热板法镇痛实验

热板法镇痛实验 2009~2010学年 《生理科学实验》实验报告 热板法镇痛实验 [摘要] 目的 掌握镇痛药的实验法。观察麻醉性镇痛药度冷丁(Dolantin)和非麻醉性镇痛药罗通定(Rotundine)的镇痛效应。 将小鼠置于一定温度的热板上，热刺激小鼠足部产生痛反应，即舔足反应。以小鼠出现舔足的时间作用为痛反应指标，判断药物是否具有镇痛作用。结果 比较不同时间度冷丁、罗通定和对照组的痛阈提高百分率。度冷丁组、罗通定组、对照组的小鼠在注射药物前的痛阈值比较，没有显著性差异(p>0.05);15min时，度冷丁组的小鼠的痛阈提高百分率为163.1%,痛阈值为47?14.39 s，罗通定组的小鼠的痛阈提高百分率为100%，痛阈值为34?12.47s，两者的痛阈值比较有显著性差异(p<0.05);30min时，度冷丁组的小鼠的痛阈提高百分率为33.1%，痛阈值为24?9.72 s，罗通定组的小鼠的痛阈提高百分率为93.8%，痛阈值为38?15.00 s，两者痛阈值比较有显著性差异(p<0.05),此时是罗通定的痛阈提高百分率较大;30min时，度冷丁组的小鼠的痛阈提高百分率为22.5%，痛阈值为22?13.06 s，罗通定组的小鼠的痛阈提高百分率为70.2%，痛阈值为35?17.64 s，两者的痛阈值比较没有显著性差异(p<0.05)。 结论 注射度冷丁或罗通定后痛阈值均增加。 1.材料和方法 1.1 动物:20~25克左右雌性小鼠 1.2 器材:数控超级恒温槽，金属罐 1.3 药品:0.25%度冷丁、0.25%罗通定、生理盐水 1.4 热板温度:调节温度水浴恒定于55?0.1ºC 1.5 动物筛选:筛选合格小鼠3只，30秒内有舔后足反应者，并各测定正常痛 阈值一次，对逃避跳跃者弃之。 1.6实验分组 甲鼠腹腔注射0.25%度冷丁0.1ml/10g 乙鼠腹腔注射0.25%罗通定0.1ml/10g 丙鼠腹腔注射生理盐水0.1ml/10g 1.7 测痛阈值 分别在注射药后15、30、60min各测痛阈值一次，并记录痛阈值。 1.8 数据统计 数据以,x?s表示，显著性差异采用t检验。 1.9痛阈提高百分率 按下式计算痛阈提高百分率 用药后平均热痛阈值—用药前平均痛阈值 * 100% 痛阈提高百分率= 用药前平均痛阈值 2.结果 见表1 ，图1。 4-1 2009~2010学年 《生理科学实验》实验报告 表1. 度冷丁、罗通定对小鼠痛阈的影响(n=9) 生理盐水痛阈值(秒) 度冷丁痛阈值(秒) 罗通定痛阈值(秒) 样本 0 15 30 60 0 15 30 60 0 15 30 60 1 18 23 14 21 16 48 14 23 28 60 60 60 2 26 27 27 22 22 60 39 55 14 33 40 35 3 17 17 14 17 23 26 40 25 20 23 32 28 4 21 21 14 17 10 26 27 14 24 21 35 28 5 15 16 10 14 13 60 20 18 15 24 19 13 6 25 43 18 14 20 17 21 18 23 45 51 43 7 18 11 15 13 22 38 21 15 15 30 25 14 8 15 20 18 21 13 60 19 16 19 32 25 22 9 16 60 15 16 21 15 11 12 20 40 58 60 x 19 19 16 17 18 47 24 22 20 34 38 34 14.313.012.415.0s 3.46 4.75 5.29 3.67 5.33 9 9.72 6 4.68 7 0 17.64 47?22?34?38?35?x?s 19?19?16?17?18?14.324?13.020?12.415.017.64 3.46 4.75 5.29 3.67 5.33 9 9.72 6 4.68 7 0 . 痛阈提高-15.163. 百分率(%) 0 8 -9.4 / 1 33.1 22.5 / 100 93.8 70.2 图1 度冷丁和罗通定药物对小鼠热痛阈值的影响 4-2 2009~2010学年 《生理科学实验》实验报告 *p<0.05,** p<0.05,***p<0.05 vs control group *p<0.05 vs rotundine group; ##p<0.05 vs Dolantin group ; ***p>0.05 vs Rotundine group 分析:在度冷丁实验组中，15min时，该组小鼠的痛阈值是最高的，可是在30分钟时，其痛阈值迅速下降，可能和15min实验时，小鼠在热板上停留时间 ?14.39 s)过久，导致足受伤;也有可能是实验提供的度冷丁试剂在小鼠(47 体内发挥作用的时间过短。 3.讨论 3.1 在整个实验过程中，度冷丁组和罗通定组的小鼠与对照组的小鼠的痛阈值有 显著性差异(p<0.05)。在15min时，观察记录到度冷丁组小鼠的痛阈值与罗 通定组小鼠的痛阈值有显著性差异(p<0.05),其中度冷丁小鼠的痛阈值高; 30min时，观察记录到度冷丁组小鼠的痛阈值与罗通定组小鼠的痛阈值有显 著性差异(p<0.05)，其中罗通定组小鼠的痛阈值高;60min时，观察记录到 度冷丁组小鼠的痛阈值与罗通定组小鼠的痛阈值无显著性差异(p>0.05)。在 本次试验中，在15min之前，度冷丁的镇痛效果比较理想，15min~30min左 右，罗通定的镇痛作用比度冷丁有效;60min后，两者镇痛效果没有显著性 差异。 原因分析:由于度冷丁的作用时间较短(吗啡皮下注射5~10mg，作用持续时 [1] [1]间约为6小时,而度冷丁的效价强度仅为吗啡的1/7~1/10，作用时间也较 短)，而罗通定的作用时间较长，一次口服60~100mg，可维持作用2~5小时 [1]，所以在试验中，开始时，度冷丁的作用强度比罗通定好;过了一段时间 后度冷丁的作用强度比罗通定弱。 3.2 度冷丁和罗通定的作用机制. 3.2.1度冷丁作用机制: 疼痛刺激使感觉神经末梢兴奋并释放兴奋性递质(可能为P物质)，该递质 与接收神经元上的受体结合，将痛觉冲动传入脑内。感觉神经元末梢上存在 阿片肽受体，含脑啡肽的神经元释放脑啡肽，后者与阿片受体结合，减少感 觉神经末梢P物质的释放，恻然防止痛觉冲动传入脑内。 Dolantin为作用于中枢神经系统的阿片受体而发挥作用的人工合成品，是 吗啡的代用品。其作用机理为:Dolantin作用于中枢神经系统的阿片受体， 抑制神经末梢释放P物质，细胞钙离子内流，钾离子外流，阻断神经冲动传 递。 度冷丁?阿片受体?Ca2+内流?，K+外流??后膜超极化?兴奋传入? 3.2.2罗通定的作用机制:罗通定为四氢巴汀(左旋)，具有良好的镇痛作用，并 伴有镇静、安定和催眠作用，进入中枢后优先阻滞脑内DA受体最丰富的脑 区的D2受体亚型，然后通过这些神经核与下丘脑弓状核发生神经连接，由 4-3 2009~2010学年 《生理科学实验》实验报告 此与内啡肽中央导水管灰质内源性抗痛系统相联系，加强脑干部位的抗痛功 能，并抑制脊髓背角水平的致痛信息进人脑内，增强阿片肽的功能，最终达 到镇痛目的。罗通定阻断脑内DA受体，抑制痛觉传入和痛反应，增加与痛 觉有关的特定脑区域脑腓肽原和内腓肽原的mRNA的表达，促进脑腓肽、内 腓肽的释放。 参考资料: [1] 陈季强 . 基础医学教程各论 上册 . 科学出版社 . 2004年版;351,356,357 . [2] 李秀芹 ～杨腾飞 ～张可璇 ～吕游 ～武静茹. 罗通定协同哌替啶镇痛作用的实验研究 . 徐州医学院学报 . 2009～29(5):319~320 [3] 王云娇 ～李武毅 ～张永云 . 罗通定片镇痛、镇静作用的实验研究. 中药材. 第29卷第7期2006年7月: 713~714. 浙江大学出版社. 2004年版:257~258 [4] 陆源～夏强. 生理科学实验 . 4-4