淫羊藿苷在大鼠体内的药代动力学

淫羊藿苷在大鼠体内的药代动力学 〃临床药 学〃淫羊藿苷在大鼠体内的药代动力学 1 1 ( )叶丽卡 陈济民刘四海 李国秀 沈阳 110003 解放军 202 医院药剂科 ; 沈阳 110015 沈阳药科大学药剂教研室 ( ) 摘要 目的 :研究淫羊藿制剂中淫羊藿苷 Ica在大鼠体内的吸收 、分布 、排泄 、生物利用度及蛋白结合率等药动学特性 。方 - 1 法 :淫羊藿苷在生物样品的浓度用高效液相色谱法测定 。结果 :淫羊藿注射液含 Ica 10 ,15 和 22mg1kg iv 给药 ,其药2时过程 - 1 ((() ) ) 符合二室开放模型特征 ,t分别为 170 ?75 . 1、168 ?41 . 7和 209 ?40 . 1min 。按含 Ica10 ,15mg1kg iv 后 ,其药2时过程 β1/ 2- 1 符合线性动力学 ,按含 Ica 22mg〃kg iv 后为非线性动力学 。大鼠灌胃及肝门静脉给药后 ,其药2时过程符合单室开放一级吸 - 1 收模型特征 。体内绝对生物利用度为 12 . 0 % ,肝门静脉注射的绝对生物利用度为 45 . 17 % 。按含 Ica 22mg1kg iv 后 ,结果 明服药 2 h 后药物可广泛分布于各组织中 ,主要集中在肺 、血浆中 ,心 、肝 、肾次之 ,脾和脑较少 。尿 、胆汁和粪的排泄实验表 明 :尿 、胆汁和粪 24 h 排泄量分别占给药量的 1 . 99 % ,0 . 066 %和 12 . 83 % 。Ica 的血浆蛋白结合率为 80 . 05 % 。结论 : 该研究 可为淫羊藿制剂内在质量评价和剂型改革提供一定科学依据 。 关键词 淫羊藿苷 ;药代动力学 ;生物利用度 ;分布 ;排泄 Pharmacokinet ics of icariin in rats ( ) ( ) ( ) ( Ye Lika Ye L K, Chen J imin Chen J M ,Liu Sihai Liu SH, et al PL A 202 hos pi t al p ha r m acy depa rt ment , )S heny an g 110003 ABSTRACT OBJECTIVE : To st udy t he absorp tio n , dist ributio n , excretio n , bioavailability and p rotein binding of icariin in Epi medi u m p reparatio n in rat s. METHODS :A HPL C asssy was used to determine t he icariin co ncent ratio ns in biological samples. RESUL TS :The co ncent ratio n2time p rofiles of icariin in rat s af ter iv of 10 ,15and 22mg/ kg were shown to fit a t wo2co mpart ment open model wit h half2lives of 170 ?75 . 1 ,168 ?41 . 7and 209 ?40 . 1 min ,respectively. At t he iv doses of 10 and 15 mg/ kg ,t he eliminatio n of icariin f ro m plasma was found to be in accord wit h linear kinetics , but when t he dosage was 22mg/ kg , a no n2linear kinetics was observed. The co ncent ratio n2time curves of icariin in rat s fited o ne2co mpart ment open model wit h first2order absorp tio n af ter oral administ ratio n and hepatic portal vein injectio n , respectively. The absolute availability was 12 . 02 % ,t he first pass effect of liver was 45 . 17 %. Two hours af ter oral administ ratio n of icaiin to normal rat s ,t he highest level of icariin was found in t he lung and plasma , while app reciable icariin was found in t he heart ,liver and kidney. The level of icariin in spleen and brain was very lower ,t he excreted amount f ro m urine ,faeces and bile was very small ,and t he accumulated amount for 24 h was o nly 1 . 99 % ,12 . 83 % and 0 . 066 % of t he administ ratio n dosage ,respectively. Plasma p rotein binding was about 80 . 05 %. CO NCL USIO N :This st udy will p rovide a scientific basis for t he qualit y evaluatio n and dosage formsrefo modificatio n of icariin. KEY WO RDS icariin ,p harmaco kinetics ,bioavailability ,dist ributio n ,excretio n ( ) ,制订科学 、合理的给药提供理论依据 。利用度 淫 羊 藿 苷 icariin , Ica 是 来 源 于 小 檗 科 () ( ) Berberidaceae淫羊藿属 Epi m di u m 植物的主要 1 材料与方法 有效成分 , 其化学 结 构 属 黄 酮 类 化 合 物 , 据 文 献 报 1 . 1 药品 1 ,2 ( 道以淫羊藿 苷 为 主 要 成 分 的 制 剂 对 心 脑 血 管 Ica 对照品 沈阳大学植化教研室 ,纯度在 99 % 3 4 ) 系统 、骨代 谢、免 疫 系 统及 性 机 能 具 有 广 泛 的 以上。淫羊藿注射液 、淫羊藿灌胃剂内含 Ica 分别 - 1 ( ) 药理功效 。然而 ,该药的药代动力学研究尚未见报为 5 ,18 . 87 mg〃ml 沈阳药科大学药剂教研室。 () 道 。本实验建立的 HPL C 法 ,对淫羊藿制剂中的主 内标物苯甲酸对照品 中国药品生物制品检定所。 要有效成分 Ica 在大鼠体内的吸收 、分布 、排泄 , 生 1 . 2 动物 ( ) ( 物利用度及蛋白结合率等药代动力学特性进行了定 Wistar 大鼠 , ??兼用 ,体重为 269 ?20g 沈 ) 量分析 ,可望在不久的将来利用药剂学新技术 、新辅 阳第一制药厂动物饲养中心。 5 料研制出疗效确切的淫羊藿制剂 ,提高药物的生物1 . 3 大鼠颈静脉及肝门静脉持久性插管术 () 颈静脉插管 将颈部一侧锁骨上方皮肤做1 . 3 . 1 20?75?5,流速 1 . 0 ml ,紫外检测波长为 270 nm , 2 cm 纵切口 ,暴露并分离颈静脉 ,用常规插管法插 色谱柱柱温 30 ?, 检测灵敏度 0 . 02 AU FS , 纸速 2 - 1 ( 入 18 cm 长内含生理盐水的硅胶管 医用管 ,内径 mm〃min 。 ) 0 . 02 mm ,外径 0 . 037 mm , U SA,导管经皮下从颈 药代动力学参数计算 ,使用中国药理学会编制 背部引出并固定 ,检查血流通畅后 ,缝合伤口 。 的 3 P87 药代动力学程序 。 1 . 3 . 2 肝门静脉插管 自剑突下延腹中线做切口 ,2 结 果 暴露出肝门静脉和幽门静脉的连接部位 ,小心剥离 2 . 1 Ica 在生物样品中的标准曲线及回收率幽门静脉的周围组织 , 游 离 约 0 . 5 cm 的 幽 门 静 脉 以 Ica 与内标峰高比为纵坐标 , Ica 浓度为横坐 段 ,常规法插入 15cm 的内含生理盐水的硅胶管 ,经 标绘制标准曲线作线性回归 ,血浆中的标准曲线为 μ( ) 皮下从背部中央引出并固定 ,检查血流通畅后 ,缝合 y = 0 . 122 x20 . 0099 , n = 6,线性范围 1 , 128g〃 - 1 21 μ( ml ,最低检测浓度 0 . 5 g〃ml。选 4 个浓度 2 ,伤口 。 - 1 21 ( μ) ) 大鼠在戊 巴 比 妥 钠 40 mg 〃kg , ip 麻 醉 下 进 8 ,32 ,128g〃ml,测得日内及日间 R S D %均小于 行上述手术 ,手术全过程为无菌操作 ,术后大鼠单笼 6 % ,平均回收率为 101 . 30 % 。其它生物样品的线 ( ) 饲养 ,72 h 后供实验用 。每次从管内给药或取血后 ,性关 系 良 好 r = 0 . 995 9 , 0 . 999 9 , 回 收 率 在 - 1 将管内充满 100u〃ml 肝素 ,以防血凝 。95 . 26 %,99 . 36 % ,日内及日间 R S D %在2 . 01 %,1 . 4 大鼠不同途径给药的药代动力学交叉实验安 7 . 08 %之间 。 排 2 . 2 血浆蛋白结合率 取 5 只术后备用大鼠 , ??兼用 ,交叉做灌胃 、取 iv 淫羊藿注射液后不同时间的血浆 ,采用超 肝门静脉和颈静脉给予淫羊藿灌胃液和淫羊藿注射 滤法 ,将大鼠血浆超滤 1 h ,分别取超滤前后血浆 0 . 1 液实验 ,并将灌胃后大鼠分别置入自制的代谢笼中 , ml ,按上述方法提取测定 Ica 浓度 ,结果表明 , Ica 血 - 1 收集 24 h 的尿和粪 。另取 5 只颈静脉插管的术后备 μ药浓度在 21 . 54,64 . 55g〃ml 内 , Ica 的血浆蛋白 用大鼠 , ??兼有 ,交叉静脉注射 3 种不同剂量淫羊 ( ) 结合率为 76 . 77 %,84 . 68 % n = 5。 藿注射液 。以上交叉实验间隔均为 7d 。 2 . 3 Ica iv 后药2时曲线及动力学参数 采用颈静脉 1 . 5 生物样品的制备插管术的大鼠 5 只 ,按含 Ica10 ,15 , 21 1 . 5 . 1 血浆 取血浆样品 0 . 1 ml 置 10 ml 离心管 22 mg〃kgiv 给 药 , 于 给 药 后 5 , 15 , 20 , 25 , 30 , 40 , (中 ,加入 3 . 5 ml 乙酸乙酯 ,振荡 3 min ,离心 2000 × 60 ,80 , 120 , 180 , 240 , 300 min 各 取 颈 静 脉 血 0 . 25 ) g ,5 min,移取上清液 ,于 50 ?水浴 N吹干 ,残渣加 ml ,离心后取血浆 0 . 1 ml ,按前述方法测定 ,结果 Ica 2 - 1在大鼠体内药动学行为符合二室开放模型 ,其主要 μμμ 入 40 g〃ml 内标液 100l ,振荡后进样 100l 。 药动学参数见表 1 ,拟合曲线见图 1 。 1 . 5 . 2 组织样品 按规定时间处死大鼠 ,取心 、肝 、 表 1 大鼠 iv 药物后 Ica 的药动学参数表 . n = 5 , ?x ?s 脾 、肺 、肾和脑组织 ,用组织匀浆器制成生理盐水匀 - 1- 1- 1 剂量 10/ mg〃kg 15/ mg〃kg 22/ mg〃kg 浆 ,使每 1 ml 含 0 . 4g 组织 ,取此匀浆 0 . 2 ml ,按血浆21μA/g〃ml 21 . 34 ?3 . 32 ?12 . 24 ? 21 . 88 43 . 71 81. 35 21α / min 0. 0895 ?0 . 03340 . 105 ?0 . 02070 . 0885 ?0 . 0212 样品处理后进样分析 。21 μ 3 . 51 ?1 . 34B/g〃ml9 . 85 ?2 . 3020 . 37 ?4 . 80 1 . 5 . 3 粪 、尿和胆汁 大鼠粪便样品风干称重后 ,21β / min 0. 0047 ?0 . 00190 . 00467 ?0 . 0009 0 . 0034 ?0 . 0008 21 0. 465 ?0 . 198V c/ L 〃kg0 . 455 ?0 . 0267 ?0 . 0525 0 . 203 置乳钵内研成细末 ,用生理盐水稀释成 10 %的混悬 t / min t 1/ 2α1/ 8 . 54 ?2 . 756 . 86 ?1 . 588 . 20 ?1 . 88液 ,取该混悬液 0 . 5 ml 及 0 . 5 ml 尿样用乙酸乙酯 / min K21/ β2 170. 4 ?75 . 05167 . 9 ?41 . 67208. 5 ? 40 . 13- 1min 0. 0175 ?0 . 00890. 0229 ?0 . 00570 . 0204 ?0 . 0040 4 . 0 ml 提取 2 次 ,合并两次提取液 ,于 50 ?水浴 N2- 1K10/ min 0. 0246 ?0 . 00600. 0520 ?0 . 07150 . 0146 ?0 . 0040μ 吹干 , 加入甲醇 1 . 0 ml , 振荡后进样 10l 。取胆汁- 1K12/ min 0. 0522 ?0 . 02110. 0664 ?0 . 01910 . 0568 ?0 . 0150- 1μ A U C/g〃min〃ml 1055 ?262 . 91560 ?168 . 47147 ?1764 0 . 1 ml 按血浆样品处理 。- 1- 1 CL s/ l〃kg 〃min 0. 0111 ?0 . 00380. 0096 ?0 . 00120 . 0039 ?0 . 0022 1 . 6 仪器和色谱条件- 1 由表 1 可见 ,在 iv 含 Ica 10 , 15 mg〃kg 时 ,两 L C -6A 高 效 液 相 色 谱 仪 ,日本 岛 津 公 司 的 种剂量的 t , V d , CL 等重要动力学参数十分相 1/ 2β SPD - 6AV 可变波长紫外检测器 , SCL - 6A 系统控 ( ) 近 ,经统计 学 t 检 验 无 显 著 性 差 异 P > 0 . 05 , 且 制器 ,S IL - 6A 自动进样器 , C TO - 6A 恒温箱 , CRA U C 随剂量增加而成比例增加 ,说 明 在 此剂量范 μ( - 3A 数据处理机 。色谱柱为 Zo rbax ODS 10m ,- 1 围内 Ica 的消除为线性动力学 。但当 iv 22 mg〃kg ) 4 . 6 mm ×250 mm, 流 动 相 为 四 氢 呋 喃2水2冰 醋 酸 表 2 大鼠肝门静脉给药后 Ica 的动力学参数 . n = 5 , ?x ?s 药动学参数 数值 - 1μA /g〃ml 9. 44 ?2 . 58 - 1Ke / min 0 . 0187 ?0 . 0029- 1 Ka/ min t1/ 0. 249 ?0 . 1042 ka/ min t1/ 3. 16 ?1 . 192 Ke/ min t m 37 . 86 ?5 . 76/ min 12 . 04 ?3 . 07ax - 1μ c/g〃ml 6. 85 ?1 . 81 m ax - 1 μ 459. 6 ?99 . 18A U C/g〃min〃ml - 1- 1 0 . 0226 ?0 . 0049CL / Fs/ l〃kg 〃min - 1 1. 23 ?0 . 32V / Fc/ L〃kg 数据经计算机曲线拟合后 ,动力学行为符合开放性 单隔室一级吸收模型 。主要动力学参数见表 3 , 拟 合曲线见图 3 。 图 1 大鼠静 iv 不同剂量药物 Ica 的血药浓度2时间曲线 - 1 - 1 - 1 ( ) ( ) ( )n = 5 ; ?x ?s ;10mg〃kg ×;15mg〃kg ?;22mg〃kg ? ( ( ) ) 时 , t 延长 P < 0 . 05, CL 明显减少 P < 0 . 05, 1/ 2β- 1A U C 超比例增加 ,表明大剂量 22 mg〃kg iv 后 ,本 品在大鼠体内的消除为非线性动力学 。 2 . 4 Ica 肝门 iv 后药2时曲线及药动学参数 - 1 大鼠用 10 mg〃kg 剂量的淫羊藿注射液肝门 静脉 注 射 , 于 给 药 后 5 , 10 , 15 , 20 , 30 , 40 , 60 , 80 , 100 min 由 颈 静 脉 取 血 0 . 25 ml , 离 心 后 取 血 浆 0 . 1 ml ,按前述方 法 测 定 , 结 果 Ica 的 血 药 浓 度2时 间 数 图 3 大鼠 ig 给药后 Ica 的血药浓度时间曲线 . n = 5 , x ?s 据经计算机曲线拟合后 ,药代动力学行为符合开放 表 3 大鼠 ig 给药后 Ica 的动力学参数 . n = 5 , ?s?x 性单隔室一级吸收模型 。主要药代动力学参数见表 药动学参数 - 1 2 ,拟合曲线见图 2 。Ke / min 0 . 0138 ?0 . 0024 - 1 Ka/ min t1/ 0 . 0634 ?0 . 0137 2 ka/ min t1/ 11 . 43 ?2 . 872 Ke/ min t m 51 . 35 ?8 . 87/ min ax 31 . 27 ?2 . 86- 1μ c/g〃ml 10 . 84 ?2 . 38 m ax - 1 μ 1240 ?348 . 1A U C/g〃min〃ml 21- 1 0 . 0859 ?0 . 0242 CL / Fs/ l〃kg〃min 21 6 . 23 ?1 . 61V / Fc/ L〃kg 2 . 6 Ica 的绝对生物利用度和肝脏首过效应 大鼠经灌 胃 、肝 门 静 脉 及 颈 静 脉 交 叉 给 予 Ica 试验药物后 ,测得 Ica 血药浓度2时间数据采用统计 矩方法处理 ,计算 A U C 及 A U C/ D 。结果表明 ,淫 - 1 羊藿灌胃剂按含 Ica 100 mg〃kg ig 后 ,其绝对生物 图 2 大鼠肝门静脉给药后 Ica 的血药浓度2时间曲线 . n = ( ) 12 . 02 % n = 5 。肝 门 静 脉 iv 10 mg 〃 利用 度 为 5 , ?x ?s- 1( kg 淫羊藿注射剂的绝对生物利用度为 45 . 17 % n 2 . 5 Ica ig 后药2时曲线及药动学参数 取颈静脉插) = 5。( 管大鼠 5 只 ,经 12 h 空腹 禁食不 2 . 7 Ica 的组织分布21 ) 禁水后 ig 淫 羊 藿 灌 胃 剂 , 按 含 Ica 100 mg 〃kg给 取大鼠 数 只 , 随 机 分 为 6 组 , 以 含 Ica 22 mg 〃 药 ,于 给 药 后 5 , 10 , 20 , 30 , 40 , 60 , 80 , 120 , 180 , 21 kg尾静脉注射试验药物 ,分别于给药后 5 , 10 , 15 , 240 min 各于颈静脉取血 0 . 25 ml ,离心后取血浆 0 . 1 30 ,60 ,120 min 断头处死大鼠 ,每个时间点均取 4 只 ml ,按前述方法测定 。结果 Ica 血药浓度2时间 大鼠 ,取 各 脏 器 组 织 测 定 Ica 浓 度 , 结 果 如 图 4 所 - 1 示 。 100 mg〃kg ig 后 的 吸 收 情 况 较 好 , 吸 收 速 率 常 数 ( ( ) t 为 11 . 4 ?2 . 87 min , 药 峰 浓 度 c为 11 . 4 ?kamax - 1 - 1 μ( μ))2 . 87g〃ml , A U C 为 1240 ?310g〃min〃ml , 生物利用度仅为 12 . 0 % 。ig 剂量的增加并不能明 显的提高血药浓度 ,而且吸收情况较差 ,可能主要是 由于高剂量对 Ica 的溶解度显著降低 , 药物难以经 胃肠道粘膜吸收 。同时 ,造成 ig 后血药浓度端低的 原因可能与药物在体内分布广泛和消除迅速有关 。 - 1 3 . 4 大鼠肝门静脉注射 10 mg〃kg 淫羊藿注射液 后 ,约 55 %的 Ica 被肝脏首过效应代谢 ,因此提示药 图 4 大鼠静脉注射物后不同时间 Ica 在体内的分布 . n = 5 , 物有明显的肝脏首过效应 ,这也是造成生物利用度 ?s?x 不高的重要原因之一 。排泄实验表明 , 24 h 尿排泄 12肺 ;22心 ;32肝 ;42肾 ;52脾 ;62脑 ;72血浆 量占给药 量 的 1 . 99 % , 说 明 尿 中 排 泄 的 原 型 药 较 从图 4 可见 ,大鼠 iv 药物 2 h 后 ,各脏器的药量 随 iv 后时间的延长而下降 ,表明该药在生物体内不 少 ,24 h ig 后粪和胆汁的排泄量占给药量的 12 . 83 % 易蓄积 。Ica 在肺 、血浆的含量多 ,心 、肝 、肾次之 ,脾 和0 . 066 % ,揭示 Ica 在胃肠道吸收不够完全 。据文 6 和脑中最少 ,脑组织中可测得原形药物 ,说明本品可 献报道黄酮化合物在体内可经肝肠等器官分解 , 通过血脑屏障进入脑组织 。 Ica 是否真正存在代谢物形式消除尚需进一步研究 2 . 8 Ica 的排泄证实 。 取大鼠 5 只 ,用乙醚轻度麻醉行胆道插管术 ,清 本实验结果表明 Ica 在体内吸收快 ,消除迅速 , - 1醒后 ig 含 Ica 100 mg〃kg 淫羊藿灌胃剂 ,置入代谢 分布广泛 ,具有代谢饱和现象的特点 ,为今后如何利 笼中 ,收集 24 h 尿 、粪和胆汁 ,测定 Ica 含量 。结果 用药剂学新技术 ,新辅料研制新剂型 ,提高药物的生 - 1 表明 ,大鼠 ig 含 Ica 100 mg〃kg 药物的 24 h 尿 、粪 物利用度以及临床安全合理用药提供了有重要意义 和胆汁的排泄量分别占给药量的 1 . 99 % , 12 . 83 % 的实验依据 。 和 0 . 066 % 。 参考文献 3 讨 论 1 刘崇铭 , 于 庆 海 , 张 利 民. 淫 羊 藿 苷 对 心 脏 的 影 响. 中 草 药 , 3 . 1 本实验采用大鼠持久性颈静脉和肝门静脉插 ( ) 1982 ,13 9:31 . 王敏 , 刘崇铭 , 张宝凤. 淫羊藿苷扩张脑血管作用的研究. 沈阳 管术 ,具有以下几方面的优点 : ?可在动物清醒活动 2 ( ) 药学院学报 ,1991 ,8 4:272 . 正常状态下进行实验 ; ?每只动物可多次给药 ,定时李青南 , 吴铁 , 谢华 , 等. 淫羊藿提取液对去睾丸大鼠骨代谢的 3 ( ) 影响. 中草药 ,1993 ,34 12:637 . 准确连续多次取血 ; ?以交叉给药方法自身对照进 王天然 , 邢善田 , 周金黄. 淫羊藿总黄酮促进免疫功能的实验. 4 行实验 ,在一定程度上消除了动物个体差异对实验 中成药研究 ,1987 ,2 :27 . 孟娟如. 大白鼠颈静脉及肝门静脉持久性插管术及其应用. 药 结果的影响 。5 ( ) 学学报 ,1987 ,22 5:326 . - 13 . 2 大鼠经 iv 剂量为 10 mg〃kg 的淫羊藿注射液 屠世忠. 黄酮类化合物的生物活性. 国外医学〃药学分册 ,1979 , 6 4 :200 . 以后 ,血浆 c2t 曲线呈二室开放模型 ,分布相 t 为 α1/ 2( )收稿 :1997207229 () 8 . 54 ?2 . 75min ,提示 Ica 自中央室向周边室分布 () 迅速 ;消除相 t 为 170 ?75 . 1min ,提示 Ica 在体 β1/ 2 ( 内消除的较快 ; 从表 2 可见分布容积 V 为 0 . 465c - 1 ) ?0 . 198L 〃kg ,约为大鼠平均血容量的 20 倍 ,提 示该药在大鼠体内分布广泛 ,分布实验结果支持了 更正 - 1这种推测 。在 iv 10,15 mg〃kg 范围内 Ica 的消除 - 1 为线性动力学 ,而当 iv 大剂量 22 mg〃kg 时 , Ica 在 本刊 1998 年第 12 期 771 页医药产品与设备栏所载的 大鼠体内的消除为非线性动力学 。提示 Ica 在体内 ( ) “医用瓶塞隔离模分洗机 计算机控制”中的最后一段 “, 本 经肝脏代谢酶代谢 ,与肝药酶出现饱和有关 。 单位也生产计算机控制的全不锈钢的 L X G - F 系列分洗机 , 3 . 3 从实验中分别按剂量为 100 , 150 和 200 mg 〃 - 1”,应 为“本 单 位 也 生 产 非 计 算 机 控 制 的 全 不 锈 钢 的 kg 的淫羊藿灌胃液对大鼠进行 ig ,结果发现 ,仅以L X G - F 系列分洗机 ,”。