易着 6 色或着色不～所以～用的二甲要组常匀脱蜡苯更组～一般用3道二甲～每苯500ml液～组理体500组切片后更组一次组宜。当温室低于18?组～必组切片将从温即箱拿出后立放入二甲 苯脱蜡将苯温内中～或二甲放入箱组组;37?左右,～最脱蜡高不得超组60?。然后组高组度的酒精到低组度的酒精洗去二甲～至水。苯 　　11. 染色 　　组木素染色组组要根据染料的新、度、切片的组旧温型而定～一般组5,15分组。组水略洗后～用组酸酒精分化～分化程度必组用组微组控制。分化水洗后～可用水或自水 温来 组化～充分水洗;并冲流水洗5分组以上,～以防组酸残碱氨皂留组致切片褪色。我组不提倡使用性溶液;组水、肥水等,促组～管组化尽很从践效果好～但组的组来碱果看～用组性 溶液促组的切片不能组期保存～容易褪色。最后入伊组组染;5,20秒,。HE染色的组组在于深适浅度～组比组明～一般有组组的～肉眼就能判断会～但偶而也出组失组～所以用组 微组控制是最保组的方法。其组组的步组在于组木素染好后的分化及组化组程～在组化组束后～组在组微组下组察组胞核着色是否合适～核组是否～胞组是否有构清晰内残留的组 木素等等。染色理想的切片在组微组下组是,组胞核与清晰组胞组组组组相映～组组美组～核组组比明组～核膜及核染色组组粒可组。 　　12. 水和脱封片 　　切片水组脱从低组度的酒精到高组度的酒精～80%酒精1道～95%酒精2道～组酒精2道～;正丁醇1道,～二甲苯2道。组度低的酒精比组度高的酒精更容易水～但也容易使脱伊组 退色～故水组组可短一脱点～每道3,5分组～组酒精每道10分组。组增加酒精与苯苯二甲的相融性～可在二甲前面增加一道正丁醇～石酸碳苯碳,二甲液也有此效～但用石酸组如 不洗组～可引起切片退色～不利于切片久存～故不作推荐苯胶。切片组二甲透明后～用中性组封固。组增加切片的透明度～防止组胞收组、组裂或切片出组黑色组晶组小点。所以 我组组定切片必组湿温烤霉气体封～不得用箱干或组吹组吹干后干燥封片。在南方冬春、雨季组～封片组要防止口鼻呼出的接到切片触气湿将～在天组潮的日子里～不宜一次多组 切片取出待封～以免切片“组潮”～形成透明不佳,出组云组水状脱珠。水组的更组也组有一定的组组组定。一般是每500ml液体～组理500组切片后更组一次组宜。封片组不能组 胶 稀～封片组组要均充组胶匀玻胶将气玻盖片且组不及外溢组佳。要组组全部覆盖～也不能有泡。最后～粘组组组～组组必组组于片左组～组组组组号写清楚～最好能打印。 7