HPLC法测定桂蒲肾清片中胆红素的含量

HPLC法测定桂蒲肾清片中胆红素的含量 第9卷第4期 2007年7月 辽宁中医药大掌 JOURNALOFLIAONINGUNIVERSITYOFTCM Vo1.9No.4 Ju1..2007 HPLC法测定桂蒲肾清片中胆红素的含量 邓波,茹波',段艳杰',沙延淳 (1.辽宁省医药工业研究院,辽宁沈阳110015;2.沈阳泰乐康医药研究所,辽宁沈阳 110015) 摘要:目的:研究桂蒲肾清片的含量测定.方法:采用高效液相色谱法,进行该制剂的 有效成分胆红素的含量 测定研究.结果:平均回收率98.93%,RSD=I.11%.结论:HPLC法测定胆红素含量简 便快捷,精密度,重现性均良好, 可以作为质量控制指标. 关键词:桂蒲肾清片;胆红素;含量测定;高效液相色谱法 中图分类号:R284.1文献标识码:B文章编号:1673—842X(2007)04-0157—02 DeterminetheContentofBilirubininGuipuShenqingTabletbyHPLC DENGBo,RUBo,DUANYan—fie,SHAYan-chun (1.LiaoningProvincePharmacyIndustryAcademe,Shengyangl11oo15,Liaoning,China; 2.TailekangPharmacyAcademy,Shenyangl10ol5,Liaoning,China) Abstract:0五 ective:T0studythecontentdeterminationmethodologyofGuiPushenqingtablet. Methods:T0studvthecontentdeterminationofbilirubininGuiPushenqingtabletbyHPLC. Results:The recOVcrywas98.93%.RSDwas1.11%.Conclusion:Themethodissimple,quickly,accurac y,andthe reproductionqualityarewel1.Themethodcanbeusedas?1equalitycontroltarget. Keywords:guipuhenqingtablet;bilirubin;contentdetermination;HPLC 桂蒲肾清片为桂蒲肾清胶囊的剂型改变,具有 清热利湿解毒,化瘀通淋止痛之功效,主要用于治疗 湿热下注,毒瘀互阻所致尿频,尿急,尿痛,尿血,腰 痛乏力等症.为控制中药质量,本文建立了测定桂 蒲肾清片中有效成分胆红素的高效液相色谱法,结 果如下. 1仪器与试剂 日本岛津Lc一1OAT高效液相色谱仪,LC— IOAVP泵,SPD—IOAV器,浙N2000色谱工作 站.HU3120B超声提取器. 胆红素对照品购自中国药品生物制品检定所; 桂蒲肾清片由沈阳绿洲制药有限责任公司提供;甲 醇,四氢呋喃为色谱纯,其它试剂为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:DiarrlOrlSilTMC】85In(200mmx 4.6mm)色谱柱;流动相:甲醇一四氢呋喃一0.5%醋酸 (8O:1O:1O);流速:1.Omldmin;检测波长:450nm.在 此条件下,理论板数应不低于2500. 2.2溶液制备及测定对照品溶液的制备:取胆 红素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每lmL含 30p~g的溶液(避光),即得. 供试品溶液的制备:取本品20片,精密称定,研 细,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入氯 仿25mL,密塞,称定重量,超声处理15min,放冷,再 称定重量,用氯仿补足减失的重量,摇匀,滤过,取滤 液(避光),即得. 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶 液各101~L,注入液相色谱仪,测定,即得. 2.3线性关系的考察精密称取胆红素对照品 6.15rag,加氯仿制成每1mL含30.751~g的溶液(避 光),精密吸取2,4,6,8,101~L分别注入液相色谱仪 中,测定色谱峰面积,以进样量为横座标,色谱峰面 积为纵座标,绘制曲线,经线性回归,回归方程 为:Y:2631438X一1247,r=O.9998,结果明,胆红素 进样量在0.0615,0.3075~g范围内呈良好的线性关 系. 2.4精密度试验精密吸取新配制的同一供试品 溶液,连续进样6次,测定胆红素色谱峰面积,得 RSD为1.56%. 2.5稳定性试验精密吸取新配制的供试品溶液, 每隔2h进样1次,共测定5次,测定胆红素色谱峰 面积,RSD:2.23%;再精密吸取新配制的供试品溶 液,每隔1h进样1次,共测定5次,测定胆红素色谱 峰面积,RSD:1.45%.说明供试品溶液含量在4h 内稳定. 2.6重复性试验考察取本品5份,按供试品溶液 的制备方法处理,测定结果,其胆红素平均含量为 0.093mg/片,RSD值为0.57%. 2.7加样回收率试验取已知含量(0.0930m~片) 的本品9.2067g,精密称定,加氯仿制成含胆红素 0.2142mg/mL的溶液(避光),精密量取lmL各5份分 别与对照品贮备液(0.2166mg/mL)各1mL混匀,置 25mL棕色量瓶中,依法测定,测定结果,见表1. 表1回收率试验测定结果 2.8样品的测定按上述的制备方法及色谱条件 共对3批样品进行胆红素含量测定,胆红索的含量 分别为:0.0927,0.0906,0.0915mg/片. 收稿日期:2007—02—29 作者简介:邓波(1965一),男,辽宁沈阳人,高级工程师,学士,主要从事中药及天然药物的药物分析研究. 第9卷第4期 2007年7月 辽宁中医药大掌掌报 JOURNALOFLIA0NDGU~TCERSITYOFTCM V0L9N0.4 Jll1..2007 HPLC法测定复方一支蒿胶囊中靛玉红的含量 桑育黎'.郝延军.杨松松' (1.辽宁中医药大学,辽宁沈阳110032;2.辽宁省食品药品检验所,辽宁沈阳110023) 摘要:目的:建立HPLC法测定复方一支蒿胶囊中靛玉红的含量的方法.方法:色谱柱为迪马C.8(4.6mm× 200mm).流动相:甲醇一水(75:25),流速:1.0ml/min,检测波长:289nm.结果:靛玉红进样量在0.2055~8.22g范 国内呈良好的线性关系.平均回收率=97.55%,P,.SD=I.24%.结论:该法简便准确,重现性好,可作为复方一支蒿胶 囊质量控制的依据之一. 关键词:靛玉红;复方一支蒿胶囊;含量测定 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1673—842X(2007)04—0158一O1 复方一支蒿胶囊由一枝蒿,板蓝根,大青叶3味 中药组成,具有解表祛风,凉血解毒的功效.用于邪 毒所致的感冒发烧,咽喉肿痛,病毒性感冒见上述证 候者.为控制产品质量,保证疗效,本研究建立了大 青叶,板蓝根中靛玉红的含量测定方法.为制剂质 量评价提供依据. 1仪器与试药 日本岛津10A高效液相色谱仪;超声波处理 器.靛玉红对照品(供含量测定用)由中国药品生 物制品检定所提供(批号:717—200204),经液相色 谱法用归一法测定,纯度在98%以上.试剂:甲醇 为色谱纯,其余试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为迪马c8(4.6mm~200mm), 流动相:甲醇一水(75:25),流速:1.0mL/min,检测波 长:289nm. 2.2对照品溶液的制备精密称取靛玉红对照品 10.275mg,置25mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至 刻度,摇匀,(CI=0.41lOmg/mL).精密量取5mL,置 10mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成 1mL含0.2055mg的溶液(C2=0.2055mg/mL). 2.3供试品溶液制备取本品内容物,研细,取约 1g,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷,浸泡 12h,加热回流提取至无色.回收溶剂至千,残渣加 甲醇使溶解并转移至50mL量瓶中,并稀释至刻度, 摇匀,滤过,取续滤液,即得. 2:4阴性干扰试验取除去板蓝根,大青叶以外的 其它药材,按样品制备方法制成阴性液.精密吸取 供试品溶液,阴性液,对照品溶液各lOlL,注入液相 色谱仪中,绘制液相色谱图,由色谱图提示,在对照 品色谱相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时 间的色谱峰,阴性液在此峰位无吸收,对本品中靛玉 红含量测定无干扰,方法专属性良好. 2.5线性范围考察分别精密吸取上述对照品溶 液C2:1.0…5010.0,20.0L,CI:15,20L溶液,注入 液相色谱仪中,测定色谱蜂面积.以进样量为横坐 标,色谱面积为纵坐标,绘制标准曲线.回归方程为 Y=427823.8X一5722,r=0.99991.测定结果显示,靛 玉红进样量在0.2055,8.22g范围内呈良好的线性 关系. 2.6稳定性试验考察按供试液制备方法处理样 品,分别在配制后0,2…468h,依法测定,结果表 明,供试品溶液在8h内稳定,RSD(%)=1.21. 2.7精密度试验考察精密吸取供试品溶液 10L,连续进样5次,分别测得色谱蜂面积,RSD (%)=1.37. 2.8重复性试验考察取5份样品,分别按供试液 制备方法操作,测定,平均含量=5.5356(mg/g), RSD(%)=1.32. 2.9回收率试验考察取样品(含量为5.5356m~g) 约0.5g,精密称定,分别精密加入靛玉红对照品溶液 (0.41lmg/mL)5mL,按供试品溶液的制备方法操作, 测定峰面积,平均回收率=97.55%,RSD=1.24%. 2.10样品含量测定分别取3个批号样品,按2.3 供试品溶液制备方法操作,分别精密吸取供试品溶 液各lOlL,注入液相色谱仪中,测定.结果3批样品 中靛玉红含量分别为5.4966,5.5063,5.4862(mg/g). 3讨论 靛玉红易溶于氯仿等有机溶剂,略溶于乙醇, 甲醇.本实验采用氯仿溶液作为提取溶媒,既可将 提取完全.本实验采用超声,回流等方法进行了摸 索试验,结果超声30min,回流15min提取不完全,回 流30min时测定的含量结果较高,因此提取方法选 回流30min.? 3讨论 原桂蒲肾清胶囊中采用薄层扫描法测定人212 牛黄中胆酸的含量,由于该方法精密度,重现性差. 因此笔者建立高效液相色谱法,对人工牛黄中胆红 素进行含量测定.实验证明,HPLC法简便快捷,精 密度,重现性均良好,可以作为质控指标.在实验中 发现胆红素在酸性条件下极不稳定,易降解,且不易 溶于甲醇,因此选用氯仿作为胆红素对照品和样品 的溶剂.因胆红素光不稳定,又由稳定性试验,配制 对照品和供试品溶液应现用现配,立即避光.根据 2.8中测定结果,确定本品每片含人工牛黄以胆红素 (c33H36N406)计,不得少于0.080mg.? 收稿日期:2007-02—15 作者简介:桑育黎(1973一),女,辽宁沈阳人,讲师,辽宁中医药大学2o04级博士研究 生,研究方向:中药活性成分提取与分离. 孽