【doc】养血延寿方对D—半乳糖性早衰小鼠模型清除自由基的影响

【doc】养血延寿方对D—半乳糖性早衰小鼠模型清除自由基的影响 养血延寿方对D—半乳糖性早衰小鼠模型 清除自由基的影响 38(总第678页) 中国中医基础医学杂志 ChineseJournalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine 2002年第8卷第9期 2002.Vo1.8.No.9 【实验研究】 养血延寿方对D.半乳糖性早衰小鼠模型 清除自由基的影响 侯建平,杨军英,杨鸿,李石蓝 (陕西中医学院药理教研室,陕西成阳712083) 关键词:养血延寿方;D.半乳糖性早衰小鼠模型;自由基 中图分类号:R285.5文献标识码:B文章编号:1006-3250(2002)09—0038-01 在以补益药组方做抗衰老的实验中,大多数应 用补气,补阳药,我们以补血药为主,组成抗衰老方 剂,观察其对动物各项衰老指标的影响,以做比较. 现就养血延寿方对D.半乳糖所致早衰模型小鼠消 除自由基的影响报道于下. 材料 动物:昆明种小鼠,体重18g,22g,雌雄各半,由 西安医科大学实验动物中心提供. 药品与试剂:养血延寿方由本实验室自制,浓度 为1nll,置冰箱备用.原药材购自成阳市药材公 司,属药典药用品种.人参蜂王浆:北京东风制药 厂,批号951128;D.半乳糖:上海试剂二厂,批号 941216;硫代巴比妥酸:上海试剂二厂,批号920313; 四乙氧基丙烷:南京建成生物制品研究所,批号 940926;重硫酸奎宁:北京试剂厂,批号930106;邻苯 三酚:温州瓯海化工试剂厂,批号930428;三羟甲基 氨基甲烷:成都化学试剂厂,批号920206;氯仿,甲 醇,盐酸等产地批号从略. 仪器:721型分光光度计,930型荧光分光光度 计,离心机,紫外灯,电水浴箱,匀浆器等均为国产 品,其余略. 方法与结果 1养血延寿方对D.半乳糖所致早衰模型小鼠 红细胞超氧化物歧化酶活性的影响 取18g,22g健康小鼠60只,随机分为正常组, 模型对照组,阳性药物组(人参蜂王浆)及养血延寿 方大,中,小3个剂量组,共6组,除正常组外其余各 组每鼠皮下注射D.半乳糖50mg/kg?d,共8周.同 时除正常组与模型对照组外,按组分别给予人参蜂 王浆,养血延寿方(剂量见表1).于末次给药后1h 摘除眼球取血50移入盛有生理盐水的刻度离心 管中,混匀,以33.3S转速,离心3min,弃去上清 液.加入预冷蒸馏水0.2ml,混匀,再加冷95%乙醇 0.1ml,振摇片刻,加冷氯仿0.1ml,振摇1min后,以 66.67S转速,离心3min,取上层提取液,用721型 分光光度计于420rim处测取光密度,计算SOD活 性.实验结果均以(?s)表示,采用t检验进行处 理(下同,结果见表1). 2养血延寿方对D.半乳糖所致早衰模型小鼠 血清LPO含量的影响 小鼠分组与给予养血延寿药及使用早衰药物方 法同上,采取硫代巴比妥酸(TBA)法测量血清LPO 含量…(结果见表1). 表1养血延寿方对D.半乳糖性早衰小鼠模型红细胞 SOD活力和LPO含量的影响(n=10) 注:绐药组与模型组比较:…P<0.OOl,P<0.叭,P< O.05;正常组与模型组比较:P<O.OOl,P<0.Ol,P<O.O5 (下同) 3养血延寿方对D.半乳糖引致早衰模型小鼠 肝脏与脑组织中脂褐素生成的影响 取小鼠分组,给养血延寿药与引致早衰药物方 法同上,参照文献方法ll,于末次给药后脱颈处死, 迅速取出脑与肝脏,以滤纸吸干水分,清密称取 0.2g,用氯仿:甲醇(2:1)混合液4ml,制备匀浆,加等 (下转第41页) 2OO2年第8卷第9期 2O02.Vo1.8.No.9 中国中医基础医学杂志 ChineseJournalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine41(总第681页) 选用对脂褐质类物质具有特异染色能力的PAS染 色,尼罗兰染色和铁氰化钾染色等对其进行性质鉴 定.结果显示,上述3种染色都能使这种物质被特 异性着色,呈强阳性反应.因而,可以推定该物质系 属脂褐质类物质.关于该物质的来源,目前还难断 定.但我们认为,该物质不太可能是由肠壁本身产 生,它可能来自机体的其他部位.其转移至小肠的 途径可能有两种:其一,巨噬细胞在其他组织之内吞 噬脂褐质类颗粒之后,进入血液循环,经血液循环到 达小肠,于小肠绒毛的顶端穿越血管壁进入绒毛结 缔组织;其二,该物质由其他部位的组织代谢产生, 产生这类物质的组织和细胞可将其释放入血液循 环,该物质循血流入小肠壁,绒毛顶端的毛细血管内 皮将其转移出血管,并进入到绒毛顶端的结缔组织 内,再由局部的巨噬细胞吞噬. 关于小肠排泄功能的研究至今尚未见有这方面 的报道.但中医学向有肠道具有疏泄(排泄体内 毒素或垃圾)功能的理论.但其位置可能并不仅限 于西医所认为的大肠,还应包括小肠.《黄帝内经素 问卷第三五脏别论》即有"夫胃,大肠,小肠,三焦,膀 胱,此五者,天气之所生也,其气象天,故泄而不藏, 此受五脏浊气,名日转化之府,此不能久留输泄者 也"的论述.即认为小肠,大肠等可受纳五脏(或体 内)的浊气(代谢废物)而进行排泄.虽然古代中医 未能运用实验的手段,来观察肠道是否具有对体内 代谢物质进行排泄的功能,但中医关于"脏宜补,腑 宜通","六腑皆以宣通为用"的医学观点,已经向我 们昭示了古代中医对包括大肠,小肠在内的六腑器 官机能的深刻认识],既通过对肠道的疏泄,以达 到对全身进行净化的目的.据此我们推测,豚鼠小 肠的这些形态学表现,可能就是其对机体内大分子 颗粒性代谢废弃物质进行排泄的表现.当然,进一 步的确定有待电镜观察证实. [参考文献] [1]肖长义,瞿佐发,王雅琴.大鼠小肠对颗粒性物质排泄 的实验研究[J].中国中医基础医学杂志,2000,6(6): 383. [2]蕲士信.解剖学进展续集[M].北京:人民出版社, 1981.1-33. [3]杨希山.国人回肠黏膜的组织学研究[J].解剖学杂 志,1987,12(1):21. [4jJohnsonLReds.PhysiologyoftheGastrointeinalTract[M]. Vo1.2.NewYork:RavenPress,1981,925.982. [5]成令忠.组织学[M].北京:人民卫生出版社,1993. 1082.1143. [6]黄自立.中医百家医论荟萃[M].重庆:重庆出版社, 1988.272.278. [7]王琦.中医藏象学[M].北京:人民卫生出版社.1997. 845.862. 收稿日期:2002.03.26修回日期:2002.07.15 作者简介:王雅琴,女,湖北宜昌市人,实验师, 从事抗衰老研究. 肖长义,男,湖南人,副教授,从事抗衰老研究. (上接第38页) 表2养血延寿方对半乳糖性早衰小鼠模型的 肝,脑组织中脂褐素生成的影响(H=10) 波长450nm测定检品荧光强度,并以新配制的 0.1/~g/ml重硫酸奎宁溶液的荧光强度为10单 位,计算每克肝,脑组织中脂褐素的单位含量(结果 见表2). 小结 本实验结果证明,养血延寿方对D.半乳糖性早 衰模型小鼠有抗自由基的作用,能降低LPO和脂褐 素的生成,并能提高SOD的活性,具有延缓衰老的 作用,似比人参蜂王浆为优. [参考文献] [1]陈奇,中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版 社,1994.940.943, 量蒸馏水,剧烈振荡3min,以50S..离心l0n,取氯 仿层于另一试管中,加氯仿至5ml,于紫外灯下照射收稿日期:2002-05-18修回日 期:2002.06.03 30see.用荧光分光光度计,以激发波长360m,发射