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第七篇 --色谱保留时间漂移的故障排除 保留时间不重现有两种不同的情况:既保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化,而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区离开来对找到问题的原因往往很有辅助。如,保留时间的漂移往 而柱老化不可能引起保留时间的无法则波动。事实上,保留时往由柱老化引起; 间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化,如固定相流失(例如通过水解),色谱柱污染(由样品或流动相所致)等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下: 一色谱柱平衡 如果咱们视察到保存时间漂移,首先招考虑色谱柱是否已用流动相完整平衡。通常均衡需要10-20个柱体积的流动相,但如果在流动相中参加少量增加剂(如离子对试剂)则须要相称长的时间来平衡色谱柱。 流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能渐渐富集到色谱柱上,从而造成保留时间的漂移。应注意:水是很容易污染的流动相成分。 二固定相稳定性 固定相的稳定性都是有限的,即便在推荐的PH规模内使用,固定相也会缓缓水解。例如,硅胶基质在pH4时水解稳定性最好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定;长链键合相比短链键合相稳定;烷基键合比拟氰基键合相稳定的多。 常常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其余硅胶基质键合相在水溶液环境中也能够发生水解,如氨基键合相等。 三色谱柱污染 保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器,它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是:流动相本身,流动相容器,连接管、泵、进样器和仪器密封垫,以及样品等。通常通过试验可判断污染的起源。 样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分,就可能是使保留时间漂移的潜在本源。这些来源通常是样品基质。如:配药中的赋形剂,生化样品(如血清)中的蛋白及类脂类化合物,食品样品中的淀粉,环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分存在较高的分子量,在此情况下,保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取(SPE)等样品前处理方法来去除样品基质的影响。 防止色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。相比之下,找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要艰苦的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂,但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的很多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。 使用保护柱是个异常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的措施。 四流动相组成 流动相组成的迟缓变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及轮回使用流动相等。 五疏水坍塌 当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用濒临100%的水为流动相时,有时会发生分离忽然损失及被分析物资保留显著降低或完全不保留的现象,这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相名义而致。抢救的方法实现用 含大批有机组分的流动相浸润固定相,再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期贮存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱(如WatersSymmetryShieldRP色谱柱)或非端基封口的色谱柱(如WatersResolve色谱柱)也可避免发生坍塌 第八篇 气相色谱品种很多,性能也各有差异。主要包括两个系统。即气路系统和电路系统。 气路系统主要有压力表、污染器、稳压阀、稳流阀、转子流量计、六通进样阀、进样器、色谱柱、检测器等;电子系统包括各用电部件的稳压电源、温控安装、放大线路、主动进样和收集装置、数据处理机和记录仪等电子器件。 要分析和判断色谱仪的故障所在,就必须要熟悉气相色谱的和蔼、电路这两大系统,特殊是形成这两个系统部件的构造、功能。色谱仪的故障是多种多样的,而且某一故障产生的原因也是多方面的,必须采用部分检查的方法,即排除法,才可能缩小故障的范围。对气路系统出的故障,不过乎是各种气体(特别是载气)有漏气的现象、气体不好、气体稳压稳流不好等等。 例如:基线若始终向下漂移,即"电平"值逐渐变小至负数,这极有可能是载气泄漏,那么就要查找各个接头部件是否有漏的现象,若不漏而基线仍漂移,则可能是电路系统的故障。色谱气路上的故障,分析工作者可以找出并排除,但要排除电路上的故障则并非易事,就需要分析工作者有一定的电子线路方面的常识,并且要弄明白主机接线图和各系统的电原理图(尤其是接线图)。在这些图上清楚的画出了掌握单元和被控对象间的关系,详细的表明了各接插件引线的编号和去向,按图去检查电路、找寻故障是非常便利的。 色谱电路系统的故障,BB霜一般是温度控制系统的故障和检测放大系统的故障,当然不排除供给各系统的电源的故障。温控系统(包括柱温、检测器温控、进样器温控)的主回路由可控硅和加热丝所组成,可控硅导通角的变化,使加热功率变化,而使温度变化(恒定或不恒定)。而控制可控硅导通角变化的是辅回路(或称控温电路),包括铂电阻(热敏元件)和线性集成电路等等。 由上所述可知,若是温控系统的缺点,则应首先要检查可控硅是否坏,加热丝是否坏(断或短路),铂电阻是否坏(断或短路)或是否接触不良。其次检查辅回路的其它电子部件。放大系统常见故障是离子讯号线受潮或断开、高阻开 即灵敏度抉择)受潮、集成运算放大器(如:AD515JH、OP07等)性能变差或坏关( 等等。 色谱故障的排除既要做到局部又要考虑到整体,有"果"必有"因",弄清线路的走向,逐步排除产生"果"(故障)的"因",把故障范围缩小。 例如:若涌现基线不停的抖动或基线噪音很大时,可先将放大器的讯号输入 或记线断开,观察基线情况,如果恢复正常,则说明故障不在放大器和处理机(录仪),而在气路部分或温度节制单元;反之,则说明故障发生在放大器、记录仪(或处理机)等单元上。这种部分排除的检查故障方法,在实际中是无比有用的。 [转载]4月13日博客直播专抓牛股 [原创]经*八门先容:气门、血门、虚门、实门、冷门、热门、风门、湿门 历史上的今天: 驱动人生替代式的人生2011-12-11
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