HPLC法测定骨碎补酊中柚皮苷含量

HPLC法测定骨碎补酊中柚皮苷含量 西北药学杂志2006年4月第21卷第2期63 droxy—L,tryptophansuppressesfoodintakeinfood—de. pfivedandstressedrats[J].Pharmacology,Biochemistry andBechavior,2004.77(1):137一一143. 【9]P.A.Sargent,D.J.Quested,P.J.Coweneta1.Clomipra. mineenhancesthecortisolresponseto5——HTP:implica— tionsforthetherapeuticroleof5一HT2receptorsfJ]. chopharmacology,1998,140:120—122. (10]许海琴,许列琴,许洪苇.常用天然提取物质量标准参 考手册[M].北京:化学丁业出版社,2003.285—286. 05—09) (收稿日期;2005— HPLC法测定骨碎补酊中柚皮苷 含量 张红旭,郭辉(江苏省徐州市第三人民医院,江苏徐州 221005) 摘要:目的建立骨碎补酊的质量标准.方法采 用HPLC法测定柚皮苷含量.结果柚皮苷在9.76 — 146.4ng范围内呈良好线性关系,平均加样回收率 为98.9%,RSD为1.5%.结论本法可用于骨碎补 酊的质量控制. 关键词:骨碎补酊;柚皮苷;质量标准 中图分类号:R927.2文献标识码:A 文章编号:1004-2407(2006)02-0063-02 骨碎补酊是我院皮肤科的协定处方,是由水龙骨 科植物槲蕨Drynariafortunei(kunze)J.sm.的干燥根 茎…经科学提取加工而制成的酊剂,经多年临床验 证,外用治疗白癜风,斑秃,疗效确切.制剂的活性成 分是以柚皮苷为主的二氢黄酮类化合物.为有效控 制骨碎补酊质量,笔者研究了其柚皮苷的含量测定方 法. 1仪器与试药 1.1仪器uV一2401紫外分光光度仪(日本岛津 公司);LC一6A高效液相色谱仪(日本岛津公司);中 北色谱工作站(大连化物所);SPD一6AV可见一紫外 检测器(日本岛津公司). 1.2试药柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定 所,批号110721—200308);骨碎补酊(本院制剂室自 制);甲醇,醋酸为色谱纯(天津四友生物医学技术有 限公司). 2方法与结果 2.1对照品溶液的制备精密称取在lIO~C干燥至 加甲 恒重的柚皮苷对照品20mg,置100mL量瓶中,醇至刻度,摇匀,精密吸取3mL,置10mL量瓶中,以 甲醇定容至刻度,摇匀,即得(每lmL中含柚皮苷60 g). 2.2标准曲线和线性范围考察精密吸取对照品溶 液0.2,0.5,1.0,2.0和3.0mL置10mL量瓶中,加 甲醇定容至刻度,摇匀,再分别精密吸取2mL置l0 mL量瓶中以甲醇定容至刻度,摇匀,待测定.分别精 密吸取定容液50L注入液相色谱仪(以十八烷基 硅烷键合硅胶为填充剂,甲醇一醋酸一水35:4:65 为流动相),分别得到峰面积为l1.58,29.4l,60.02, ll4.98和176.14.所得数据经统计学处理,得回归 方程:l,=1.19450512X+0.2939272.r=0.9999 (n=5).结果明,枘皮苷在9.76—146.4ng范围 内呈良好线性关系. 2.3精密度考察精密吸取对照品溶液lmL共5 份,照"样品测定"项下方法,自"置于10mL量瓶中" 起,同法测定,测得5份对照品溶液柚皮苷含量的 RSD=1.72%(=5). 2.4稳定性考察同一样品溶液在24h内不同时 问照"样品测定"项下方法操作,测定5次,其柚皮苷 含量的RSD=1.64%(n=5),表明在24h内具有良 好的稳定性(样品批号041011). 2.5重复性考察精密吸取同一批号样品5份(批 号031101),分别照"样品测定"项下方法操作,测定, 其含量的RSD:l.7%(n=5). 2.6加样回收率考察精密吸取供试液(批号 041103,现已知含量)10mL共5份,每份精密加入柚 皮苷对照液500trL,按"样品测定"项下方法操作,测 定,结果平均加样回收率为98.9%,RSD=1.5%(n = 5). 2.7样品测定取本品l0mL,置水浴上蒸干,残渣 以甲醇溶解,转移于10mL量瓶中并稀释至刻度,摇 匀,再分别精密吸取2mL,置于10mL量瓶中以甲醇 定容至刻度,摇匀,分别精密吸取定容液50L注入 液相色谱仪,测定,由标准曲线计算含量. 表1骨碎补酊中柚皮苷含量测定结果(,l=5) 3讨论 骨碎补酊是将骨碎补中粉以60%乙醇为溶剂回 流提取制成的酊剂,骨碎补的活性成分是以柚皮苷为 主的二氢黄酮类化合物.作为中药制剂,以往我们对 骨碎补酊在质量控制上只进行定性分析,存在局限 性.在以往工作的基础上,我们研究了其活性成分柚 皮苷的含量测定方法,结果准确,重复性好,且易于操 西北药学杂志2006年4月第2l卷第2期 作,符合定量分析要求,可用于骨碎补酊的质量控制, 弥补了定性分析的不足. 在本文设计的柚皮苷的含量测定方法的基础上, 以柚皮苷为指标,我们用正交实验法优选了骨碎补的 提取工艺,结合验证与比较试验,确定最佳提取条件 为:乙醇浓度为60%,乙醇用量为骨碎补的l0倍,回 流提取3次,每次1h. 参考文献: [1]中国药典2000年版[S].一部.2000.209—210. [2]孙文基,谢世昌.天然药物成分定量分析[M].北京:中 国医药科技出版社,1997.341,342. [3]杨中林,韦英杰,何执静,等.骨碎补不同炮制品中总黄 酮及柚皮苷含量测定[J].中国中药杂志.2001,26 (1o):682,684. I收稿日期:2005,05—29) 感冒解毒颗粒质量标准研究 张燕,邓少胜,张继业(西安交通大学医学院药学系, 陕西西安710061) 摘要:目的建立感冒解毒颗粒质量控制的方法.方 法采用TLC法对蓝花参,鸡聆花和一枝黄花进行 同步定性鉴别;用uV法测定了总黄酮的含量.结果 TLC鉴别方法专属性强.总黄酮在0,0.6mg间 有良好线性关系(r=0,9996),平均回收率为 99.18%,RSD0.02%(n=5).结论本质量标准可 有效控制感冒解毒颗粒的质量. 关键词:感冒解毒颗粒;蓝花参;鸡胯花;一枝黄花 中图分类号:R927.2文献标识码:A 文章编号:1004—2407(2006)02-0064-02 感冒解毒颗粒是由蓝花参Wahlenbergiamargina— ta(Thunb.)A.DC.,鸡黔花Euscaphisjaponica (Thunb.)Dipp.和一枝黄花Solidagovirga—aureaL. vat.1eiocarpa(Benth.)A.Gray组成的复方制剂…, 具有祛风,清热,解毒之功效,可用于治疗伤风感冒引 起的恶寒发热,头痛咳嗽,咽喉疼痛等症.质量标准 中仅有理化鉴别,无薄层鉴别和含量测定方法.笔者 建立了感冒解毒颗粒中蓝花参,鸡黔花,一枝黄花的 薄层色谱鉴别方法及该药中总黄酮含量测定的方法. 上述方法简单易行,结果准确,重复性好,易于推广应 用. l仪器与试药 1.1仪器uV一2450分光光度计(日本岛津),超 声波清洗器(天津市化学电子设备厂). 1.2试药感冒解毒颗粒(市售),阴性样品系除去 处方中所要鉴别药材后按该制剂工艺制备而成.蓝 花参,鸡黔花和一枝黄花对照药材由西安交通大学生 药学教研室牛晓峰副教授鉴定.芦丁对照品购自中 国药品生物制品鉴定所.其他试剂均为分析纯. 2薄层鉴别 2.1供试品溶液制备取感冒解毒颗粒1袋,研碎, 加乙醚10mL,超声10min,倾去乙醚液.残渣加甲 醇20mL,超声30min,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液. 2.2对照溶液制备取蓝花参2g,研碎,加甲醇lO mL,超声30min,过滤,滤液挥干,残渣加甲醇1mL 使溶解,作为蓝花参对照药材溶液.取鸡黔花1g,研 碎,加甲醇10mL,超声30min,滤过,滤液挥干,残渣 加甲醇1mL使溶解,作为鸡J】今花对照药材溶液.取 芦丁对照品适量,加甲醇制成每1mL含lmg的溶 液,作为对照品溶液. 2.3阴性供试品溶液制备取鸡黔花1g,一枝黄花 1g,研碎,加甲醇10mL,超声30min,过滤,滤液挥 干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为蓝花参阴性供试品 溶液.取蓝花参2g,一枝黄花1g,研碎,加甲醇l0 mL,超声30min,过滤,滤液挥干,残渣加甲醇lmL 使溶解,作为鸡黔花阴性供试品溶液.取蓝花参2g, 鸡胯花1g,加甲醇10mL,密塞,振摇10min,放置l0 min,滤过,滤液作为一枝黄花阴性供试品溶液. 2.4展开系统取硅胶G适量按湿法铺制,自然晾 干后,105~C活化0.5h,置于干燥器中备用.照薄层 色谱法(中国药典2005年版一部附录?B)试验,将 上述9种样品各点样5,展距8CB,以醋酸乙酯一 甲酸一水(8:1:1)为展开剂】. 2.5显色与结果鉴别喷以3%三氯化铝乙醇溶 液,待乙醇挥干后,6O?烘至斑点清晰.结果供试品 色谱中,在与蓝花参相对应位置上,显相同的黄褐色 斑点,阴性供试品溶液无此斑点;与芦丁相对应位置 上显相同的亮黄色斑点,阴性供试品无此斑点;与鸡 黔花相对应位置上显相同的蓝灰色至蓝黑色斑点,阴 性供试品无此斑点.不同批号的样品同法实验,结果 一 致. 3含量测定 3.1实验条件选择 3.1.1测定波长的确定取对照品溶液和供试 品溶液,按标准曲线制备项下方法显色,于700,400 Ilm波长之间扫描.结果表明,两者均在510nm波长 处有最大吸收,故将测定波长定为510nm.由于未 显色的供试品溶液在510nm波长处略有吸收,所以