同一血清型鸭疫李氏杆菌不同菌落的药敏性测定

同一血清型鸭疫李氏杆菌不同菌落的药敏性测定 自 1996 年 9 月以来, 我们对两家发病鸭, 其中含血清马丁琼脂平板接种两个菌分离 ( ) 场 番鸭场和野鸭场通过临诊剖检、细菌分 平 板, 一 个 置 蜡 烛 缸 中, 所 有 接 种 平 板 于 () 离与鉴定确诊为鸭疫李氏杆菌 感染, 且37?温箱中培养 2, 3 天。RA 1. 3 不同菌落的增菌培养 分别挑取生长 经实验室检查证明未并发其他疾病, 后据常 规药敏试验结果用药治疗, 与以往比较疗效 在琼脂平板上左右上下中 5 个位置的单个菌 甚不理想。 为此我们对用药治疗 3 天后病死 落以含血清马丁肉汤进行增菌培养, 37?振 鸭再次作细菌分离, 且对自同一病死鸭肝脏中 荡培养 12, 14。 h ( 分离的经玻片凝集试验证明为同一血清型 1. 4 分离的不同菌落细菌血清型鉴定 按 I ) 型的的不同菌落进行药敏性测定, 结果发 常规方法对分离的不同菌落的细菌进行染色 RA ( 现不同菌落的药敏性存在差异。 报道如下。镜检和以抗 型 高免血清 中国农业大 IRA ) 1 方法学动物医学院传微教研室苏敬良博士惠赠111 病料的采集与处理 分别无菌采集病 作玻片凝集试验, 以鉴定不同菌落细菌的血 死雏番鸭和雏野鸭的肝脏、脾脏和肾脏, 其中 清型。 肝脏待作细菌分离培养后与脾脏、肾脏混合 1. 5 不同菌落细菌的药敏性测定 对自病 死雏番鸭和雏野鸭肝脏中分离的左上右下中 匀浆, 加双抗 4?下作用 6后反复冻融 5 h 次, 然后 4?下 5000 ƒ离心 30, 经微 不同菌落细菌按常规纸片法进行药敏试验。 rm in m in () 孔滤膜 200抽滤后分装冻存备用。 试验所用的抗菌药物包括青霉素、链霉素、氯 nm 1. 2 试验所用的培养基及细菌分离培养试 霉毒、庆大霉素、氟哌酸、卡那霉毒、四环素、 验所用的培养基为含血清马丁琼脂平板、麦 红霉素、杆菌肽、丁胺卡那、新霉素、强力霉 康凯琼脂平板和含血清马丁肉汤。 分别用前 素、痢特灵、林可霉素、复方新诺明和先锋霉 两种培养基对病死雏番鸭和雏野鸭肝脏作细 素K 。 1 , 4 报道。微生物种群间的拮抗机理, 目前认 , 产生抗菌物质多, 从而抑制对方营养物质强 () 为, 产生有机酸、抗生 菌素及过氧化氢等物 的生长, 故抑菌圈增大。 另一方面, 由于两种 质对病原细菌的抑制作用, 占位性作用、对营 微生物种群共处同一生态位点, 相互适应, 两 养、氧气的竞争, 从而对病原细菌的排斥。 淳 种种群微生物互相向对方蔓延生长, 故而抑 泽等研究认为从动物体内分离得到的两株芽 菌圈减小。 孢杆菌对肠道病原细菌的拮抗物质主要是蛋 本实验从植物体分离得到的 3 株芽孢杆 3 白多肽类。本实验结果明, 来自植物体的 菌对来自动物的 4 株病原细菌具有不同程度 的生物拮抗作用, 至于在动物体内有无拮抗 3 株有益芽孢杆菌对 4 株动物致病菌有不同 程度的生物拮抗作用。对 4 株病原细菌均有 作用, 有待进一步实验。本实验提示了开发饲 B 4 拮抗作用用微生物的另一途径。 , 但其拮抗作用的强弱不同。对猪 B 1 大肠杆菌、嗜水气单孢菌, 对金黄色葡萄球 B 6 参考文献 菌、嗜水气单孢菌的拮抗作用的程度不同。可能 1 王红宁, 何明清, 胡延秀等. 四川农业大学学报, 1994, 12 ( ) 是由于芽孢杆菌产生抗菌物质的量和病原细菌 增刊?624 2 () 程安春, 何明清, 陈孝跃. 中国兽医杂志, 1994; 20 2?12菌株不同所致; 对猪霍乱沙门氏菌、金黄色 B 1 ) ( 3 淳 泽, 何明清. 四川农业大学学报, 1994; 12 增刊?葡萄球菌以及对猪霍乱沙门氏菌、猪大肠杆 B 6 627 菌无拮抗作用, 表明这些微生物种群与种群之 ) 4 ( 向贵友, 何明清. 四川农业大学学报, 1994; 12 增刊?间处于对抗之外的其它关系类型。 579 5 何明清主编. 动物微生态学. 北京: 中国农业出版社.培养不同时间后, 芽孢杆菌对病原细菌 1994. 181 产生的抑菌圈大小发生变化, 推测是由于两 余桂蓉. 枯草芽孢杆菌 B 、B 菌株防治小麦赤霉菌病 6 46 种微生物种群在争夺有限的营养物质过程 的研究. 四川农业大学硕士学位. 1996. 中, 生物周期短的芽孢杆菌生长速度快, 争夺 否并发其他病毒性传染病, 将处理好的脏器, 经玻片凝集试验证明为同一血清短小杆菌 () 样品分别尿囊腔接种 12 日龄的番鸭胚 5 枚,型均为 型。而麦康凯琼脂平板和另一 IRA 每枚 0. 4, 另设对照番鸭胚 2 枚。首次接种 含血清马丁琼脂平板上均未见菌落生长。 m l 不死的番鸭胚, 吸其尿囊液盲传数代。在番鸭胚中盲传 4 代均不致死番鸭胚, 2 结果因此可排除雏番鸭细小病毒、鸭肝炎病毒和 2. 1 细菌的分离、鉴定及番鸭胚接种试验 鸭瘟病毒感染。 在所有的接种平板中, 只有于蜡烛缸中培养 2. 2 不同菌落 的药敏性 自雏番鸭和 RA 的含血清马丁琼脂平板上见细菌生长, 呈灰 雏野鸭肝脏中分别分离的左上右下中共 10白色、露珠样, 但同一平板上的菌落大小稍有 个不同的单个菌落 的药敏结果见表 1。 RA 差异, 对左上右下中 5 个不同位置的菌落 从表中可见自病死雏番鸭肝脏中分离的 不同菌落 的药敏性 表 1RA 所用药物及结果 复 庆 卡 先 丁 强 林 平板上方 青 键 氯 新 四 红 杆 氟 痢 样本大 那 锋 胺 力 可 新 霉 霉 霉 霉 环 霉 菌 哌 特 菌落位置霉 霉 霉 卡 霉 霉 诺 素 素 素 素 素 素 肽 酸 灵 素 素 素 那 素 素 明 左- - + + - + - - - - - + + + - - - - - - + + - + - - - - - + + + - - - - 上 病死雏番+ + - - - - - + + - - - + + - + - + + 右 鸭肝脏- - + + - + - - - - - + + + - - - - 下 中 - - + + - + - - - - - + + + - - - - 左- - + + - - - - - - - - + + - - - + - - + + - - - - - - - - + + - - - + 上 病死雏野- - + + - - - - - - - - + + - - - + 右 鸭肝脏+ - - + - - - - + + - - - - + + + - 下 + - - + - - - - + + - - - - + + + - 中 注——+ + : 高敏,+ : 中敏, - : 不敏感。 5 个不同位置菌落的 , 其中 4 个菌落高度 RA 菌落的药敏性也存在差异, 其中 3 个相RA 敏感的抗菌药物是氯霉素和先锋霉素K ; 新 同、2 个不同。 由此可见, 在做细菌药敏试验霉素和丁胺卡那中度敏感; 而 1 个菌落青霉 时任意挑取某一菌落或混合挑取数个菌落不 素、复方新诺明和林可霉素高度敏感; 先锋霉 能真实反映某一种细菌的药敏性。 因而建议 素K 、丁胺卡那和强力霉素中敏。而自病死雏 做细菌药敏试验时在方法上要加以改进, 应 野鸭肝脏中分离的 5 个 不 同 位 置 菌 落 的 尽可能多挑取琼脂平板上不同位置的单个菌 () 落, 其中 3 个菌落以氯霉素、丁胺卡那霉素 尤其是大小有差异的菌落分别增菌后进 RA 为高敏; 林可霉素中敏。另 2 个菌落以红 行药敏试验。 RA 霉素和痢特灵高敏; 青霉素、庆大霉素和强力 3. 3 机体内或野外条件下细菌耐药性产生 霉素中敏。 的探讨 在当今的养殖业中, 细菌性传染病 的防治还是要依赖抗菌药物, 然而随着抗菌 3 讨论与分析 药物的广泛、长期和大剂量的应用, 导致致病 3. 1 对自同一病死鸭脏器中分离的同一血 性细菌的耐药谱愈来愈宽。 本试验结果可表 , 报道清型 的不同菌落进行药敏性测定RA 较少。明在同一机体内或同一野外条件下同一种细 菌或同一血清型细菌不同的单个菌株其耐药 3. 2 细菌药敏试验的改进 从表 1 可见自 病死雏番鸭肝脏分离的左上右下中 5 个位置 性可能不同, 这些耐药性不同的菌株在机体 不同菌落 虽然是血清型相同的同一种内或一定的野外条件下可能发生质粒传递, , RA 从而使该种细菌对抗菌药物的耐药谱逐渐拓 细菌, 但它们对药物的敏感性存在差异, 其中 4 个菌落 的药敏性相同, 1 个不同; 而自 宽, 结果常导致许多养殖场场主对细菌性传 RA 染病束手无策。 病死雏野鸭肝脏中分离的 5 个不同位置的