交泰丸方药4种提取方法的比较研究

交泰丸方药4种提取的比较研究 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第1O期2003年10月?895? E1] [2] [3] [4] Wurtman,JudithJ,ShearJL,eta1.Therapeutic carbohydrateblendsusefulforaidingpremenstrualsyndrome [P].US:5760014,1998—06—02. Guard—PetterJ,LakshmiB,CarlsonR,eta1. CharacterizationoflipopolysaccharideheterogeneityinSal— monellaenteritidisbyanimprovedgelelectrophoresismethod [J].EnvironMicro~'ol,1995,61:2845—2851. KhngHP,CunliffeD,DaviesS,eta1.Thesynthesisofsub— micronmagneticparticlesandtheiruseforpreparative purificationofproteins[J].BiotechBioeng,1998,60:419— 424. D,SouzaSM,AlexanderC,CarrSW,eta1.Directed [5] [6] [73 nucleationatacalcite—templatedpolymersurface[J].Nature, 1999,398:312—316. Gutnick.DavidL,Rosenberg,甜a1.Productionofalpha- emulsans[P].US:4234689,1980—11—18. Millqvist—FurebyA.GillIS,VulfsonEN.Enzymatic transformationsinsupersaturatedsolutions:I.Ageneral studywithglycosidases[J].BiotechBioeng,1998,60:190— 196. WestphalO.CrowellP,BurnettP.Determinationofthe carbohydratecompositionofwoodpulpsbygaschromat- ographyofthealditolacetates[J].AnalC舭.,,l,1967,39(1). 121—124. 交泰丸方药4种提取方法的比较研究 张学兰,李正杰 (1.山东中医药大学,山东济南250014;2.河北以岭医药集团,河北石家庄050091) 摘要:目的优选交泰丸方药的提取工艺.方法以小檗碱,肉桂酸,总生物碱,挥发油,干 浸膏为指标,在药材粒 度,溶剂量,煎提温度,滤过,浓缩等条件相同的前提下,对半仿生提取法(SBE法),水 提取法(WE法),半仿生提取 醇沉法(sBAE法),水提取醇沉法(wAE法)进行比较研究.结果5个指标综合评价y 值为:SBE法>WE法> SBAE法>WAE法.结论交泰丸方药的提取法以SBE法为佳. 关键词:交泰丸;提取方法;小檗碱;肉桂酸;总生物碱 中田分类号:R284.02;R286.02文献标识码:B文章编号:0253—2670(2003)10—0895 一O4 ComparisonoffourextractingmethodsforJiaotaiPill ZHANGXue—lan.LIZheng—jie (1.ShandongUniversityofTCM,Jinan250014,China;2.HebeiYiling PharmaceuticalGroup,Shijiazhuang050091,China) Abstract:ObjectToevaluatetheextractingtechnologyofJiaotaiPillcomponents.MethodsF our methods—thesemi—bionicextraction(SBE),thewaterextraction(WE),thesemi— bionicextractionby precipitationwithaleohol(SBAE).andthewaterextractionbyprecipitationwithaleohol(W AE)were usedtoextractJiaotaiPillcomponent,withberberine,cinnamicacid,totalalkaloids,volatileo ilanddried extracttakenasthemarkersandtostudythefourmethodsunderthesameconditionsofdruggranularity, solventamount,deeoetingtemperature,filtration,concentration,etc.ResultsThecomprehensivevalues YwereSBE>WE>SBAE>WAE.ConclusionSBEmethodisbetterthantheotherthreemethodsinthe extractionofJiaotaiPillcomponents. Keywords:JiaotaiPill;extractingmethods;berberine;cinnamicacid;totalalkaloids *JiaotaiPillisaChineseprescriptionconsistedofRhizomaCoptidisandCortexCinnamomi.Ithasthe functionofcoordinationbetweentheheartandthekidney. 交泰丸由黄连,肉桂组成,具有交通心肾的功 能.临床用于失眠,心律失常,口腔疾病等取得较好 效果?.为进一步探讨该方药采用半仿生提取 (SBE)法提取是否较目前普遍应用的提取方法为 佳,本实验根据SBE法理论,在优选出SBE法提 取条件引,药材组合方式及醇沉较佳浓度的基础上, 以小檗碱,肉桂酸,总生物碱,挥发油,干浸膏量为指 标,对该方药作4种提取方法的比较研究. 1仪器与药品 Beckman高效液相色谱仪(美国贝克曼公司), 收一日期}8002—12—18 基盒硬目:山东省自然基金资助项目(QOOCO5) 作者筲介:张学兰(1963一),女,山东蓬莱人,副教授,硕士生导师,主要从事中药翻剂 及炮制研究. Tel;(0531)8836297E—mail:zhangx12440@163.corn ?896?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第1O期2003年1O月 CS一930型薄层扫描仪(日本岛津),UV一754型紫 外可见分光光度计(上海第二分析仪器厂),高效硅 胶GF:.薄层板(青岛海洋化工厂). 药材经张兆旺鉴定,黄连为毛莨科植物黄连 CoptischinensisFranch.的干燥根茎,肉桂为樟科植 物肉桂CinnamomumcassiaPresl的干燥树皮. 盐酸小檗碱,肉桂酸对照品(中国药品生物制品 检定所),乙腈,甲醇(色谱纯),纯净水,其余试剂均 为分析纯. 2方法与结果 2.1提取液的制备 2.1.1水提取(wE)液:将处方药材分别粉碎,按 处方比例分别称取黄连2O目粗粉54g,肉桂2O目 粗粉36g,分别加水提取3次(黄连采用回流提取 法,肉桂采用双提法;加水量依次为药材量的1O,8, 8倍;浸0.5h;提取17o,80,40min),分别滤过, 2000r/rain离心20min,合并上清液,水浴浓缩并 定容至400mL(相当于原药材0.225g/mL). 2.1.2水提取醇沉(WAE)液:取WE液200mL, 水浴浓缩至100mL,加入95乙醇,调至醇体积分 数为70,冷藏放置12h,2000r/rain离心2O min,上清液回收乙醇,定容至200mL. 2.1.3SBE液:按2.1.1项下方法,只将第一煎用 水以0.1mol/LHC1调至pH2.20,第二,三煎用水 依次以0.1mol/LNaOH调至pH6.50和pH 8.70,依法制得. 2.1.4半仿生提取醇沉(SBAE)液:取SBE液200 mL,按2.1.2项下方法依法制得. 2.2供试液的制备:取2.1项下提取液各5mL,加 入硅藻土4g,拌匀,水浴蒸至近干,8O?烘干,研 细,用甲醇150mL索氏回流提取5h,回收甲醇,残 渣用甲醇定容至25mL,得供试液A.取2.1项下提 取液各10mL,加重蒸馏水至150mL,用醋酸乙酯 萃取(20mL×3),回收醋酸乙酯,残渣用甲醇定容 至5mL,得供试液B. 2.3小檗碱的含量测定 2.3.1对照液的制备:称取盐酸小檗碱对照品 ,加甲醇至刻度. 2.O0mg,置5mL容量瓶中 2.3.2线性关系考察:精取盐酸小檗碱对照液2, 4,6,8,10,12L,点于同一薄层板上,以苯一醋酸乙 酯一甲醇一异丙醇一氨水(6:3:1.5:1.5:0.3)为展 开剂,另槽加入同体积的浓氨试液饱和20min,展 开8cm,取出,挥干,反射式锯齿扫描,一342nm, R一368am,Sx一5.以点样量为横坐标,峰面积为 纵坐标绘制标准曲线,结果盐酸小檗碱的线性范围 为0.80,4.80g,回归方程:Y一30450.42X+ 18069.67,r一0.9973. 2.3.3含量测定:精取供试液A各2L与盐酸小 檗碱对照液2,4L,点于同一薄层板上,依法测定. 小檗碱含量以盐酸小檗碱计算,结果见1. 2.4肉桂酸的含量测定 2.4.1色谱条件:色谱柱:BeckmanC18(4.6mm× 250mm,5m);检测器:Beckman163可变波长检 测器;检测波长:267am;柱温:室温;灵敏度:1.0 AUFS;流动相:乙腈一0.1磷酸(27:73);流速:1 mL/min;进样量:20L.在此条件下,肉桂酸与相 邻峰达到基线分离,分离度>2,见图1. A 05101520250510152025 时间t/rmn *一肉桂酸 *一cinnamicacid 图1肉桂酸对照品(A)和交泰丸(B)的HPLC图 Fig.1HPLCchromatogramsofcinnamic acid(A)andJiaotaiPill(B) 2.4.2对照液的制备:称取肉桂酸对照品2.4O mg,置10mL容量瓶中,加甲醇至刻度. 2.4.3线性关系的考察:精取肉桂酸对照液 0.025,0.05,0.1,0.2,0.4,0.8,1.0mL,分别加甲 醇定容至1mL,各取2OL进样,测定峰面积.以进 样量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,结果 肉桂酸的线性范围为0.12,4.8g,回归方程为 Y一3.551×10X+100364,r一0.9992. 2.4.4含量测定:取供试液B,用0.45m微孔滤 膜滤过,取滤液各20L进样,结果见表1. 2.5总生物碱的含量测定 2.5.1对照液的制备:称取盐酸小檗碱对照品 1.50g,加pH7.0缓冲液定容于10mL容量瓶中. 2.5.2线性关系的考察:精取盐酸小檗碱对照液 0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2mL,分别置具塞三角瓶 中,均用pH7.0缓冲液稀释至2mL,加入0.007 溴麝香草酚蓝溶液8mL,加入氯仿1OmL,盖好瓶 塞,充分振摇2min,移入分液漏斗中,静置分层,分 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第1O期2003年1O月?897? 取氯仿层,用干燥滤纸滤过.滤液以相应的试剂为空 白,在420am处测定吸光度.以浓度为横坐标,吸 光度为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程:A一 36.1OC一0.0039,r一0.9981.线性范围为0.003 0.O15mg/mL. 2.5.3含量测定:精取供试液A各0.1mL,置具 塞三角瓶中,水浴蒸干,按2.5.2项下方法测定.总 生物碱含量以盐酸小檗碱计算,结果见表1. 2.6挥发油的含量测定:按《中华人民共和国药典》 2000年版附录XD测定法(甲法)依法测定,结果见 表1. 2.7干浸膏量的测定:精取2.1项下提取液各10 mL,分别置恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,烘至恒重. 计算干浸膏得率,结果见表1. 2.84种提取方法所得溶液的综合评价:将表1中 各指标成分的测定数据,按公式z—z进行标准化 处理(式中z为提取液中各指标成分的含量,z为各 指标成分含量4个数据的平均值,s为其标准差). 根据各指标在提取工艺选择中的主次地位,给予不 同的加权系数,以标准化后的值加权后求和,即得综 合评价y值,见表2.其中y一(小檗碱+肉桂酸)× 8+(总生物碱+挥发油)×4+干浸膏×2. 衰14种提取方法所得溶液中各指标成分的含量(H一3) Table1Contentsofeachmarkercomponentextractedbyfourmethods(H一3) 衰24种方法提取液的综合评价 Table2Comprehensiveevaluationoffour methodextracti0ns 2.9转移率试验:精密称取黄连粗粉0.1g,按《中 华人民共和国药典12000年版黄连项下方法提取, 按2.3项下方法测得其小檗碱含量为6.248,按 2.5项下方法测得其总生物碱含量为9.325.精密 称取肉桂粗粉0.5g,用乙醚150mL索氏回流提取 5h,水浴回收乙醚,残渣用甲醇定容至2mL,按2.4 项下方法测得其肉桂酸含量为0.0445.另称取肉 桂粗粉50g,加水500mL,按2.6项下方法测得其 挥发油含量为1.74.称取肉桂粗粉50g,按2.2 项下SBE法工艺条件提取,测得其挥发油含量为 2.20.由于SBE法提得的挥发油量明显高于药典 蒸馏法,故以SBE法测得的挥发油含量为100,计 算提取液中挥发油的转移率.将表2中小檗碱,肉桂 酸,总生物碱,挥发油的含量按方中黄连,肉桂的量 折算,求出其转移率,结果见表3. 3小结与讨论 3.1以小檗碱,肉桂酸,总生物碱,挥发油及干浸膏 量为指标,对交泰丸方药4种提取方法进行比较,结 果5个指标综合评价y值为:SBE液>WE液> 衰3转移率试验结果 Table3Resultoftransferencetest% SBAE液>wAE液.SBE液中小檗碱,总生物碱, 挥发油的转移率均大于50,提示本制剂的方药提 取采用SBE法为佳.SBE法符合口服药物经人体胃 肠道转运吸收的原理,且有效成分含量高,生产成本 低.若欲再减少服用量,进一步去除杂质,可采用 SBAE法,其较wAE法提取的成分含量高. 3.2对4种方法提取液中5个指标成分试验结果 进行标准化处理,以消除各指标的单位和量纲的不 同,以及各指标变量范围相差悬殊所造成的影响,同 时根据各指标在工艺选择中的主次,确定不同的加 权系数,以标准化处理加权求和后的y值为综合指 标,评判4种提取方法的优劣,较各指标成分含量直 接相加更加科学,合理. 3.3小檗碱含量测定中,是以苯一醋酸乙酯一甲醇一 异丙醇一氨水(6:3:1.5:1.5:0.3)为展开剂,由 于苯,醋酸乙酯在紫外下有吸收,因此,实验的关键 是色谱展开后,薄层板一定要用吹风机吹干至无味, 再进行扫描,否则测出的实验结果不稳定. 3.4肉桂酸测定时检测波长的选择:取肉桂酸对照 品溶液适量,加甲醇稀释,用UV2201紫外分光光 ?898?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第34卷第1O期2003年1O月 度计于200~400nm波长扫描,结果肉桂酸最大吸 收波长为267nm,故选定检测波长为267nm. 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ZhangXL,ZhangZW,LiuCQ.Technicalconditionof semi—bionicextractioninoptimizingformulaofJiaotaiPill throughhomogeneousdesign口].ChinTraditPatMed(中成 药),2002,24(8):575—578. 复脉汤提取工艺的研究 李文宏,余日跃,陈奇,汪亮 (it西中医学院,江西南昌330006) 摘要:目的优选复脉汤的提取工艺.方法采用均匀试验法,通过HPLC法测定提取液中甘草酸和人参皂 苷Rb.的含量.结果加醇量,提取温度影响具有显着性.复脉汤的最佳提取工艺为:用 1O倍药材量的500A乙醇于 6O?温浸4h.结论按此工艺提取,复脉汤中有效成分甘草酸,人参皂苷Rb.含量高. 关t词:复脉汤;提取工艺;均匀试验;甘草酸;人参皂苷Rb.;高效液相色谱 中圈分类号:R284.02;R286.02文献标识码:B文章编号:0253—2670(2003)10—0898 —03 StudyonextractingprocessofFumaiDecoction LIWen—hong,YURi-yue,CHENQi,WANGLiang (JiangxiCollegeofTCM,Nanchang330006,China) Abstract:ObjectTooptimizetheextractionconditionsofFumaiDecoction.MethodsUniform designtestwasused,andthecontentsofglycyrrhizinicacidandginsenosideRb1inextractedsolventwere determinedbyHPLC.ResultsTheethanolvolumeandtheextractingtemperatureintheuniformtest impactedthetestremakably.ThebestextractionprocessofFumaiDecoctionasfollows:therawdrugs wereextractedby10timesof50%ethanolat60? for4hours.ConclusionGlycyrrhetinicacidand ginsenosideRb1contentsinFumaiDecoctionarehigheraccordingtotheaboveextractionprocess. Keywords:FumaiDecoction;extractingprocess;uniformtest;glycyrrhizinicacid;ginsenosideRb1; HPLC *FumaiDecoctionisaChineseprescriptionmadeofRadixGlycyrrhizaePreparata,RadixPanac~ Quinquefolii,andRadixOphiopogonis,etc.withthefunctionofsupplementingqiandnourishingyin. 复脉汤由炙甘草,西洋参,麦冬等药物组成,有 益气养阴复脉之功效,主治气阴两虚型心动悸脉结 代,用于抗心律失常[1].在以前的工作中,曾比较了 水煎煮法,水温浸法,饮片乙醇温浸法,粗粉乙醇温 浸法,渗漉法提取对复脉汤抗心律失常有效成分甘 草酸及人参皂苷Rb含量的影响.结果在尽可能相 似的条件下,饮片乙醇温浸法提取所得目标成分含 量及总量最高,且总固体量相对较小.因此,本实验 选择饮片乙醇温浸法作为复脉汤的提取方法,采用 均匀设计试验法,以确定提取复脉汤中有效成分的 最佳工艺. 1仪器及试药 Agilent1100seriesHPLC仪,VWD紫外检测 器,HPchemstation.甲醇,乙腈为色谱纯,其他试剂 均为分析纯.甘草酸单铵盐对照品(中国药品生物制 品检定所,批号:731—9903),人参皂苷Rb对照品 (中国药品生物制品检定所,批号:0704—200012).甘 草GlycyrrhizauralensisFisch.由内蒙古医学院中 药系提供;西洋参PanaxquinquefoliumL.,麦冬 Ophiopogonjaponicus(Thunb.)Ker—Gaw1.药材购 较一日期:2002—11-18 基金项目;江西省自然基金课题(0140010),江西省教育厅课题 作者?介:李文宏(1974一)!男,江西南昌市人,讲师,硕士,现为北京中医药大学2001 级博士生,主要从事新药开发和中药药理研究. L—mall:1whongjxtcm1.com mail:chenqi666@263.net ?通讯作者Tel:(0791)6825769E—