论述悬浮细胞、半贴壁细胞和贴壁细胞的传代方法。[精品]

论述悬浮细胞、半贴壁细胞和贴壁细胞的传代。[精品] 6叙述悬浮细胞、半贴壁细胞和贴壁细胞的传代方法。答:(一)悬浮生长细胞的传代:有以下两种方法: 1、直接传代法:?悬浮细胞自然沉淀瓶底;?用吸管吸去上清1/2,2/3;?轻轻吹打成细胞悬液;?等分装入数个培养瓶(皿) 2、离心传代法:?将细胞悬液转移到离心管内;?800,1000r/min离心5min，弃上清;?加新的培养液到离心管内;?吸管吹打成为细胞悬液;?分瓶(皿)培养。 (二)半贴壁细胞和贴壁细胞的传代:采用消化法。消化液是:0.25%胰蛋白酶、0.02%EDTA、二者混合液、最好在37?或室温(25?以上)环境进行。其操作步骤(以25ml培养瓶为例): (1)弃去旧培养液;(2)漂洗:加入2mll 无Ca2+、Mg2+的PBS，漂洗1次后倒掉;(3)消化:加入消化液，使之铺满细胞面(待肉眼可观察到“薄膜”现象时，倒掉消化液，残液继续作用2~3min，轻轻摇动，细胞层可随残液呈片状脱落下来，显微镜下发现细胞回缩变圆，细胞间隙增大，此时立即终止消化);(4)吹打:加入完全培养基5mll，用吸管按顺序进行反复吹打瓶壁，吹打时不要用力过大。(5)调整至合适细胞浓度，分瓶培养。