伸筋草超临界萃取物工艺参数优化及药效验证

伸筋草超临界萃取物工艺参数优化及药效验证 伸筋草超临界萃取物工艺参数优化及药效验证 【摘要】 目的考察超临界CO2 流体萃取伸筋草有效成分的最佳工艺，进一步验证萃取物的药效。方法采用正交实验，以萃取物得率为指标，考察萃取压力、萃取温度、解析压力及解析温度4个因素的影响;采用热板法、醋酸扭体法、鼠耳二甲苯致炎法、棉球肉芽肿致炎法观察萃取物的镇痛抗炎效果。结果最佳萃取工艺条件为萃取压力20 mPa，萃取温度35?，解析压力8 mPa，解析温度55?，萃取时 间4 h;萃取物对热致痛和冰乙酸所致的小鼠扭体疼痛具有良好的镇痛作用，对二甲苯致小鼠耳炎有显着的消炎作用。结论 超临界CO2 流体萃取技术用于伸筋草有效成分提取，方法简单，适用于工业生产。伸筋草超临界萃取物具有显着镇痛抗炎的药理作用。 【关键词】 伸筋草; 超临界二氧化碳萃取; 抗炎; 镇痛 Optimization on Craft and Drug Action Validation of SFE CO2 Extract for Lycopodium japonicum Thunb. Abstract:ObjectiveTo study the optimal technology of supercritical CO2 fluid extraction(SFE CO2) on Lycopodium japonicum Thunb.and validate the drug action of extract.MethodsThe yield of extractant was used as index to evaluate the technologies based on orthogonal design , in which 4 factors considered were extraction temperature and pressure , separation temperature and pressure;the anti- inflammation and analgesia pharmacological actions was observed by drug action experiment.ResultsThe optimum 35?;separation extraction conditions were : extraction pressure 20MPa, temperature pressure 8MPa, temperature 55? ; extraction time 4 hours.The extract had good analgesia pharmacological action to pain caused by heat in mice and acetic acid causing body distortion test in mice. It also had significant depressions to the inflammation caused by dimethyl benzene on the ear of mice.ConclusionSupercritical fluids extraction method is simple for the activities of Lycopodium japonicum Thunb., and useful for the large scale production. The extract has significant anti inflammation and analgesia pharmacological actions. Key words: Lycopodium jhponicum Thunb.; SFE CO2; Antiinflammatory; Analgesia 中药伸筋草为石松科植物石松Lycopodium juponicum Thunb.的干燥全草。具有祛风除湿、舒筋活络的功效，用于关节酸痛、屈伸不利等症,1,2,。药理研究表明，伸筋草氯仿提取部位具有显着的镇痛消炎作用，而正丁醇提取部位和水提取部位则无此作用或作用较弱,3,。可见，其有效成分多为低极性或脂溶性成分。目前，对本品挥发油等低极性部位的成分研究尚未见报道。超临界二氧化碳流体的极性相当于正己烷，适于萃取中药中的低极性成分，且无溶剂残留，工艺简单，萃取时间短。目前对伸筋草超临界萃取研究未见报道，本实验以萃取率为指标，采用正交实验设计，研究伸筋草超临界CO2 萃取的最佳工艺，并验证萃取物的镇痛抗炎效果，为伸筋草的进一步开发利用提供依据。 1 仪器与 1.1 仪器与药材HA231 50 06型超临界萃取装置(江苏南通华安超临界实业公司);伸筋草购自广州市清平药材市场，经本院生药教研室鉴定为伸筋草 Lycopodium japonicum Thunb. 的干燥全草，粉碎成10,20目备用。 1.2 动物NIH种小鼠，体重18,22 g;SD系大鼠，体重为150,180 g，均购自广东省卫生厅医用动物中心。地塞米松片: 浙江仙琚制药股份有限公司生产，批号040763。吗啡注射液: 沈阳第一制药厂出品，批号931202。 2 方法与结果 2.1 SFE CO2法提取工艺的基本将200 g伸筋草粉末投入萃取釜中，对萃取釜、解析釜?、贮罐分别进行加热，当达到所选定的温度时，开启CO2气瓶对系统进行加压，当达到所选定的压力时，开始循环萃取，并保持恒温恒压。待达到选定的萃取时间后，从解析釜?出料口出料，得淡黄色的油状伸筋草萃取物，计算萃取率(萃取率为每100 g药得到的提取物的量)。 2.2 正交实验选择萃取条件选择萃取压力(A)、萃取温度(B)、解析压力(C)、解析温度(D)4个主要因素，各设定3个水平，设计4因素3水平正交实验L9(34)，对伸筋草进行超临界CO2萃取。因素水平见表1。结果见表2。 表1 提取工艺4因素3水平正交实验及结果(略) 2.3 正交实验的验证从表2实验结果综合后分析认为本实验的最佳条件为A3B2C2D3。取伸筋草药材15 kg(n,3)按最佳工艺进行中试放大实验，各批次的出油率分别为 1.13%， 1.21%及 1.15%。 2.4 萃取物镇痛作用实验 2.4.1 小鼠冰乙 表2 正交实验结果(萃取率)分析(略) 酸致痛扭体实验小鼠雌雄各半，体重18,22 g，随机分组，分别灌胃给药(吗啡组腹腔注射)，1 h后(吗啡30 min后)，每只小鼠腹腔注射0.6%冰乙酸0.2 ml，注射后20 min内小鼠因疼痛扭体的次数。结果见表3。 表3 伸筋草萃取物对冰乙酸致小鼠疼痛扭体的影响(略) 与蒸馏水组比较，*P，0.05，**P，0.01 结果表明，伸筋草萃取物大、中、小剂量组小鼠扭体次数都少于空白组，差异有显着性意义，提示伸筋草萃取物对冰乙酸所致的小鼠扭体疼痛有镇痛作用。