羊水绒毛染色体检查在胎儿产前诊断中的临床应用

羊水绒毛染色体检查在胎儿产前诊断中的临床应用 羊水绒毛染色体检查在胎儿产前诊断中的 临床应用 ? 38?中国优生与遗传杂志2005年第13卷第4期 羊水绒毛染色体检查在胎儿产前诊断中的临床应用 窦蓉,朱祖华,孙晨光,王秀岭,孟晓彦(1.上海市长宁区中心医院,200336,1.检验科遗传室2.妇产科) 摘要:目的探讨先兆流产,自然流产与染色体异常发生率之间的关系,并且通过孕中期羊水细胞染色体核型分析. 了解异常染色体核型出现的频率.类型以及与产前诊断指征的关系.方法对41例孕妇早期流产的绒毛组织进行染色体分 析,并对流产儿染色体结构异常与双亲相关性等问题进行了讨论.另外.对48例有产前诊断指征的孕妇在妊娠16,22w行 羊膜腔穿刺,抽取羊水细胞进行培养及染色体核型分析.对异常核型者经济带血染色体核型分析证实.结果有风险孕妇 流产绒毛染色体异常发生率为36.6%.常见异常核型为染色体数目异常11例,占异常核型的737%,其中常染色体数目异 常6例,占异常核型的40.0%.性染色体数目异常5例,占异常核型的33,3%.羊水细胞染色体异常的发生率63%常见核 型为性染色体数目异常,占异常核型的66.7%.结论研究证明先兆流产,自然流产与染色体异常的发生有直接关系.染色 体检查对找出自然流产的原因,诊断与再孕及选择合理的治疗有重要的临床意义.对在妊娠中期有高危风险的孕妇.进行羊 水细胞染色体检查具有安全,可靠,诊断准确,是目前遗传病尤其是染色体病产前诊断I必不可少的方法之一. 关键词:绒毛组织;羊水细胞;染色体核型;产前诊断 中图分类号:R714.55文献标识码:A文章编号:1006—9534(2005)04—0038—03 在临床的工作中约有15%,2O%临床确诊的妊娠以自 然流产而告终.其中大多数(80%)是处于胚胎早期.为了探 讨自然流产的原因.我室从1999年4月开始应用孕早期绒 毛组织直接法制备染色体,对先兆流产.自然流产的41例妇 女绒毛组织进行染色体核型分析.另外我们对孕中期的妊 娠妇女在产前诊断中有不良孕产史.唐氏血清筛查高危风险 的病人进行羊膜腔穿刺.羊水细胞培养.本文了49例 妊娠中期孕妇的羊水细胞染色体核型分析结果.探讨了此 时期胎儿染色体异常发生率及主要类型. 资料与方法 1.做绒毛染色体的对象1999年4月至2004年2月, 来我院生育与妇科门诊获得先兆流产.自然流产的高风 险孕妇41例.流产次数均在两次以上.我们对以上患者清 官取出的新鲜绒毛标本进行染色体标本的制备.年龄在23 , 平均年龄33岁.孕龄在6,12w,产前诊断适应征 24岁. 见表1. 2做羊水染色体对象2000年8月至2004年2月来 我院产科进行产前检查的病人,经唐氏血清标记筛查高风险 孕妇以及来自遗传咨询门诊有不良孕产史的孕妇49例.年 龄在21,39岁.平均3O岁.孕龄在18,22w,多数病人在 20w左右.产前诊断适应征见表1. 表1羊水绒毛染色体检查的产前指征 3.绒毛染色体的制备及分析方法 (1)绒毛染色体的制备孕早期绒毛组织的滋养层细胞 属增殖细胞,在体内以一定的速度不断分裂.利用这些自发 性分裂细胞,不需要培养,采用直接法制备染色体.取出绒 毛组织立即放人1640培养基中,挑选典型的绒毛组织1O, 12mg.然后漂洗.剔除蜕膜,将漂洗后的绒毛放入已预温好的 37?,08%的枸橼酸钠低渗后(其中含一定量浓度的秋水仙 素).用甲醇:冰醋酸3:1固定2次.6O%冰醋酸解离.然后 自管底缓缓加入甲醇混匀.用吸管吹打绒毛.离心,固定液再 次固定,最后滴冰片.置56?烘烤12h. (2)核型分析胰酶消化G显带染色(必要时加做c带 显色).在油镜下分析15个分散好.中等长度的中期分裂 相.同时用杭州多利生物信息技术有限公司提供的R一 200G染色体图像分析系统分析.每例样品分析3个核型, 计数15个细胞.结构异常核型分析5个以上.数目异常核型 需要计数3O个细胞.必要时做家系调查及亲属染色体分 析. 4.羊水染色体标本的制备及分析方法 (1)穿刺根据病人知情原则.告之受术者手术风险如: 早产,宫内感染,羊水栓塞等.并在手术同意书上签字,嘱孕 妇排空膀胱.左右摇腹3rain,以促使活细胞悬浮.所有孕妇 作穿刺前常规B超定位,避开胎头及胎盘所在部位(除一例 进入胎盘外).穿刺时间在孕16,22w为宜.用7号腰穿针 穿刺.开始2ml弃去,以防止母体细胞污染. (2)染色体制备抽取羊水20,40ml,将抽出的羊水离 心后.将细胞沉淀接种于羊水培养基中(羊水培养基由四川 省计划生育科学研究所提供).每例孕妇均接种4瓶,将培 养瓶置37?恒温箱密闭式培养7d.以上全部过程均需无菌 操作.7d后每天在倒置显微镜下观察,如有散在单个梭状细 胞贴壁生长,部分形成小岛,即可换热,37?继续传代培养1 , 2d.当羊水细胞贴壁生长旺盛形成大片克隆即可收获,受 获前加入一定量浓度的秋水仙素,继续放入培养箱37?培养 中国优生与遗传杂志2005年第13卷第4期? 39? 5--6h,镜下观察有80%圆形细胞即可终止培养.刮取贴壁 细胞同培养基一起离心,取沉淀物放入0. 8%枸橼酸钠低渗 液中低渗.其它步骤同外周血染色体制备. (3)核型分析胰酶消化G显带染色(必要时加做c带 显色).在油镜下分析15个分散好,中等长度的中期分裂 相,同时用杭州多利生物信息技术有限公司提供的RST一 200G染色体图像分析系统分析.每例样品分析3个核型. 计数15个细胞,结构异常核型分析5个以上.数目异常核型 需要计数3O个细胞.必要时做家系调查及亲属染色体分 析. 结果 1.绒毛染色体分析结果在41例绒毛标本中31例可 用于核型分析.染色体标本制片成功率为75.6%.我们检 出正常男性核型46,XY.6例,正常女性核型46.XX,10例, 男女比例为0.6:1.检出异常核型15例,检出率48.4%,异 常男性核型7例,异常女性核型5例.男女比例为1.4:1,正 常组与异常组男女比例经Y0检验,两者无显着性差异(P> 0.01).胎儿染色体异常分布,常染色体数目异常6例,占异 常核型的40.0%.性染色体数目异常5例.占异常核型的 33.3%.常染色体结构异常1例,占异常核型的6. 7%.亚 二倍体,超二倍体,二倍体5例,占异常核型的33. 5%.产前 诊断指征与染色体异常核型的关系见表2. 2.羊水染色体分析结果 (1)羊膜腔穿刺情况49例孕妇全部一次穿刺成功.穿 刺成功率100%.取羊水量2O,404所有病人术后均无腹 痛,穿刺部位无出血,胎心正常,无感染.流产.羊水栓塞与并 发症发生. (2)羊水细胞培养胎儿羊水细胞染色体培养49例,培 养成功43例,成功率87.7%.培养失败7例.血液污染2 例,霉菌污染1例,均结果. (3)胎儿染色体核型与异常分布在43例培养成功的 染色体中,正常男性,46,XY,22例.正常女性46,XX,19 例,男女比例为1.2:1.异常核型3例.异常检出率6.1%. 其中染色体数目异常2例.占异常的66.7%为性染色体三 体,47,XXY.1例已分娩正常男婴,阴囊略大,经脐带血染 色体证实结果与羊水细胞染色体一致.1例本人要求继续 妊娠.1例染色体结构异常为46,XY.+21p+.分娩一表型 正常男婴.产前诊断指征与染色体异常核型关系见表2. 表18例羊水绒毛产前诊断指征与染色体异常关系 讨论 1.在胚胎期约有5%,8%的胚胎有染色体异常,9O% 以上异常者在妊娠过程中通过自然流产,死产不断被淘汰. 流产越早.染色体异常的发生率越高.我国新生儿的异常发 生率为0.73%….我们在31例病例中发现15例异常,异常 率高达48.4%,比一般人群发病率明显增高.检出的染色体 异常有常染色体三体占12.9%(4/13),双重三体占3.3%(1/ 31),性染色体三体占3.3%(1/31).染色体单体占12.9% (4/31),染色体二倍体占12.9(4/31),嵌合体占6.5%(2/ 31),常染色体结构异常3.3%(1/31),21三体检出率为9. 7%(3/31),结果明显高于正常活产婴的21三体发生率L2J. 结果表明:流产儿染色体异常是导致早期自然流产的主要原 因之一,其中常染色体三体是流产儿染色体异常中最常见的 异常类型,导致这一现象的主要原因是生殖细胞在减数分裂 时染色体出现不分离.在41例产前诊断中,母龄大于35岁 者8例,胎儿染色体核型正常者5例,胎儿染色体核型异常 者3例.异常检出率为37.5%.母龄小于35岁者33例,胎 儿染色体核型正常者2O例,胎儿染色体核型异常者13例. 异常检出率为39.4%.根据母亲的年龄与染色体异常进行 Y检验,两者无显着差异(P>0.05).另外我们对由于绒毛 组织坏死时间太常,染色体分析形态欠佳者,做夫妇外周血 染色体检查.发现1例46,XX,inv(9)(p21;ql1)臂间倒位携 带者流产2次,平均孕龄为63d.1例46,XX,t(1;6)(26; q32)平衡易位携带者流产2次,平均孕龄为70d.1例46, XX,t(2;13)(q23;q21)流产2次,第1次孕龄为60d,第2次 孕龄为6个月.综上所述,开展自然流产儿染色体分析的研 究.对了解本次流产的原因,并且能及时作出判断,同时这些 资料可指导医生对流产患者再次妊娠选择合理的治疗,有一 定的临床实用意义.(下转第73页) 中国优生与遗传杂志2005年第13卷第4期? 73? 讨论 1.前置胎盘发病率:本文研究证实其发病率为5.7‰. 分析原因,前置胎盘发病因素之一为子宫内膜的损伤,本研 究中有7O.8%前置胎盘患者流产史,因此流产导致的子宫内 膜不同程度的损伤可能是其发病率增高的原因之一. 2.前置胎盘的分度.产前出血状况及妊娠结局:通常认 为,前置胎盘的分度及产前出血状况可以提示病情的轻重. 决定母儿的预后,本文发现.前置胎盘患者临床经过差异很 大,妊娠结局不能简单地依据其分类及产前出血状况加以预 测.本文研究证实,轻度前置胎盘产前出血的发病率,终止 妊娠时的孕周.剖宫产率,产后出血量.新生儿体重及产后 5minApgar评分<7分者无显着性差异(P>0.05).说明重 度前置胎盘患者可能更早出现临床症状.便于早期做出诊 断,此外,产前出血者重度前置胎盘初次出血时的孕周明显 小于轻度者(P<0.05),但其出血次数,大出血发生率与轻 度比较无显着性差异(P>O.05),说明分类有助于预测出血 时间的早晚,而与出血次数及大出血发生率无密切关系.说 明产前有出血者预示将更早的终止妊娠.所以在临床治疗 上,应尽早住院.采用积极的期待疗法.尤其强调促胎肺成熟 治疗,在确保母儿安全的前提下,尽量延长胎龄.胎肺成熟 后,随时考虑适时分娩.有文献报道:因暂时无出血或出血 量少而长期等待自然分娩者,其围产儿病死率为12.3%;出 血者等待自然分娩的,其围产儿病死率为19.2%,明显高于 适时分娩者(7.1%).可见适时终止妊娠可降低围产儿的死 亡率. 3.分娩方式:分娩方式上100%采用剖宫产分娩.因为 剖宫产可在术中直视下行创面止面,减少产后出血的发生. 手术时若无论从那个方向均难避开胎盘.则可迅速切开胎盘 进人羊膜腔起出胎儿,犹豫不决反而增加出血量. 4.无出血病例:2例无产前出血者均行卧床,抑制宫缩 及促胎肺成熟治疗.2例适时择期手术结束分娩.因此.其 不出血原因可能与治疗及时终止妊娠的时间有关. 参考文献 [1】凌萝达,改善前置胎盘预后的积极期待处理法[J】.实用妇产科杂 志.1994,lO(3):152. [2]黄维新,郑九生.妊娠晚期出血终止妊娠的时机及方式的选择 [J].中国实用妇科与产科杂志,2001.2(17):105. [3]彭丽华.91例前置胎盘剖宫产的临床分析[J].中国实用妇科与 产科杂志,1995,2(11):105. 收稿日期:2004—12—12 (上接第39页) 2.本研究中胎儿羊水染色体异常检出率为6.3%.其中 染色体三体型占66.7%为主要异常核型.说明妊娠中期三体 型仍是胎儿最常见的核型与国内外报道一致I.2例47, XXY,1例已分娩表型正常的男要.阴囊略大.经脐带染色体 检查结果一致.并对其双亲行夫妇外周血染色体检查,核型 均正常.1例本人要求继续妊娠,双亲行外周血染色体检查, 其夫亲为46,XY,22p+.三体儿的产生多为减数分裂时同 源染色体不分离所致.目前我室已经开展了母血清生化 AFP,BHCG唐氏综合征产前诊断筛查,对于高度怀疑21一三 体.13一三体或18一三体的病例,则需抽羊水进行最后的确 诊.故羊水染色体核型分析仍为必须的可靠的确诊方法之 一【5l .羊水细胞经培养后,染色体G带质量好【,假嵌合型 及新生儿核型不一致2~,3,-t'?引.在取材方面,国内外大量资 料证实羊水穿刺较绒毛和胎儿脐带血取材安全. 参考文献 刘祖洞.医学遗传学[M].北京:人民卫生出版社,1992 [1]杜传书, 135—152. [2]李峰.先天愚型的产前诊断[J].国外医学妇产科学分册, 1999.26(I):23—29. [3]杭爱国.陈晓残.唐氏综合征妊娠早期及中期筛查的进展[J].中 华妇产科杂志.1998.33(5):307. [4]NevinJ.Earlyamniocentesis:experienceon22consecutivepatients [J].PrenatDiagn.1990,10:34. [5】ShahwE.DanD,MachiachS,eta1.F'wst—trimestertrmmvaginal amniocentesisforgeneticevaluationofmultiplegestation[J].Prenat Djag,l,1990,10:34. 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