KMnO4-钙指示剂-罗丹明B化学发光法测定对乙酰氨基酚的含量

KMnO4-钙指示剂-罗丹明B化学发光法测定对乙酰氨基酚的含量 KMnO4-钙指示剂-罗丹明B化学发光法测定 对乙酰氨基酚的含量 作者:孙四娟，唐骁爽，唐玉海，熊凤梅，木尼热?阿布都克热木，王丽娟 【摘要】目的建立快速、准确测定对乙酰氨基酚的流动注射化学发光新方法。方法酸性条件下，KMnO4可氧化钙指示剂产生化学发光，罗丹明B对此发光有较强的增敏，对乙酰氨基酚的存在抑制体系发光，基于此结合流动注射技术建立了一种新的测定对乙酰氨基酚含量的化学发光法。结果在优化的实验条件下，在5.0×10-7-1.0×10-5g/mL范围内，对乙酰氨基酚的质量浓度与化学发光信号的降低值有较好的线性关系，检出限(S/N=3)为7.0×10-8g/mL，对1.0×10-6g/mL对乙酰氨基酚进行11次平行测定，其相对标准偏差为2.2%。结论本方法简便、快速、准确，用于片剂中对乙酰氨基酚含量的测定，得到较满意的结果。 【关键词】化学发光;KMnO4;钙指示剂;罗丹明B;对乙酰氨基酚 ABSTRACT:ObjectiveToestablisharapidandprecisecontinuousf low-injectionchemiluminescenceforthedeterminationofparacetam ol.MethodsInacidsolution,calconcouldbeoxidizedbyKMnO4produci 1 ngaweakchemiluminescence,andgreatchemilumimescencewasobtainedwiththepresenceofrhodamineB.Thenthesignalwasinhibitedwiththepresenceofparacetamol.Theinhibitorintensitywaslinearwiththeconcentrationofparacetamol.Coupledwiththeflowinjectiontechnique,arapidflowinjectionchemiluminescencemethodwasdevelopedforthedeterminationofparacetamol.Theparametersaffectingthechemiluminescencesignalwereinvestigated.ResultsUndertheoptimizedconditions,thelinearrangewas5.0×10-7-1.0× 10-5g/mL.Thedetectionlimitwas7.0× 10-8g/mLwithasignal-to-noiseratioof3? 1.TheRSDof11timesparallelassaysfor1.0× 10-6g/mLparacetamolwas2.2%.ConclusionThemethodissimple,rapidandprecise,andsatisfactoryresultswereobtainedwiththemethodappliedforthepharmaceuticalpreparationsofparacetamol. KEYWORDS:chemiluminescence;KMnO4-calcon-rhodamineB;paracetamol 对乙酰氨基酚(paracetamol)是具有解热、镇痛作用的酰胺类药 物，常与其他解热、镇痛药物组成复方制剂。因此，建立一种快速、 简单、灵敏的方法对对乙酰氨基酚进行具有重要意义。文献报道 对乙酰氨基酚含量测定的方法较多，包括高效液相色谱法(HPLC) 2 ,1-4,、紫外分光光度法,5,、电化学法,6-9,、毛细管电泳法,10-12,、荧光法,13,、化学发光法,14,和其他光谱法,15,等。所采用的各种方法都各有其优缺点。文献报道用KMnO4-Ru(bpy)2+3化学发光法测定对乙酰氨基酚的含量，方法的检出限为2.0×10-7g/mL，且使用了较昂贵的Ru(bpy)2+3试剂,14,。基于我们对KMnO4化学发光体系的研究,16,，本研究发现对乙酰氨基酚的存在可以抑制KMnO4-钙指示剂-罗丹明B体系化学发光，据此建立了新的测定对乙酰氨基酚含量的化学发光法。 1与方法 1.1材料 IFFM-E型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈电子科技有限公司)，IFFS-A型多功能化学发光检测器(西安瑞迈电子科技有限公司)。光电倍增管(PMT)高压为600V，使用的连接管均为聚四氟乙烯管(PTFE，0.8mmi.d.)。 KMnO4溶液:精密称取KMnO4(西安化学试剂厂)0.3950g，用适量水溶解并定容于25mL容量瓶中得1.0×10-1mol/LKMnO4储备液;钙指示剂溶液:精密称取钙指示剂(2-萘酚-4-磷酸-偶氮-2羟基-3-萘酸，上海公私合营新中化学厂)2.1910g，用适量水溶解并定容于200mL容 3 量瓶中，得2.5×10-2mol/L钙指示剂储备液;罗丹明B溶液:精密称取罗丹明B(天津天泰精细化学品有限公司)，用适量水溶解并定容于100mL的容量瓶中即得到1.0×10-2mol/L罗丹明B储备液。 对乙酰氨基酚对照品溶液:准确称取对乙酰氨基酚对照品(中国药品及生物制品检验所;批号:100018-200408;纯度:99.6%)0.1000g，用适量水溶解并分别将其定容于100mL的容量瓶中可得1.0×10-3g/mL的对乙酰氨基酚的标准储备液，使用前逐级稀释至所需浓度。 对乙酰氨基酚片剂(石药集团欧意药业有限公司)，实验中所用的试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。 1.2方法 流动注射化学发光的流路图如图1所示。 流路a、b、c、d分别用来输送酸性罗丹明B、样品溶液、KMnO4及钙指示剂溶液。其中样品溶液通过Y型混合器与KMnO4混合，此混合溶液通过六通阀与钙指示剂混合后，再通过一Y型混合器与罗丹明B混合发生化学发光反应，所产生的化学发光信号由光电倍增管放大检测并由计算机记录。主泵与副泵的流速都为1.2mL/min。 4 2结果 2.1不同氧化剂的选择 实验考察了KMnO4、KIO4、K2Cr2O7、KBrO3、Ce(?)、和H2O2等不同氧化剂的作用，研究发现只有选用KMnO4时得到的发光信号最稳定，且峰形好。 2.2KMnO4浓度的影响 考察了1.0×10-2-1.0×10-5mol/L不同浓度KMnO4对检测信号的影响。结果表明，随着KMnO4浓度的增大发光信号也增大，但当其浓度大于5.0×10-3mol/L时，化学发光信号值不稳定，峰形较差。本实验选择5.0×10-3mol/LKMnO4为最佳实验条件。 2.3酸性介质的影响 考察了相同浓度的H2SO4、HNO3、H3PO4、和HCl等酸性介质对化学发光信号的影响。观察到在其他几种介质中都可以产生发光，虽使用HNO3可以得到较大的发光信号，但信号不稳定。只有选用介质H2SO4时所得到的化学发光信号较大而且稳定，所以实验选取H2SO4作为酸 5 性介质。 同时考察了0.005-2mol/L不同浓度的H2SO4对化学发光信号的影响，结果表明当H2SO4浓度从0.005-1mol/L变化时化学发光信号不断增大，H2SO4大于1mol/L时，H2SO4浓度对化学发光信号的影响较小。本实验选择1mol/L的H2SO4作为反应的最佳条件。 2.4荧光物的选择及罗丹明B浓度的影响 研究了不同荧光增敏剂罗丹明B、罗丹明6、罗丹明123、荧光素等对实验体系发光信号的影响，结果表明只有在选用罗丹明B时得到的化学发光信号最大且较稳定，所以实验以罗丹明B作荧光增敏剂。 考察了1×10-3-1×10-5mol/L不同浓度罗丹明B对检测信号的影响。结果表明，随着罗丹明B浓度增大，发光信号增大，当其浓度为2.5×10-4mol/L时，得到最大的化学发光信号值，之后，增大罗丹明B的浓度对化学发光信号的影响不显著。本实验选择1.0×10-4mol/L罗丹明B为最佳实验条件。 2.5钙指示剂浓度的影响 研究了2.5×10-5-2.5×10-3mol/L范围内不同浓度钙指示剂对 6 化学发光信号的影响。实验表明，当钙指示剂浓度逐渐增大时，发光信号也不断增大，当钙指示剂浓度达到1.0×10-4mol/L时，发光信号达到最大值，浓度大于1.0×10-4mol/L时，化学发光信号又减小，因而选取1.0×10-4mol/L作为优化的条件进行以下的实验。 2.6线性范围及检出限 在优化的实验条件下，对对乙酰氨基酚标准溶液进行逐级稀释分析，结果表明对乙酰氨基酚在5.0×10-7-1.0×10-5g/mL范围内有良好的线性关系，方法的检出限为7.0×10-8g/mL，对1.0×10-6g/mL对乙酰氨基酚进行11次平行测定，得到的RSD(相对标准偏差)为2.2%。线性关系的相关参数如表1所示。 2.7干扰实验 对1.0×10-6g/mL对乙酰氨基酚进行测定，当测定的相对误差为?5%时可认为共存物质不引起测定的干扰。结果表明，共存物质的允许量为:1000倍的K+、Na+、NO-3、Cl-、Br-，500倍的柠檬酸钠、淀粉、硬脂酸盐、乳糖，50倍的尿素、SO2-4、PO3-4、CO2-3、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe3+，10倍的Al3+、Fe2+、Zn2+对测定不引起干扰。 2.8样品分析 7 取对乙酰氨基酚(标示量为0.5g/片)10片，精密称定、研细、混匀。准确称取相当于1.0g对乙酰氨基酚精细粉末，用适量水溶解并定容于100mL的容量瓶中，得到1.0×10-3g/mL的样品溶液，稀释至工作曲线线性范围内按图1所示流路进行分析。并进行加样回收实验，结果见表2、表3;同时将本法与药典方法进行了对照。结果表明，本方法用于对乙酰氨基酚片剂含量的测定与药典方法无显著差异，但相对于药典方法，本法快速、操作简单，仪器运行成本低。表1对乙酰氨基酚的线性关系方程及相关参数(略)表2样品的回收率测定结果(略)表3样品的测定结果(略) 3讨论 在酸性条件下，KMnO4可以单独氧化罗丹明B或钙指示剂产生化学发光，但产生的化学发光信号都较小，当两者都存在时产生的化学发光信号较大且重现性好，可能是由于KMnO4对罗丹明B及钙指示剂的协同氧化作用。未报道KMnO4在酸性条件下发光体的存在，因此其发光体可能为罗丹明B及钙指示剂的中间体，其可能的发光机制如下: 高锰酸钾+罗丹明B+钙指示剂罗丹明B*+钙指示剂*+其他物质钙指示剂*钙指示剂+hv 8 罗丹明B*罗丹明B+hv对乙酰氨基酚+钙指示剂*+罗丹明B*钙指示 剂+罗丹明B+其他物质 应用此方法测定片剂中对乙酰氨基酚含量，简便、快速、准确， 结果满意。 【参考文献】 ,1, ChenXY,HuangJ,ZhangK,etal.Sensitiveliquidchromatography– tandemmassspectrometrymethodforthesimultaneousdeterminationofparacetamolandguaifenesininhumanplasma ,J,.JChromatogrB,2005,817(2):263-269. ,2, FranetaJT,AgbabaD,EricS,etal.HPLCassayofacetylsalicylicacid,paracetamol,caffeineandphenobarbitalintablets ,J,.ILFarmaco,2002,57(9):709-713. ,3, LotfiM,FridaD.SimultaneousLCdeterminationofparacetamolandrelatedcompoundsinpharmaceuticalformulationsusingacarbon-basedcolumn,J,.JPharmBiomedAnal,2002,27(6):851-860. 9 ,4, CelmaC,AllueJA,PrunonosaJ,etal.Simultaneousdeterminationofparacetamolandchlorpheniramineinhumanplasmabyliquidchromatography-tandemmassspectrometry ,J,.JChromatogrA,2007,870(1-2):77-86. ,5,徐春梅.紫外分光光度法测定氨咖黄敏胶囊中对乙酰氨基酚 含量,J,.延安大学学报(医学科学版),2006,4(2):6. ,6, GoyalRN,SinghSP.Voltammetricdeterminationofparacetamolat-modifiedglassycarbonelectrodeC60 ,J,.ElectrochimActa,2006,51(15):3008-3012. ,7, El-SahartyYS,MetwalyFH,RefaatM,etal.Applicationofnewmembraneselectiveelectrodesforthedeterminationofdrotaverinehydrochlorideintabletsandplasma ,J,.JPharmBiomedAnal,2006,41(3):720-724. ,8, 10 GoyalRN,GuptaVK,OyamaM,etal.Diferentialpulsevoltammetricdeterminationofparacetamolatnanogoldmodifiedindiumtinoxideelectrode,J,.ElectrochemCommun,2005,7(8):803-807. ,9, WangSF,XieF,HuRF.Carbon-coatednickelmagneticnanoparticlesmodifiedelectrodesasasensorfordeterminationofacetaminophen,J,.SensorsandActuatorsB,2007,123(1):495-500. ,10, LiuXM,LiuLH,ChenHL,etal.Separationanddeterminationoffouractivecomponentsinmedicinalpreparationsbyflowinjection-capillaryelectrophoresis,J,.PharmBiomedAnal,2007,43(5):1700-1705. ,11,EmreD, zaltinN.Simultaneousdeterminationofparacetamol,caffeineandpropyphenazoneinternarymixturesbymicellarelectrokineticcapillarychromatography,J,.ChromatogrB,2007,847(2):126-132. ,12, NepoteAJ,OlivieriAC.Simultaneousspectrofluorometricdeterminationofoxatomideandphenylephrineinthepresenceofalargeexcessof 11 paracetamol,J,.AnalChimActa,2001,439(1):87-94. ,13, AltairBM,HuederPMO,TeresaDZA,etal.Directdeterminationofparacetamolinpowderedpharmaceuticalsamplesbyfluorescencespectroscopy,J,.AnalChimActa,2005,539(1-2):257-261. ,14, WiratR,SaisuneeL,AlanT.Flowinjectionchemiluminescencedeterminationofparacetamol,J,.Talanta,2006,69(4):976-983. ,15, MarceloMS,PoppiRJ.N-wayPLSappliedtosimultaneousspectrophotometricdeterminationofacetylsalicylicacid,paracetamolandcaffeine,J,.JPharmBiomedAnal,2004,34(1):27-34. ,16,熊迅宇，唐玉海，王楠楠，等.流动注射-化学发光法测定 氢化可的松,J,.西安交通大学学报(医学版),2007,28(3):340-342. ,17,中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典: 二部,M,.北京:化学工业出版社,2005:170. 12