脑灵片对青木香减毒作用的初步研究

脑灵片对青木香减毒作用的初步研究 ====================================================================== 【摘要】 目的 本试验通过研究脑灵片对青木香中马兜铃酸A含量的影响，以 初步探讨青木香的解毒问题。 青木香与脑灵片共煎后用RP-HPLC法测定马 兜铃酸A的吸收值，观测其含量的变化情况。结果 加入脑灵片后，青木香中马 兜铃酸A的含量明显降低。结论 脑灵片可显著降低青木香中马兜铃酸A的含量。 【关键词】 脑灵片 青木香 马兜铃酸A 减毒 【Abstract】 Objective To study the effects of Naoling tablet on Aristolochia acid A from in Aristolochia debilis,preliminary study on reducing poison effects of Naoling tablet to Aristolochia debilis.Methods Determined absorption of Aristolochhia aicd A by HPLC after Aristolochia debilis and Naoling tablet common boilling, to observed change of Aristolochia acid A.Results Aristolochia acid A content of Aristolochia debilis was markedly decreased after Naoling tablet was added.Conclusion Naoling tablet can markedly decreased Aristolochhia aicd A content of Aristolochia debilis. 【Key words】 naoling tablet;aristolochia debilis;aristolochia achid A;reducing poisonousness 青木香的药用标准虽然已被取消，但其中所含主要毒性成分马兜铃酸的解 毒一直是许多专家致力解决的问题。国内有1例服用“木通”导致肾损害，停 用肾透析后连服中药六味地黄丸加减使病情稳定，肾功能恢复正常的报道,1,。 为了深入研究脑灵片对青木香的减毒作用及机理，我们了以下实验。 1 仪器与试药 1.1 实验仪器 日立L6000型高效液相色谱系统，包括L-4200H UV-VIS Detector D-2500型色谱数据处理仪。MA240D电子分析天平，上海第二天平仪 器厂。GQ7OE-5型红外快速干燥箱，上海市吴淞五金厂。数显恒温水浴锅，金 坛市大地自动化仪器厂。 1.2 药物 青木香，为马兜铃科植物马兜铃Aristolochia debilis Sieb. et Zucc.的干燥根，购自中国生物制品检定所，批号:919-9001。脑灵 片(糖衣片)，甘肃省河西制药有限公司，批号:050301。 1.3 试剂 马兜铃酸A对照品(aristolochic acid A,以下简称AA-I)， 中国药品生物制品检定所，批号110746-200406。甲醇、乙腈为色谱纯，山东 省禹王实业总公司禹王化工厂。无水乙醇、冰醋酸为分析醇，中国安徽医药公 司。水为纯化水。自来水，符合国家饮用水标准。 2 色谱条件 色谱柱:依利特Hypersil ODS25 (4.6mm×250mm),柱号:E:1417177。流速:1ml/min。柱温:室温。检测波长:250nm。进样量:10μl。流动相:乙腈-(水+冰醋酸)=48:52，其中,水:冰醋酸=62.5: 1。理论塔板数不低于2000。 3 试验方法与结果 3.1 标准溶液的制备 称取AA-I对照品7mg，置于50ml量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.14mg/ml的对照品储备液，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液2.00ml，于10 ml量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.028mg/ml的AA-I对照品溶液，作为对照品溶液。 3.2 供试液的制备 3.2.1 青木香样品溶液的制备 精密称取青木香样品0.6g，置于200ml烧杯中，加120ml自来水，煎煮30min，过滤，收集滤液，残渣加80ml自来水，煎煮30min，过滤，收集滤液，合并2次滤液，置于水浴上，浓缩至干。用适量的无水乙醇溶解并完全转移至10ml的量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀。放入冰箱冷藏，静置过夜。抽取上清液过滤，弃去初滤液，收集续滤液，放入1ml塑料离心管中，作为供试液1。 3.2.2 青木香与脑灵片供试液的制备 分别取青木香样品、脑灵片粉末少许，各精密称取0.6g置于200ml烧杯中，混合两种药物，加入120ml自来水，按3.2.1项下制备青木香样品溶液的方法进行操作，其制备液作为供试液2。 3.3 AA-I的定性分析 分别吸取供试液1和对照品溶液，注入液相色谱仪,按2项下的色谱条件，测绘其色谱图。色谱图见图1。 3.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品储备液1、2、3、4、5、6ml，分别置10ml的量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度。按2项下的色谱条件，依次进样测定，测得AA-?的峰面积。以AA-?的进样量(μg)为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。由标准曲线可知，在0.08,0.40μg之间，进样量与峰面积之间呈良好的线性关系，回归方程为Y=1.7×105X+5248，相关系数R=0.9999。 3.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，按2项下的色谱条件，注入液相色谱仪，测定对照品溶液的峰面积，平行测定5次。结果见1，表明精密度良好。表1 精密度试验结果 3.6 稳定性试验 在2项的色谱条件下，精密吸取供试液110μl，注入液相色谱仪，测定，然后于2、4、8、12、24h各测定1次，结果见表2，表明供试品溶液在24h内测定结果稳定。表2 稳定性试验结果 3.7 重复性试验 取青木香样品0.6g，精密称定，共称取5份，照青木香样品溶液的制备项下操作，制成供试品溶液。在2项下的色谱条件下，分别精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算AA-?的质量。结果见表3，说明该方法的重复性良好。 3.8 加样回收率试验 取0.2ml供试液1，用无水乙醇定容为1ml，作为供试液3。取0.2ml供试液1，加入标准溶液0.15ml，用无水乙醇定容为1ml，作为供试液4。取标准溶液0.15ml，用无水乙醇定容为1ml作为供试液5。取以上各供试液10μl，按2项下的色谱条件测定，测定结果:回收率为(99.5?0.5)%，RSD为0.5%。 3.9 青木香与脑灵片共煎前后AA-?含量的变化(AA-?的定量分析) 分别取供试液1、2，按2项下的色谱条件测定，并计算各样品中AA-?的含量，结果见图2及表4。表3 重复性试验结果表4 青木香与脑灵片共煎后的 AA-I含量debilis and Naoling Table common boilling 结果表明，青木香与脑灵片共煎后，马兜铃酸A含量降低了55.3%，可见，脑灵片可以明显降低青木香中马兜铃酸A的含量。 4 讨论 国内外学者现已公认，青木香的肾毒性与其所含主要成分马兜铃酸有关，而其中马兜铃酸A为主要毒性成分,2,，且含量较大，故将马兜铃酸A作为测试指标。在提取方法上为了尽量符合临床实际，我们选用了加热水提的方法，提取次数为2次。 青木香行气止痛，解毒消肿，降血压，主治胃肠疼痛，风湿性关节炎，跌打损伤，咽喉肿痛，高血压病，外用治牙痛，毒蛇咬伤等症,3,。湿热之邪极易伤阴，同时青木香行气亦易伤阴。故需配伍养阴药，使邪正兼顾。肾阴为一身津阴之根，脑灵片既补气血，养心肾，又滋补肾阴，增强正气，能防阴液之再耗。其滋阴之作用，恰恰能制约青木香的行气伤阴之性。因而脑灵片能够降低青木香行气伤阴的副作用。 本研究表明，脑灵片可以明显降低青木香中马兜铃酸A的含量，为青木香等含马兜铃酸类中药的解毒提供了科学依据和新的思路。 【参考文献】 1 李青.木通中毒致肾功能不全.山东中医杂志，1997，16(2):87. 2 Vanhaelen M,Vanhaelen-Fastre R,But P, et al.Identification of aristolochin acidi in Chinese herbs.Lancet,1949, (343):174. 3 徐国钧.生药学.北京:人民卫生出版社，1987，157.