[精彩]试验二 中性盐沉淀法分离蛋清中的蛋白质

[精彩]试验二 中性盐沉淀法分离蛋清中的蛋白质 实验二 中性盐沉淀法分离蛋清中蛋白质 一、 实验目的 掌握盐析法从蛋清中分离目的蛋白质的技术。 二、实验原理 蛋白质在稀盐溶液中,其溶解度会随盐浓度的升高而增加,此种现象被称作盐溶。但是当盐的浓度继续增高时,蛋白质的溶解度又以不同程度地下降并先后从溶液中析出,此种现象被称为盐析。上述现象是由于蛋白质分子中极性基团之间存在静电力。在低盐浓度下,蛋白质分子中极性基团之间的静电力受盐离子的影响而被消除,蛋白质在水中的极性基团的电荷被中和,水化膜被破坏,于是蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出。盐析法就是根据不同蛋白质在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的。 三、实验用品 1.仪器,100mL锥形瓶,50mL烧杯,50mL带盖离心管,离心机。 2.试剂,蛋白质溶液,5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清水溶液,新鲜鸡蛋清,水=1,9,,饱和硫酸铵溶液,固体硫酸铵 四、实验方法 1. 取锥形瓶一个,加入蛋白质溶液5.0ml,再加等量的饱和硫酸铵(半饱和硫酸铵)溶液,混匀后静置数分钟,则析出球蛋白。将混合液转移至两离心管(等量)中,2000rpm离心5min,小心将上清夜转移至小烧杯,向沉淀中加少蒸馏水,观察是否溶解,为什么, 2. 向小烧杯中上清液添加硫酸铵粉末,边加边摇,直至不再溶解为止,此时析出的沉淀为清蛋白。转移至两离心管(等量)中,2000rpm离心5min,弃上清,向清蛋白沉淀中加少量蒸馏水,观察沉淀的再溶解。 五、实验流程 蛋白质溶液 (5.0ml) + 饱和硫酸铵(5.0ml) 放锥形瓶中,混匀, 静置数分钟 至两离心管中,等量, 2000rpm离心5min 取上清液至小烧杯 球蛋白沉淀 添加硫酸铵粉末, 加少量HO 2 边加边摇 至两离心管中,等量, , 再溶解 2000rpm离心5min 弃上清 清蛋白沉淀 加少量HO 2 , 再溶解 六、思考题 1. 盐析后球蛋白沉淀加水再溶解后,加热,再加水,是否溶解, 2. 清蛋白沉淀加水后再溶解,用何方法可再沉淀而不变性,