[doc
] 催产素对孕晚期胎鼠神经保护作用的研究
催产素对孕晚期胎鼠神经保护作用的研究
248ChineseJournalofWomanandChildHealthResearch,2009,Vo1.20No.3
催产素对孕晚期胎鼠神经保护作用的研究
陈丽,于红,任慕兰
(1.东南大学临床医学院,江苏南京210009;2.东南大学附属中大医院妇产科,江苏南京210009)
[摘要]目的研究孕晚期催产素对胎鼠海马的神经保护作用及其机制.方法将孕20天胎鼠全脑制作成厚2,3mm的
海马脑片.各组脑片经过药物人工脑脊液灌流后给予缺氧无糖模型15min,苏木素?伊红染色,尼氏染色和原位末端标记法检测
评价缺氧损伤程度.结果经过缺氧无糖后,10,,10,,10mol/L催产素+一氨基丁酸组CA1,CA3区尼氏染色神经元密度分
别为
81.27?4.57,83.33?5.75,79.53?5.03,38.53?6.56,33.60?4.21,32.93?3.65;
原位末端标记法凋亡神经元为4.87?
1.5l,5.47?1.33,6.07?1.28,3.07?1.39,1.80?0.67,2.13?0.74,对照组CA1,CA3区尼氏染色神经元密度为7O.17?4.95,
29.33?5.96;原位末端标记法凋亡神经元为l1.67?3.18,4.78?1.80.10
一,l0,,l0mol/L催产素+_y-氨基丁酸组cA1,CA3
区尼氏染色神经元密度与对照组cAl,CA3区相比差异有统计学意义
(t分别为一9.407,一8.864,一7.207,一5.427,一3.925,
一
3.817,均P<0.O1),l0一,10,,10moVL催产素+一氨基丁酸组
cAl,CA3区凋亡神经元数目与对照组CA1,CA3区相比差
异有统计学意义(t分别为17.428,18.041,16.931,4.761,17.213,13.859,均P<0.01).催产素+一氨基丁酸不同剂量之间差异
无统计学意义(P>0.05).结论催产素对孕晚期胎鼠海马有神经保
护作用,其机制可能与-氨基丁酸有关.
[关键词]催产素;海马;神经保护;一氨基丁酸
doi:10.3969/j.issn.1673—5293.2009.03.004
[中图分类号】R338[文献标识码】A[文章编
号]1673—5293(2009)03—0248—04
Neuralprotectionofoxytocmonratfetalhippocampusinlatepregnancy
CHENLi.,
YUHong2,RENMu.1an
(1.ClinicalMedicalCollegeofSoutheastUniversity,JiangsuNanjing210009,Ch/na;
2.DepartmentofGynecologyandObstetrics,TheAffiliatedZhongdaHospitalofSoutheastUniversity,JiangsuNanjing210009,Ch/na)
rAbstract]ObjectiveTostudyneuroprotectiveeffectofoxytocinonratfetalhippocampusinlatepregnancyanditsmechanisms.Methods
Thebraintissuesofthefetalratsinlatepregnancy(2Odaysaftergestation)wer
etakenandbrainsliceswitllthicknessof2,3mm
containinghippoeampalstructureswereprepared.Afterperfusionwitllartificialcerebralspinalfluid(ACSF)(ingroupA,ACST
containingnootherdrugs;ingroupB,ACSFcontaining10,
mol/Lofgamma-amimobutyricacid(GABA);ingroupC,ACSFcontaining
10-6mot/LofOT.
10”mol/LofBIC(blockerofGABA)and10mol/LofGABA;ingroupD,ACSFcontainingrespective10-?,
lOI7and10-8mol/LofOTandl0mol/LofGABA)for15min.thenbrainslicescontaininghippocampalstructuresingroupwerekept
intheoxygenanduc0sedeprived(OGD)ACSFfor15mintoestablishahypoxicmode1.Thehematoxylin—eosinestaining,Nissl—staining
andterminaldeoxynuleotidetrallsferase.mediateddU1’Pnickendlabeling(I’UNEL)techniquewereusedtoevaluatetheneuraldamage.
ResultsAfteroxygenandglucosedeprivationfor15min.theneuraldensitiesinCA1andCA3areasofhippocampusinrespective10,,
10
一’and10-8mol/Lofoxytocin(OT)andGABAgroups(OT+GABAgroups)byNissl’sstainingwere81.27?4.57,83.33?5.75,
79.53?5.03.38.53-4-6.56.33.60-4-4.21and32.93-4-3.65respectively,whilethoseinthecontro1groupswere70.17-4-4.95and
29.33-4-5.96respectively.thereweresignificantdifferencesintheneuralden
sitybetweendifferentOT+GABAgroupsandthecontrol
group(t=一9.407,一8.864,一7.207,一5.427,一3.925and一
3.817respectively,allP<0.01).Thenumberofapoptosticneurons
inCA1andCA3al”ea.9ofhippocampusinrespective10-6.
10andl0一mol/LofOT+GABAgroupswere4.87-4-1.51,5.47?1.33,
6.07?1.28.3.07-4-1.39,1.80?0.67and2.13?0.74respectively,whiletlloseinthecontrolgroupswere11.67?3.18and4.78?
1.80respectively.thereweresignificantdifferencesinthenumberofapeptosticneuronsinCA1andCA3Rressofhippocampusbetween
differentOT+GABAgroupsandtIlecontrolgroup(t=17.428,18.o41,16.931,4.761,17.213and13.859respectively,allP<
0.01).BetweendifferentdosagesofOT+GABAgroupstherewerenostatisticaldifferencesinnumberofapoptosticneursons(allP>
O.051.ConclusionOxytocinhasneuralprotectiveroleforratfetalhippocampusinlatepregnancy,andmechanismofactionmayberelated
t0GABA.
[Keywords]oxytocin(OT);hippocampus;neuralprotection;gamma—ami
mobutyricacid(GABA)
妊娠晚期胎儿逐渐发育成熟面临分娩,而分娩过程对胎
脑来说是一种具有高损伤风险的应激性事件.因此临产前应
该有机制提醒胎儿预先为分娩做好适应性准备.胎儿的
中枢神经在晚孕期以及分娩过程也发生了适应性的变化.催
产素(oxytocin,OT)作为参与分娩的重要激素,不仅在母体分
娩过程中发挥重要作用,对胎儿也有着不可忽略的影响.分
娩过程中OT除了经典的促进子宫收缩作用以外,对于胎儿
[收稿日期】2009一O1—15
[作者简介】陈丽(1982一),女,在读硕士研究生,主要从事围产医学研究.
[通讯作者】任慕兰,教授.
神经系统的影响还未知,故本实验对此加以研究.
1材料与方法
1.1动物与材料
1.1.1实验动物
8只SD大鼠,孕20天,体重400~450g,由南京市江宁区
青龙山动物繁殖场提供.
中国妇幼健康研究2009年第20卷第3期249
1.1.2试剂器材
人工脑脊液(artificialcerebralspinalfluid,ACSF)成分
(mmol/L)0’:葡萄糖10.0,NaC1124,KC13.3,NaH2PO4
1.25,MgSO2,NaHCO325,CaC122,通入含95%O2+5%
CO,的混合气体30min,流量为200mlMmin,HC1调至pH为
7.35—7.45.一氨基丁酸(gamma—amimobutyricacid,GABA)
(Sigma);荷包牡丹碱(bicuculine,BIC,GABA受体阻断剂)
(Sigma);OT(上海第一生化药业);原位末端标记法
(TUNEL)试剂盒(Promega公司);数显恒流泵(上海沪西分析
仪器厂);混合气体95%O2+5%CO2,95%N2+5%CO2(南
京通广气体).
1.2方法
1.2.1离体脑片
孕鼠乙醚吸入麻醉,常规腹部消毒剖宫产逐个取出胚胎,
剥掉胎盘暴露出胎鼠立即断头,剥离出全脑,置于用混合气体
饱和的0,4cc的ACSF中降温1min.用刀片(上海飞鹰)冠
状面切割全脑制作2mm脑片,保留包含海马的脑片,共得包
含海马区的脑片33片.将脑片置于温度为32.0?0.5~C的
ACSF中,通人混合气体95%O,+5%CO2,流量为20OraL/rain,
孵育2,3h备用.
1.2.2分组给药
A(对照)组:ACSF灌流15min;B组:含GABA10mol/L的
ACSF灌流15min;c组:依次用含OTt0,mol/L,BIC10一mol/L,
GABA10moVL的ACSF各灌流15min;D组:?依次用含OT
10一mol/L,GABA10.mol/L的ACSF各灌流15rain;?依次用
10,mol/LOT,GABA10.mol/L的ACSF各灌流15min;?依次
用10一mol/LOT,GABA10mol/L的ACSF各灌流15rain.数显
恒流泵控制药物ACSF的灌流速度为2mL/min,同时通人混合气
体95%O2+5%CO2,流量为200mL/min.
1.2.3缺氧无糖模型
药物ACSF灌流后的各组脑片经过缺氧无糖(oxygenand
glucosedeprivtion,OGD)模型15min,即将95%O2+5%CO2的
混合气体换为95%N+5%CO的混合气体,并且将ACSF中
的葡萄糖(10.Ommo1./L)换为同浓度的蔗糖(10.Ommol/L),
诱导脑片的缺氧损伤.之后恢复供氧供糖ACSF灌流30min
后进行损伤指标评价.
1.2.4评价
1.2.4.1苏木素一伊红染色脑片经4%甲醛固定后,常规
石蜡包埋切片.用二甲苯脱蜡,经各级乙醇至水洗,苏木素染
色5min,伊红染色2min,梯度酒精脱水后二甲苯透明,中性树
胶封片.切片光镜20×10和40×10倍视野下观察各组海马
CA1,CA3区神经元排列,细胞形态变化以及细胞核情况.
1.2.4.2尼氏染色石蜡片晾干后依次经二甲苯脱脂梯度
酒精脱水,然后甲苯胺蓝染色30min,切片经梯度酒精分色脱
水后,二甲苯透明,中性树胶封片.比较各组海马CA1,CA3
区尼氏染色的神经元数目.光镜20×10倍下定位海马CA1,
CA3区,然后40×10倍下随机选取不重叠的3个视野,计数
外形及内部结构完整的神经元数目并取均值.
1.2.4.3原位末端标记法凋亡具体操作按照试剂盒说明
.石蜡包埋组织切片后依次经过二甲苯,梯度酒精水合以
及蛋白酶K处理,切片标本再经过通透性处理后脱氧核糖核
苷酸末端转移酶(TdT)作用下生物素biotinylate标记的dUTP
与样本DNA的标记反应,然后加入连接了辣根过氧化酶的链
霉亲和素(Streptavidin—HRP)以及底物的显色反应,苏木素复
染后封片光镜观察.每张切片光镜20×10倍下定位海马
CA1,CA3区,然后40×10倍下随机选取不重叠的3个视野,
计数阳性细胞数,阳性染色为棕黄色,取平均值.
1.3统计学方法
用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析.实验数据以
均数?
差(?S)
示,组问行t检验及方差分析检验显
着性.
2结果
2.1苏木素一伊红染色结果比较
光学显微镜下,细胞核呈深蓝色,胞浆呈淡红色.A组,B
组,C组病理改变明显,细胞排列紊乱,层次不完整,稀疏分布
不均匀,片状坏死,细胞肿胀,空泡变性,核固缩,胞质浓缩核
膜不清,核仁消失.D组海马层次较清楚,排列较整齐,细胞
形态规整,偶见肿胀细胞或核固缩,坏死,见图1,图2.
图1对照组(HE×400倍)
Fig.1MorphologyofcellsinthecontrolgroupbyHE
staining《HE×400)
图2OT(10)+GABA组(HE×400倍)
Fig.2MorphologyofcellsinOT(10)+GABAgroup
byHEstaining(HE×400)
2.2尼氏染色结果比较
比较B,c,D组与A组CA1和CA3区神经元密度.结果
显示:D组神经元密度比A组高,且差异有统计学意义(P<
0.01),D组不同剂量之间神经元密度比较无显着差异.B,C
组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05),见表1.
ChineseJournalofWomanandChildHealthResearch,2009,Vo1.20No.3
表1尼氏染色海马CA1,CA3区神经元密度(?S)
Table1TheneuraldensityinhippocampusCA1andCA3areasbyNissl’8stain
ing{)~?S)
注:与A组比较,P<0.01.
2.3原位末端标记法凋亡程度比较
比较B,C,D组与A组CA1和CA3区神经元凋亡程度.
结果显示:D组CA1,CA3区凋亡神经元数目较A组少,且有
统计学意义(P<0.O1),D组不同剂量之间神经元凋亡数目无
剂量依赖相关性.B组CA1区,C组CA1和CA3区凋亡神经
元数目与A组比较差异无统计学意义(P>0.05).B组CA3
区神经元凋亡数目较A组CA3区多,差异有统计学意义(P<
0.05),见表2.
表2海马CA1,CA3区神经元凋亡数目(?S)
Table2ThenumberofapoptostieneuronsinhippocampusCA1andCA3areas
(?S)
注:与A组比较,尸<0.05,”P<0.O1.
3讨论
离体脑片排除了血压,温度,电解质和血脑屏障等因素的
干扰,在ACSF缺氧无糖中诱导的脑片损伤,是模拟脑缺氧的
一
种简便的体外模型,已广泛应用于脑缺氧损伤机制和药物
保护作用的研究j.本实验利用离体脑片诱导缺氧无糖模型
来研究催产素的神经保护作用及其机制.
GABA是广泛分布于中枢神经系统内重要的神经递质,
在神经元不同的阶段发挥不同的效应.对于成熟神经元,
GABA是重要的中枢抑制性神经递质,发挥超极化抑制作用.
赵彤等的实验研究以神经系统发育已成熟的成年大鼠为对
象,在急性缺氧后,GABA可以明显提高海马神经元的抗缺氧
能力.对于幼稚神经元,GABA在其发育过程中发挥兴奋性
效应,是一种兴奋性神经递质,起重要神经营养作用.本
实验研究对象为胎鼠,神经系统发育未成熟,GABA为兴奋性
神经递质,故急性缺氧中B组与A组相比未能显示出抗缺氧
能力.然而,在急性缺氧环境中,GABA对于幼稚神经元的去
极化兴奋作用是否会加重海马神经元的缺氧损伤还不清楚,
需要进一步的研究.
分娩过程对于胎儿来说是一种急性应激事件,此时胎儿
的神经系统发育并未成熟,GABA仍以发挥兴奋性神经营养
作用为主.AnonsI6发现在分娩前一段时间内海马脑片中
GABA能够兴奋细胞的比例下降.Tyzio等实验研究显示,
妊娠晚期0T能够引发胎鼠海马神经元中GABA作用由兴奋
到抑制的短暂改变.此外,陈静芳等的动物实验显示0T
能够抑制大鼠大部分海马CA1区神经元自发以及诱发的放
电活动.本研究在急性无糖无氧环境中,单独B组并不能减
少神经元的缺氧损伤,OT联合GABA组能够降低幼稚神经元
的损伤,初步显示出0T对幼稚神经元的保护作用;而c组,
BIC阻断GABA受体通道后神经元损伤无明显降低,说明在
幼稚神经元中阻断GABA受体通道后OT抗缺氧神经保护作
用消失,显示了OT的神经保护作用的发挥与神经递质GABA
有关.
OT是参与分娩与泌乳的经典激素,也是一种重要的神经
递质j,其对胎儿的中枢也发挥重要作用.虽然过量的外源
性OT的使用导致过强的子宫收缩会加重胎儿的宫内缺氧,但
有报道显示宫内窘迫的胎儿其OT浓度远远高于母体OT浓
度.说明缺氧环境中胎儿可能自身合成OT来抵御分娩中
伤害性事件.分娩中非强直性子宫收缩引起的胎盘血流量降
低形成的缺血缺氧环境可能促使胎儿中枢合成更多的OT来
抵御伤害.由此可见OT在一定范围浓度内引发的子宫收缩
可以促使其对胎儿神经保护作用的发挥.
孕晚期OT使幼稚神经元GABA的抑制性改变来减少神
经元活动和代谢需要,增加了胎儿对分娩过程中缺氧和低血
糖的耐受力,发挥对胎儿海马的神经保护作用.本研究结果
对胎儿神经保护提供了新的靶点,为降低临床分娩中胎儿脑
缺氧损伤所致的新生儿缺氧缺血性脑病的发病提供了新方
向.本研究尚有很多有待进一步拓展的工作,如:需要在进一
步的动物实验中扩大OT浓度梯度范围,寻找窗口剂量;胎盘
屏障对OT作用浓度的影响.夕源性OT对于内源性OT的影
响;在幼稚神经元中0T对于神经递质GABA效应的影响及其
具体的机制等.此外采用循证医学的方法跟踪研究对象在神
经系统发育过程中的远期差异可望为本研究提供更有力的临
床证据.
[参考文献]
[1]BrownCH,GrattanDR.Doesmaternaloxytocinprotectthefetal
brain[J]?TrendsEndocrinolMetab,2007,18(6):225~26.
[2]PuglieseAM,CoppiE,VolpiniR,eta1.RoleofadenosineA3
nOtorsonCA1hippocampalneurotransmissionduringoxygen—
glucosedeprivationepisodesofdifferentduration[J].Biochem
Pharmacol,2007,74(5):768-779.
中国妇幼健康研究2009年第20卷第3期251
[3]刘振伟.实用膜片钳技术[M].北京:军事医学科学出版社,2006:
148-152.
[4]赵彤,王福庄,黄燕华,等.GABA对大鼠海马脑片缺氧损伤的保
护作用[J].中国应用生理学杂志,2003,19(1):16—18.
『5]RepresaA.BenAY.Tmp~cactionsofGABAonneuronal
development[J].TrendsNeurosci,2005,28(6):278-283.
『61Anons.GABAsignalinginfetalbrain:Inhibitoryswitchduring
deliverylJ1.Neurosci,2007.13(3):194.
『7]TyroR,CossartR,KhalilovI,eta1.Maternaloxytocintriggersa
transientinhibitoryswitchinGABAsignalinginthefetalbrainduring
delivery『J].Science.2006.314(58o6):1788-1792.
[8]陈静芳,胡祁生,王勇,等.催产素抑制大鼠海马CA1神经元电
活动[J].基础医学与临床,2004,24(3):306-308.
f9fGimplG.FahrenholzF.Theoxytocinreceptorsystem:structure,
function.andregulationfJ].PhysiolRev,2001,81(2):629-683.
『101CarbillonL.Commenton”maternaloxytocintriggersatransient
inhibitoryswitchinGABAsignalinginthefetalbrainduring
delivery”[J].Science,2007,317(5835):197.
[责任编辑:黄燕萍]
产科医护人员接受及给予人性化服务的状况研究
游)11,丁辉,陶曼枫,冯静,王斌,石琦
(1.首都医科大学附属北京妇产医院北京妇幼保健院,北京100026;2.
卫生部妇幼保健与社区卫生司,北京100026)
[摘要】目的了解产科医护人员接受及给予人性化服务的状况,为改
善医护人员服务状态提供依据.方法在北京,上
海,深圳6个综合医院和妇幼保健院进行定性和定量调查,对3O名门
诊早上9点进入医院接受产前检查的孕妇和58名产科医护
人员进行访谈,对120名门诊孕晚期孕妇进行问卷调查.结果门诊医生每3,6分钟接诊1名就诊者,对就诊者想了解的病情
解释少.大多数门诊出诊医生没有时间上厕所及喝水,中午没有时间休息,大多数医院没有为出诊医生提供饮水和工作餐等便捷
服务.从孕妇的角度分析,医生对孕妇的微笑次数多于咨询台,分诊台,挂号室,收款台的工作人员,差异有显着性(t=3.426,P<
0.05);孕妇对医生服务态度的满意度得分(3.93?0.64)比对护士和前台工作人员(3.43?0.77)高,t=2.730,P=0.01.但孕妇
对”医生看病时是否称呼您的名字”,”看病时是否告诉您相关的保健知识”,”看病所用时间”较为不满意;认为医生的接诊量过
大.结论医生能够热情的为就诊者服务,但是医生接诊量大,自身得到的人性化服务不足,就诊者对接诊量,看病时间和获取知
识方面不满意.医院过多注意对就诊者的人性化服务,疏忽了对医护人员的人文关怀服务,呼吁加强对医疗人才的保护.
[关键词】人性化服务;产科医护人员;微笑;接诊量;满意度
doi:10.3969/j.issn.1673—5293.2009.03.005
[中图分类号]R715.5[文献标识码]A[文章编号】1673—5293(2009)O3—0251一o3
Astudyoncurrentsituationofreceivingandperforminghumanizationservic
es
ofobstetricstaffsin6hospitalsinChina
YOUChuan,DINGHui,TAOMin.feng,FENGJing,WANGBin,SHIQi
(1.&MCHHospital,The&Obsta6caland~necoiogicalHospitalof(MedicalUniversity,&略1~026,China;
2.DepartmentofMCHandCommunityHealth,MinistryofHealthofChina,Be~.ng100026,China)
『Abstract]objectiveToinvestigatecurrentsitiationofreceivingandperforminghumanizationservicesofobstetricstaffs(doctorsand
nurses).so818toprovideabasisforimprovingservicestatusofmedicalworkers.MethodsThequalitativeandquantitativeinvestigationsof
humanizationservicesofobstetricworkerswereconductedin6generalandMCHhospitalsinBeijing,ShanghaiandShenzhencitiesovera
periodfromSeptembertoDecemberin2004.30pregnantwomenwhocanletothesehospitalstoreceiveprenatalexaminationat9amand
58obstetricdoctorsandnurseswereinterviewed.and120pregnantwomenintl1e3rdtrimesterofpregnancyinclinicwereinvestigatedwith
aquestionnaire.ResultsMostdoctorsmetapatientper3—6minute,theyalmo
sthadnotimetoexplainmoreaboutthedisease.Most
clinicdoctorshadnotimetogototoiletorhaveadrink.hadnotimetotakearestinthenoon.Mosthospitalsdidnotsupplyconvenient
servicesofdrinkingoreatingforsuchbusydoctorsandnurses.Frompregnantwomen’sview.t}leobstetricdoctorsgavemuchmoresmiles
toclientthanworkersinconsultation.register.receptionandcashdesks,tIlereweresignificantdifierences(t=3.426.P<0.05),and
t}leobstetricdoctorsobtainedhighersatisfactionSCOreS(3.93?0.64)frompregnantwomenthannursesandworkersinotherservice
stations(3.43?0.77)(t=2.730.P=0.01).Butpregnantwomenwereunsatisfactorywith”Didtlledoctorcallyournamewhenyouvisit
her?”,”Didthedoctortellyousomehealthcareknowledge?”,”Wastl1evisittimeenouforyou?”,山eyalsocomplainedthattlle
doctorshavetomeettoomuchpatientstohavemoretimestodo山
ese.CondusionTheelihieobstetricdoctorsservedthepatients
zealously.buttheyhavetomeettoomuchpailentsandcann’treceiveenouhumanizationservicesthemselves.Thevisitorsare
unsatisfactoryintoomuchmeetingnumbersofthedoctor.visittimeandacquirementofrelatingknowledge.Thehospitalspaymore
attentioninhumanizationservicesofthedoctorsandnursesfor出
epatients.buttlleyUSUallynellecthumanizationservicesfortheirstaffs.
1Keywordslhumanizationservice:obstetriedoctorandnursesmile:meetnumber:satisfaction
“人性化服务”的概念于2000年11月在巴西西阿拉
(Ceara)召开的世界人性化分娩大会上,被写进西阿拉宣言,
明确定义为:人性化是指通过人与人之间交流和关爱方式,使
人们能够理解生活的基本意义,感受到人情的温暖,并和以下
【收稿日期]2008—12—14
[基金项目]卫生部妇幼保健与社区卫生司妇幼卫生政策研究课
资助项目(2005)
[作者简介]游JII(1968一),女,副主任医师.主要从事妇幼保健,医院人性化服务和健康传播的研究.
【通讯作者]丁辉,主任医师.