复方首乌藤合剂微生物限度检查的验证

复方首乌藤合剂微生物限度检查的验证 ? 药品鉴定?2011年11月第8卷第31期 复方首乌藤合剂微生物限度检查的验证 张婷,郑绍忠,刘全芳 解放军第一七五医院(厦门大学附属东南医院)药剂科,福建漳州363000 【摘要】目的:确定可行的复方首乌藤合剂微生物限度检查法.:根据《中国药典)2OLO年版二部附录?J微生物 限度检查法常规法进行验证试验.结果:试验组的菌回收率均大于70%,控制菌常规法验证检出阳性菌,阴性菌未 检出.结论:复方首乌藤合剂无抑菌作用,可用常规法进行微生物限度检查. 【关键词】复方首乌藤合剂;微生物限度检查;验证 【中图分类号】R927.33【文献标识码】A【文章编号】1673-7210(2011)11(a)-076-03 ValidationofmicrobiallimittestmethodofCompoundCaulisPolygoni MultifloriMixture ZHANGZHENGShaozhong,LIUQuanfang DepartmentofPharmacy,the175thHospitalofPLA(theSoutheastHospital AffiliatedtoXiamenUniversity),Fujian Province,Zhangzhou363000,China 【Abstract]0bjective:ToestablishamethodforthemicrobiallimittestofCompoundCaulisPolygoniMuhifloriMixture. Methods:Avalidationofmicrobiallimittestmethodwasconductedinaccordancewithroutinemethodintheappendixof ChinesePharmacopoeia(2010editiontwopartsXI).Results:Therecoveriesoftestorganismsbyroutinemethodweremore than70%,thetestorganismsweredetectedinthecontrolbacteriatestandwerenotdetectedinthenegativecontrolbacte— riatest.Conclusion:TheCompoundCaulisPolygoniMuhifloriMixturehasnoinhibitoryeffect.andconventionalmethod canbeusedinmicrobiallimittest. 【Keywords】 CompoundCaulisPolygoniMuhifloriMixture;Microbiallimittest;Validation 微生物限度检查是药品安全性检查的重要项目,目前在 国外也越来越受到重视.每版药典收载的品种也越来越多. 复方首乌藤合剂是我院自制的中成药口服液.有滋阴清肝, 清心安神作用,主要用于神经衰弱性失眠,眩晕及脑外伤性 头痛,头昏等.《中国药典)2010年版建立微生物限度检 查法时.应对该方法进行验证,以确定该方法的可行性.笔者 依据《中国药典)2010年版二部附录f11对该品种进行了菌落 计数和控制菌检查方法的验证闭. 1仪器与试药 1.1仪器 DG一2B多功能恒温箱(上海医疗器械厂);HWS一400型 恒温恒湿箱(上海精宏实验设备有限公司);LDZX一40SCI型 立式自动电热压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂);101— 2A型数显式电热恒温干燥箱(上海阳光实验仪器有限公司). 1.2药品 复方首乌藤合剂(解放军第一七五医院制剂室,40m, 批号:100609,100623,100721). 1.3试验用菌株 大肠埃希菌(escherichiacoli)[CMCC(B)44102】,金黄色 葡萄球菌(staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003],枯草芽孢 杆菌(bacillussubtilis)[CMCC(B)63501],黑曲霉(aspergillus niger)[CMCC(F)98003]和白色念珠菌(candidaalbicans)[CM- CC(F)980011,以上菌种均购于厦门市药品检验所,金黄色葡 萄球菌为第三代,大肠埃希菌为第二代,其余菌均为第四代. 76由?蠢商写掘CHINAMEDICALHERALD 1.4培养基 营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,营养肉汤培养 基,改良马丁琼脂培养基,胆盐乳糖培养基,MUG培养基,以 上培养基均购于广东环凯微生物科技有限公司. 1.5稀释液 pH7.0氯化钠一蛋白胨缓冲液.购于广东环凯微生物科 技有限公司. 2方法与结果 2.1茵落计数方法的验证圈 2.1.1供试液的制备 用pH7.0的无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液将复方首乌藤 合剂稀释成为1:10的供试液.充分混匀备用. 2.1.2菌液制备 2.1.2.1取大肠埃希菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌的新 鲜培养物用接种棒接种至营养肉汤培养基中,于(35+1)oC培 养18,24h. 2.1.2.2取白色念珠菌的新鲜培养物用接种棒接种至改良马 丁琼脂培养基中,于(25~1)?培养24—48h; 上述培养物均用灭菌生理盐水制成每毫升含菌数小于 100cfu的菌悬液.做活菌计数用. 2.1.2-3取黑曲霉新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养 基中,于(25~1)oC培养5,7d,使黑色的霉菌孢子大部分覆盖 培养基斜面为宜,加入5ml含0.05%(ml/m1)聚山梨酯一80的 灭菌生理盐水并轻轻振摇洗脱下霉菌孢子,过滤孢子悬液至 2011年11月第8卷第31期 无菌试管内,用含0.05%(ml/m1)聚山梨酯一80的灭菌生理盐 水制成每毫升含菌数小于100efu的菌悬液,做活菌计数用. 2.1.3菌落计数方法的验证操作 试验组:分别吸取上述制备好的1:10供试液1ml注入 平皿中.再分别加入上述制备好的的5种菌的菌悬液各1ml, 每种菌平行制备2份.立即倾注营养琼脂培养基或玫瑰红钠 琼脂培养基. 供试品对照组:分别吸取上述制备好的1:10供试液 1ml注入平皿中,立即倾注营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼 ? 药品鉴定? 脂培养基.每种培养基平行制备2份.以测定供试品的本 底菌数. 菌液组:取上述制备好的5种菌的菌悬液1rnl注入平 皿内,每种菌平行制备2份,立即倾注营养琼脂培养基或玫 瑰红钠琼脂培养基,测定所加的试验菌数,并计算回收率.回 收率公式为回收率(%)=(试验组菌落计数一供试品对照组菌 落计数),菌液组菌落计数xlO0%. 以上营养琼脂培养基置30,35cC培养48h,玫瑰红钠琼 脂培养基置23—28?培养72h,结果见1. 表1各试验菌株的回收率 由表1可见,笔者对复方首乌藤合剂采用平皿法,经过 3次平行试验,5种菌的回收率均大于70%.故本品的细菌, 霉菌,酵母菌数的测定可依据《中国药典))2010年版直接取 样采用常规法. 2.2控制茵检验方法的验证问 2.2.1阳性试验组 取上述1:10供试液1OIlll加至100ml胆盐乳糖培养基 中,再加入10—100cfu的大肠埃希菌,依相应控制菌检查方 法进行检查. 2.2.2阴性菌对照组 方法同试验组,阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌,依相 应控制菌检查方法进行检查.见表2. 表2控制菌的方法验证结果 注:表中”+”代表该反应呈阳性,”一”代表该反应呈阴性 从表2可以看出,采用常规法检验复方首乌藤合剂的控 CHINAMEDICALHERALD巾蕾医商昙报77 ? 药品鉴定?2011年11月第8卷第31期 HPLC法测定消渴降糖胶囊中槲皮素的含量 付前霞 湖北省荆州市公安卫校.湖北荆州434300 【摘要】目的:探讨用高效液相色谱法消渴降糖胶囊中槲皮素的含量.方法:应用高效液相色谱法,采用C.柱,以 甲醇一0-4%磷酸(55:45)为流动相,以360nm为检测波长,检测消渴降 糖胶囊中槲皮素的含量.结果:槲皮素峰与相 邻色谱峰能有效分离,柱效较高,槲皮素对照品进样量在0.056, 0.560txg范围内与峰面积呈良好的线性相关.回归 方程为l,=40103.2X一561.4,相关系数r值为0.9998;精密度 RSD=0.9%;10h稳定性试验RSD=1.10%;重复性试验 结果显示,5份样品含量的变异系数RSD=1.30%;3个不同浓度的加 样回收试验,平均回收率为98.7%,RSD=0.90%. 结论:采用高效液相色谱法测定消渴降糖胶囊中槲皮素的含量,专属 性强,结果可靠,重现性好,可用于消渴降糖胶 囊中槲皮素的含量测定. 【关键词】高效液相色谱法;消渴降糖胶囊;槲皮素 【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】 1673—7210(2011)11(a)一078—03 DeterminationofquercetininXiaokeJiangtangCapsulebyHPLC FUQianxia GonganHealthSchoolinJingzhouCity,HubeiProvince,Jingzhou434300,China [Abstract]Objective:Toexplorethemethodofhighperformanceliquidchromatography(HPLC)inthedeterminationof quercetininXiaokeJiangtangCapsule.Methods:Highperformanceliquidchromatographywasemployedtotestthe quercetincontentsofXiaokeJiangtangCapsules.C1scolumn,mobilephaseofmethanol一0-4%phosphoricacid(55:45)and detectionWavelengthof360nmwereadopted.Results:Thepeakofquercetinandtheadjacentpeakscouldbedifferenti— atedwithhighcolumnefficiency.Thequercetinreferencestandardsamplesizeof0.056to0.560Ixghadagoodlinear correlationwiththeregressionequationofY=40103.2X一 561.4andpeakarea(,=0.9998),theprecisionRSDwas0.9% andtheRSDof10hoursstabilitytestresultwas1.10%.Inrepeatedtests.theRSDofcoefficientofvariationamongthe5 samplescontentwaslI30%:addedsampletestsof3differentconcentrationshadaveragerecoveryrateof98.7%andRSD was0.90%.Conclusion:ItCanbeconcludedthat,HPLCisstableandreliableinthedeterminationofquercetininXiaoke JiangtangCapsule. [Keywords]Highperformanceliquidchromatography;XiaokeJiangtangCapsule;Quercetin 消渴降糖胶囊为《部颁》中药成方制剂第十五册收 [作者简介】付前霞(1965一),女,湖北荆州人,大专,主管药师;研究方 向: 药品质量控制. 载品种,其标准号为WS3一B一2983—98.该质量标准颁布于 1998年,仅涉及番石榴叶中所含槲皮素的薄层鉴别,无含量 测定项目.为了更有效地控制产品质量,笔者在消渴降糖胶 制菌,阳性试验组呈阳性反应.阴性菌对照组呈阴性反应.故 可用该法进行复方首乌藤合剂控制菌的检查. 3讨论 验证试验结果表明复方首乌藤合剂无抑菌作用,可依据 《中国药典>>2010年版按常规方法进行微生物限度检查. 笔者发现.复方首乌藤合剂静置一段时间后会生成沉淀, 在试验时,应充分摇匀.使其分散均匀,且本品虽进行了10倍 稀释,但颜色依然较深,在光线较暗的环境下进行菌落计数 时不容易分辨菌落,因此应在光源充足的环境下进行菌落计 数,对疑似菌须进行菌落培养,确定其是否为菌,以免发生漏 数,少数现象,造成试验结果不准确. 菌落数的控制在小于100cfu/ml是试验过程的一大难 点.是一项较耗时的操作过程,通常需要多次实践才能够得 到符合要求的菌落数.菌落的生长繁殖能力极其旺盛,呈指 数级别递增.因此.在用接种棒接种至相应培养基进行增菌, 78巾宙医药居报CHINAMEDICALHERALD 并进行稀释这个过程的重现性很差.很难在同一个稀释级得 到相同数目的菌落数,笔者通过多次试验,并查阅相关资料, 发现可将细菌稀释至10(真菌稀释至10),并在其附近选 取稀释至10一10(真菌选取1O,10)的菌悬液,每个稀释 级取1.0ml与0.5ml同步试验,可大大提高菌落数在100cfu/ml 的范围,减少一些繁琐且不必要的操作. 【参考文献】 『11国家药典委员会.中国药典is].二部.北京:中国医药科技出版社,2010: 附录93. [21吕毅.麻杏止咳糖浆的微生物限度检查[J].华西药学杂志,2009,24(1): 102—103. [3】杨静,陈伟,马宁,等.抗脑衰胶囊微生物限度检查方法学验证[J].医学 理论与实践,2009,22(1):116—117. 1李智勤,路东旭,李金龙.消痛贴膏微生物限度检查方法的建立[J】.时珍 国医国药,2009,20(2):464—465. (收稿日期:2011-06—14)