小鼠生精周期表皮生长因子受体在睾丸曲细精管的分布

小鼠生精周期表皮生长因子受体在睾丸曲细精管的分布 小鼠生精周期表皮生长因子受体 3 在睾丸曲细精管的分布 何为民 陈奕权 王世鄂 高学勇 周瑞祥 () 目的 观察生精周期不同阶段中表皮生长因子受体 在小鼠曲细精管的分布规律, 以 E GFR 进一步理解 在生精过程中的意义。 方法 通过糖原及多糖显色反应确定曲细精管的生精 E GFR 周期, 采用链霉菌抗生物素蛋白- 过氧化酶免疫组化技术观察 在相应曲细精管上皮的分E GFR 布。 结果 曲细精管部分支持细胞和管周细胞呈 E GFR 阳性反应。?, ? 早期部分精原细胞、细 线期精母细胞的细胞核呈 E GFR 阳性反应。X, ? 期多数粗线期精母细胞、双线期精母细胞, ? 期 ( ) 终变期精母细胞、次级精母细胞和 1, 4 阶段 I, K 期精子细胞胞核旁的胞质内出现 阳 E GFR () () 性反应颗粒区。9 阶段 ? 期和 15 阶段 V, K 期精子细胞在顶体区出现 阳性反应区。 结E GFR 论 在曲细精管上皮的分布与生精周期及精子形成有密切关系。E GFR 关键词 睾丸; 表皮生长因子受体; 生精细胞; 支持细胞; 小鼠 () 司。 表皮生长因子 在精子发生中起重 E GF 1 112 实验设计 要作用。通过与靶细胞的特异表皮生 E GF 选用 12, 13 周龄清洁级 雄性性成 ICR () 长因子受体 结合而发挥其生理学作E GFR () 熟小白鼠 购于中科院上海实验动物中心12 用。 各种动物的精子发生有自己特定的生精 周期。 近年来, 有关 在睾丸的分布已 E GFR 只, 体重 35, 42 。处死动物后取左侧睾丸, g2, 3 有文献报道, 研究多侧重于细胞定位, 其 入改良 液固定 18 , 常规梯度脱水透 Bo u in h 与生精周期的关系尚未见到详细报道。 本文 明浸蜡及石蜡包埋, 睾丸 5 连续切片; 连Λm 利用链霉菌抗生物素蛋白- 过氧化酶免疫组 续取三张切片, 第一张 的 免疫组 E GFR SP () 化 技术 结合糖原及多糖高碘酸- 雪夫 SP () 反应 反应, 观察 在小鼠睾丸生 化染色, 第二张 显色并苏木素复染, 第 PA S E GFR PA S 精周期内分布, 为进一步探讨 在精子 E GFR 三 张 行 的 免 疫 组 化 并 苏 木 素 复E GFR SP 发生的不同阶段可能的调节机制打下基础。 染。 113 免疫细胞化学方法 切 片 常 规 脱 蜡 经 各 级 酒 精 入 水, 0101 1 材料和方法 () ƒ磷酸缓冲液 洗 5 , 共 3 次。 m o lL PB Sm in 入 0103% 过氧化氢, 室温 25 , 洗。室m in PB S 111 试剂 表皮生长因子受体一抗, 免疫组化试剂 温 下 羊 血 清 封 闭 30 后 倾 去。 加 兔 抗m in 盒均购自 公司。碱性复红、盐酸、 San ta C ru z ?孵育 24 。加二抗, 室温 2 。加三 , 4E GFR hh偏重亚硫酸钠、高碘酸购自上海生物化学公 抗, 室温 2 。显色 5 , 水洗, 脱水, 透hDA B m in 明, 封固。 分别用 、羊血清代替一抗作阴 PB S ( )3 : 福建省卫生厅青年基金资助课题 9624 性对照。 ( 福建医科大学组织胚胎学教研室, 福建省生殖医学中心 福 114 糖原及多糖 反应PA S )州 350004 ( ) V, K 期精子聚集成簇, 精子细胞头部 段 试剂的配制 碱性复红 012 , 1 Sch iff’ s g ƒ盐酸 10 , 偏重亚硫酸钠 1 , 蒸馏 一侧相当于顶体区出现狭长、深染棕色反应 m o lL m lg (() )水 100 。切片脱蜡后入蒸馏水, 入 015% 高 区 图 6。 16 阶段 ?, 期少数成熟精子 ? m l 碘酸 10 , 蒸馏水洗, 经 试剂染色出现类似 15 阶段的阳性反应。未加一抗的对 m in Sch iff’ s 60 , 入亚硫酸液 3 次, 每次 1 , 蒸馏水 m in m in 照无阳性反应。 洗后苏木素复染并脱水、透明、封固。 3 讨 论 115 观察方法 观察第一、三张切片确证 在曲细 E GFR E GFR 初步定位于睾丸曲细精管上皮的 精管的细胞定位, 从第二张切片确定 E GFR 2, 3 部分生精细胞和体细胞, 但是 在 E GFR 阳性细胞所分布的曲细精管的生精周期的阶 曲细精管上皮的表达和生精周期的关系尚未 段。 阐明。 本 文 采 用 连 续 切 片, 取 一 张 切 片 作 反应和苏木素复染确定曲细精管所处 PA S 2 结 果的生精周期, 又取相邻的另一 张 切 片 作 SP 免疫组化观察 在曲细精管上皮的表 E GFR E GFR 分布于支持细胞的胞质内, 在核 达, 能揭示不同生精周期中曲细精管上皮的 分布规律。上方最为明显, 胞质呈浅棕色, 如火焰状。 小 E GFR 鼠生精周期可分 12 期, 支持细胞在各期均表 311 达 但以K, ? 期、?, X 期最为明显, E GFR E GFR 在支持细胞和管周细胞的分布 ( ()) 图 1。管周细胞反应阳性 图 2。曲细精管通过与靶细胞膜上的 结合E GF E GFR , K 期精原细胞、静止期精母细胞无阳性 I实现对靶器官的生理性调节作用。E GF 对生 反应。曲细精管?, ? 早期精原细胞、静止期 1, 4 精过程的作用已得到初步证实。本研究以 及细线期精母细胞位于曲细精管上皮基底 免疫组织化学方法显示在生精周期的不同阶 层, 其胞核呈阳性反应, 色深, 胞质阴性。X, 段支持细胞不同程度的表达 而且在, E GFR ? 期细线期及偶线期精母细胞胞核呈阳性反 应, 色浅, 胞质阴性。 I, K 期粗线期精母细 K, ? 期, ?, X 期表达最明显, 推测 E GFR胞无阳性反应, ?, ? 期少量粗线期精母细 ( 的表达与成熟精子释放入曲细精管腔内 K胞、X, ? 期多数偶线期精母细胞、粗线期精 ) ( ) , ? 期及精子开始变形 ? , X 期密切相 ( )母 细胞及双线期精母细胞 图 2, 3、 期终 ? 关。本研究还发现管周细胞也分布 因, E GFR 变期精母细胞和次级精母细胞均呈阳性反 可 直 接 调 节 管 周 细 胞 的 功 能。 应, 表现为每个阳性精母细胞的细胞核旁的 此 E GF 5 胞质内出现一个粗大的阳性颗粒区。小鼠精 发现曲细精管损伤时支持细胞和 Fo re st ra ( ) 子变形经过 16 阶段。 1, 4 阶段 I, K 期6 管周细胞的 表达增强。证 E GFR M u llan ey 精子细胞出现阳性反应, 特点是每个阳性精 实在大鼠睾丸发育过程中, 基因在管E GFR 子细胞胞核旁的胞质内出现一个细小的阳性 周细胞表达非常显著, 在支持细胞、粗线期精(())颗粒区 图 1, 2, 4。5, 8 阶段 V, ? 期、10 母细胞、圆形精子细胞呈低水平表达, 本研究 () , 14 阶段 X, ? 期精子细胞无阳性反应。 结果与之一致。 ( ) 9 阶段 ? 期精子细 胞 在 顶 体 去 区 出 现 点 312 在精子发生过程的分布 E GFR 小鼠生()状、短杆状或月牙形阳性反应带 图 5。15 阶 精周期可分为 12 期; 精子变形经 过 16 阶段。在睾丸中的精子发生过程分为 3 ( ) 个阶段: 1精原细胞有丝分裂、增殖形成初 () 级精母细胞; 2初级精母细胞两次减数分裂 , 如单抗或多抗; 抗体的特异性和敏感性不同 () 形成圆形精子细胞; 3圆形精子细胞变形为 ( ) 2抗体制备时选择 E GFR 的不同区域, 如7 成熟精子。报道转铁蛋白受体和卵 L in de r ( ) 胞内区或胞外区; 3和 结合形 E GFR E GF 泡刺激素受体的 含量与生精周期密 m RN A 成的复合物在细胞内经过内质网、高尔基体、 切相关。本研究发现在?, ? 早期精原细胞、 溶酶体系统加工, 而不同功能细胞加工过程 静止期精母细胞分布 推测 通过, E GFR E GF 不一致, 使不同细胞 的表达有各自的 E GFR 参与调节精原细胞有丝分裂形成初级 E GFR () () 特点; 4动物种属的差异; 5不同生精周期 精母细胞。 不同阶段初级精母细胞包括静止 曲细精管上皮的支持细胞处于不同功能状 期、细线期、偶线期、粗线期、双线期、终变期态。因此, 不同生精周期的支持细胞不同程度 地表达 。E GFR 以及次级精母细胞均表达 E GFR ; 不同阶段 ()图 1, 6 见封二 通 过 精 子 细 胞 均 表 达 E GFR , 推 测 E GF E GFR 可直接调节精子生成的两次减数分裂 参考文献 和精子形成过程。文献报道体内的 水平 E GF 1 , , T su t sum i O Ku rach i H O k a T A p h y sio lo g ica l ro le o f 1 下降后, 睾丸内的各级生精细胞减少, 这进一 1ep ide rm a l g row th fac to r in m a le rep ro duc t ive func t io n 1, 4 步证实了本文观点。粗线期精母细胞分布 , 1986; 233: 975S cience (在I, X 期, 但早期粗线期精母细胞 I, K 许增禄, 刘秉慈, 任 庆 1 表皮生长因子受体在小鼠睾 2 丸内免疫组织化学定位 1 中国科学院院报, 1993; 15: ) 期无 分布, 中、晚期的粗线期精母细 E GFR 330 ( ) 胞 ?, X 期分布 提示 的表, E GFR E GFR , , 1 S tubb s SC H a rg reave B H ab ib F K L o ca liza t io n and 3 达和粗线期精母细胞的成熟和进一步演变有ch a rac te r iza t io n o f E GFR o n h um an te st icu la r t issue by 1 b io ch em ica l and imm uno h isto ch em ica l tech n ique sJ 关。 , 1990; 125: 485E nd ocr inol 本研究表明, 细线期精母细胞胞核分布 安 劬, 李 曼, 温 冰 1 表皮生长因子睾丸生精过程 而 粗 线 期、双 线 期 与 终 变 期 精 母 细 , E GFR 4 中的调节作用 1 男科学杂志, 1991; 5: 193 胞, 次级精母细胞和 1, 4 阶段的精子细胞, , , , 1 Fo re sta C C a re t to A V a ro t t to A e t a lEp ide rm a l 集中分布在核膜旁一个区域, 类似于 E GFR 5 ( ) g row th fac to r recep to r s E GFR lo ca liza t io n in h um an 文献报道 分布在粗线期精母细胞的高 E GF 8 1 , 1991; 27: 17te st isA rch iv es A nd rol 尔基体区。有学者发现 与核内染色 E GFR , 1 2M u llaney B Sk inne r M K T ran sfo rm ing g row th fac to r 体相连, 可通过直接诱导特殊核蛋白 E GFR 6 Αand ep ide rm a l g row th fac to r recep to r gene exp re ssio n 的磷酸化而发挥其生理功能, 在生精 E GFR and ac t io n du r ing p ube r ta l deve lopm en t o f th e 细胞内发生受体内化和核转位可能是质膜信 1 , 1992; 6: 2103sem in ife ro u s tubu leM olecu l E nd ocr inol 9 号和基因活化间的关键环节。 椭圆形的 9 L inde r CC , H eck e r t L L , Ro be r t s KP , e t a l1 E xp re ssio n 阶段精子细胞的顶端, 即将来形成顶体的区 7 o f recep to r s du r ing th e cyc le o f th e sem in ife ro u s 域分布 头部狭长的 15 阶段精子细胞 ; E GFR 1 , 1992; 602: 313ep ith e lium A nn N Y A cad S ci 一 侧, 即 顶 体 所 在 区 域 分 布 推 测 , E GFR R adh ak r ish nan B , O k e BO , P ap adopo u lo s B , e t a l1 与精子顶体形成有关。E GFR 8 C h a rac te r iza t io n o f ep ide rm a l g row th fac to r in m o u se 313 分布差异的影响因素 E GFR 本研究结1 , 1992; 131: 3091te st isE nd ocr inol 2, 3 , , , 1 H o lt SJ A lexande r B Inm an CB e t a lEp ide rm a l果与一些报道有所不同, 其 9 g row th fac to r induced ty ro sine p ho sp ho ry la t io n o f () 原因可能与下列因素有关: 1实验者采用的nuc lea r p ro te in s a sso c ia ted w t ith t ran slo ca t io n o f 1ep ide rm a l g row th fac to r recep to r in to th e nuc leu s B ioch em P h a rm acol, 1994; 47: 117 D is t r ib u t io n o f Ep id e rm a l G row th F a c to r R e c e p to r d u r ing the C y c le o f the S em in ife ro us Ep ithe lium in M ic e , , , He W e im in C he n Yiq ua n W a ng S ie e t a l (, ,D e p a rtm e n t o f H is to lo g y a nd Em b ryo lo g y F u jia n M e d ic a l U n ive rs ity )350004 , , F u jia n P ro v inc e R e p ro d uc t ive M e d ic ine C e n te rF uzho u () O b je c t iv e T o in ve st iga te th e d ist r ib u t io n o f ep ide rm a l g row th fac to r recep to r E GFR du r in g th e cyc le o f sem in ife ro u s ep ith e lium in o rde r to fu r th e r u n de r stan d it s sign if ican ce fo r 1 sp e rm a to gen e sisA f te r de te rm in in g th e sp ec if ic stage o f th e cyc le o f M e tho d s sem in ife ro u s ep ith e lium th ro u gh p e r io d ic ac id Sch iff’ s reac t io n , th e d ist r ib u t io n o f E GFR in sem in ife ro u s ep ith e lium w a s o b se rved b y st rep tav id in p e ro x ida se imm u no h isto ch em ica l 1 E GFR imm u no sta in in g m e tho dR e s u lts exp re ssed w ith in Se r to li ce lls an d p e r itu b u la r 1? , ? stage, E GFR imm u no sta in in g s w e re ce lls In sp e rm a to go n ia s an d lep to ten e s o f 1 lim ited to n u c leu se sIn each po sit ive p ach y ten e an d d ip lo ten e o f stage X, ? , d iak in e sis an d seco n da ry sp e rm a to cye o f stage ? an d stage 1, 4 ro u n d sp e rm a t ic o f stage I , K , a 1 In stage 9 an d stage 15 sp e rm a t id s o f g ran u la r imm u no sta in in g o ccu r red n ea r th e n u c leu s stage ? an d V , K , th e po sit ive imm u no sta in in g a rea loo k ed lik e g ran u le o r c re scen t in 1T h e d ist r ib u t io n o f E GFR is c lo se ly re la ted w ith th e cyc le o f C o nc lus io n ac ro som e s 1 sem in ife ro u s ep ith e lium an d sp e rm io gen e sis ; ; ;Ke y w o rd s te st isep ide rm a l g row th fac to r recep to rge rm ce ll Se r to li ce ll; m ice )( 27 收稿: 1999- 08-02 修回: 1999- 09- 谷胱甘肽 转移酶 在肾细胞癌的表达及临床意义S Π 11 1 2张 强陈梓甫陈文榜施作霖 () 目的 从细胞浆表达水平对谷胱甘肽 S 转移酶 ΠGST 2Π在肾细胞癌及正常肾组织中的表达 机制进行探讨, 以期为选择化疗提供参考, 获得更有效的化疗效果。 方法 应用免疫组化对肾癌及正常肾组织中 GST 2Π进行检测, 并结合临床分级、分型、分期探讨其临床及生理意义。 结 果 9613% 的正常组织及 4114% 癌组织有 GST 2Π表达, 前者表达强于后者, 表达强度与分级、分 型、分期无关。 结论 各型肾癌均来源于肾近曲小管上皮, 它继承了正常肾组织 2高表达的 GST Π ()特性, 发挥解毒作用而产生天然性多药耐药 。选择 2低表达的患者并且针对机M D R GST ΠM D R 制采用相应的化疗药物进行化疗将有助于提高化疗有效率。 关键词 肾细胞癌; 多药耐药; 谷胱甘肽 转移酶 ; 免疫组织化学S Π () , 且多为天然性耐药, 临床上对化疗极不 之一 原发性肾细胞癌 肾癌是最容易产生多 () 药 耐药 , 的肿瘤敏感, 有效率仅 7%, 10% , 对最敏感的长春 m u lt id ru g re sistan ceM D R 1 花碱有效率仅 25% , 这是影响预后的重要 ( ) 福建省立医院 福州 35000111 泌尿外科 21 病理科 因素, 在泌尿外科界是一个难题。 1996 年 7 ()何为民等: 小鼠生精周期表皮生长因子受体在睾丸曲细精管的分布 正文见第 369 页 ( ) ( ) ( )图 1 支持细胞呈 阳性反应?, 第 4 阶段精子细胞呈 阳性反应?: 阳性颗粒区, 法并苏木素复染× 400 E GFR E GFR SP ( ) ( ) 图 2 管周细胞呈 阳性反应 ?, 第 2 阶段精子细胞呈 阳性反应 ?: 阳性颗粒细小, 粗线期精母细胞呈 E GFR E GFR ( ) 阳性反应 ?: 阳性颗粒区粗大, × 400 E GFR ( ) ( )图 3 粗线期精母细胞呈 阳性反应 ?阳性颗粒区, 法并苏木素复染 × 1000E GFR SP ( ) ( )图 4 第 3 阶段精子细胞呈 阳性反应 ?阳性颗粒区, 法并苏木素复染 × 1000E GFR SP ( ) 图 5 第 9 阶段精子细胞呈 阳性反应 ?× 400E GFR ( ) 图 6 第 15 阶段精子细胞呈 阳性反应 ?× 400 E GFR 康明强等: 热疗肺癌癌性胸水及其机制的 ()正文见第 389 页 临床研究 图 2 热疗后胸膜癌组织 TU N EL 标记见散在的胞核呈亮黄 ( )色荧光的凋亡阳性细胞。 荧光显微镜× 100