徐长卿提取物对损伤内皮细胞中乳酸脱氢酶、肿瘤坏死因子及白细胞介素—8活性的影响

徐长卿提取物对损伤内皮细胞中乳酸脱氢酶、肿瘤坏死因子及白细胞介素—8活性的影响 徐长卿提取物对损伤内皮细胞中乳酸脱氢酶、肿瘤坏死因子及白细胞介素—8活性的影响 [摘要] 目的 研究徐长卿提取物对损伤内皮细胞中炎症介质乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子(TNF-α)及白细胞介素-8(IL-8)活性的调节作用，探究徐长卿治疗动脉粥样硬化的作用机制。 方法 应用补体蛋白纯品于体外在人脐静脉内皮细胞表面组装亚溶破剂量的C5b-9，建立内皮损伤模型，分别建立提取物高、中、低剂量组及空白、模型及品对照组，分别用不同浓度的徐长卿提取物及丹皮酚标准品处理细胞，应用紫外分光光度法及ELISA试剂盒测定细胞培养上清液中LDH、TNF-α及IL-8浓度。 结果 提取物高剂量组LDH[(119.85?4.12)U/L]及IL-8[(33.65?2.48)ng/L]与模型对照组[(200.49?3.31)U/L，(40.98?0.60)ng/L]比较，差异有高度统计学意义(P 0.05)。丹皮酚标准品对照组与实验组结果基本一致，其中中剂量组对LDH的调节作用优于高剂量组。 3 讨论 早期研究已经证实，徐长卿药材中的主要成分为丹皮酚，占药材总量的1%左右[8-9]。前期实验研究得出50%乙醇提取可最大限度得到有效成分。赵霞等[10]通过研究丹皮酚对高脂血症大鼠的胆固醇、三酰甘油等血象指标的调节作用，得知丹皮酚可调节主动脉组织中脂质过氧化反应的发生，改善炎症细胞因子的分泌;有研究指出，丹皮酚能够抑制细胞内氧自由基的产生[11]，这可能对炎症环节产生影响;戴敏等[12]发现，丹皮酚可降低动脉粥样硬化家兔血清中TNF-α含量，抑制兔血管平滑肌细胞的增殖;周晓慧等[13]指出，丹皮酚可抑制NF-κB信号通路，从而介导黏性分子的表达。本实验以人体血管组织细胞人脐静脉内皮细胞作为实验载体，建立内皮细胞损伤模型，药物干预治疗后发现，徐长卿药材提取物可显著降低炎症因子LDH、TNF-α及IL-8的活性，进而修复内皮细胞损伤，以达到治疗动脉粥样硬化的目的。实验中设立丹皮酚标准品对照组，得出了与实验组一致的结果，进一步证实了发挥主要治疗作用的有效成分即为丹皮酚。 内皮细胞损伤发生后，可产生多种炎症因子，常见的有LDH、TNF-α、IL-8等，这些炎症因子可导致血管功能紊乱，阻断局部血流供应，使组织缺血缺氧坏死，进而加重内皮细胞的损伤程度[14-16]。徐长卿中的主要有效成分丹皮酚可能干预这些炎症因子的受体表达，以降低其活性，因此今后可从分子水平对该类基因的表达进行更深层次的研究。 [参考文献] [1] 王显.有关冠心病诊疗及研究的思考——动脉粥样硬化“络风内动”假说与实践[J].中国中西医结合杂志，2011，31(3):310-312. [2] 谢予朋，王显，孙晓迪，等.络衡方对高脂血大鼠血液流变学的实验研究[J].解放军药学学报，2012，28(6):495-498. [3] Ruth DL，Christopher LJ，Paul BM，et al. The membrane attack complex of complement drives the progression of athero sclerosis in apolipoprotein E knockout mice [J]. Mol Immunol，2010，47(5):1098-1105. [4] Hadders MA，Bubeck D，Roversi P，et al. Assembly and regulation of the membrane attack complex based on structures of C5b6 and sC5b9 [J]. Cell Rep，2012，1(3):200-207. [5] Plumb ME， Sodetz JM. An indel within the C8α subunit of human complement C8 mediates intracellular binding of C8γ and formation of C8α-γ [J]. Biochemistry，2000，39(42):13078-13083. [6] Chen Y，Zhang J，Guo G，et al. Induced B7-H1 expression on human renal tubular epithelial cells by the sublytic terminal complement complex C5b-9 [J]. Mol Immunol，2009，46(3):375-383. [7] 吴佩泽，杨明会，杨雪梅.树突状细胞的补体攻膜复合物C5b-9模型的建立[J].中国现代医药杂志，2008，10(3):19-21. [8] 赵丽萍.徐长卿研究进展[J].中国药业，2011，20(2):79-80. [9] 黄月纯.徐长卿不同药用部位的丹皮酚含量测定及挥发油成分分析[J].广东药学， 2002，12(1):19-20. [10] 赵霞，徐晓俊，李博，等.丹皮酚对实验性高脂血症大鼠的保护作用[J].中药材， 2010，33(8):1312-1314. [11] 刘雁丽，韦柳成，沈振国，等.丹皮酚的药理作用、提取及含量测定方法研究进 展[J].安徽医药，2011，15(7):896-899. [12] 戴敏，李后开.丹皮酚对动脉粥样硬化家兔TNF-α含量及其诱导的血管平滑肌细 胞增殖的影响[J].中国中医药科技，2007，14(1):31-32. [13] 周晓慧，牛成伟，曹凯，等.丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路下调高脂血清诱导 的人脐静脉内皮细胞黏附分子的表达[J].中国病理生理杂志，2011，27(2):249-253. [14] Schneiderman J， Schaefer K， Kolodgie FD， et al. Leptin locally synthesized in carotid atherosclerotic plaques could be associated with lesion instability and cerebral emboli [J]. J Am Heart Assoc，2012，1(5):e001727. [15] Papadopoulou C， Corrigall V， Taylor PR， et al. The role of the chemokines MCP-1， GRO-α， IL-8 and their receptors in the adhesion of monocytic cells to human atherosclerotic plaques [J]. Cytokine，2008，43(2):181-186. [16] 杨承英.补体攻膜复合物C5b-9对人外周血单核细胞来源树突状细胞分化成熟及 免疫学功能的影响[D].重庆:第三军医大学，2007. (收稿日期:2013-06-27 本文编辑:卫 轲)