HPLC法测定犀羚解毒丸中甘草酸的含量【精品分享】

HPLC法测定犀羚解毒丸中甘草酸的含量【精品分享】 作者,秦战勇,林莉莉,姚雪花,杜树山 【摘要】目的建立犀羚解毒丸中甘草酸含量的测定方法。方法采用HPLC法, 色谱柱,Diamonsil C18 (250 mmX4. 6 mm, 5 |J ra),流动相,甲醇-[0. 2 raol/L 醋酸铵-冰醋酸(33 , 1)](64 , 36),检测波长:250 nm,流速:1.0 mL/rain。结果 甘草酸铵在0.075?0.375 |J g范围内呈良好的线性关系(r=0. 999 6),加样回 收率为98.25%, RSD=0. 92%。结论该方法快速、简便、准确、重复性较好,结 果可靠,可用于控制犀羚解毒丸制剂的质量。 【关键词】犀羚解毒丸,甘草酸,高效液相色谱法,含量测定 Abstract, Objective To establish a method for the determination of Glycyrrhizic acid in Xiling jiedu Pills. Methods Diamonsil C18 (250 ramX4. 6 mm, 5 )J m) column in an oven at 30 ?C was need, with a mobile phase consisting of methanol - [0.02 mol/L ammonium acetate - glacial acetic acid (33 : 1)] (64 : 36) and a UV detector at 250 nm, the flow rate was 1. 0 mL/min. Results The linear range of Glycyrrhizic acid was 0. 075?0. 375 |J g/mL. The average recovery was 98.25% (RSD=0. 92%). Conclusion The method is simple and accurate, and can be used for the quality control of Xiling Jiedu Pills. Key words, Xiling Jiedu Pills, Glycyrrhizic acid, HPLC, content determination 犀羚解毒丸是由玄参、连翘、薄荷、牛蒡子(炒)、荆芥穗、板蓝根、金银 花、地黄、麦冬、梔子、淡竹叶、桔梗、甘草、犀角粉、水牛角浓缩粉、羚羊 角粉、冰片等组成的纯中药制剂,具有辛凉发、祛瘟解毒之功效,用于外感时 邪引起的发热恶风、头痛目眩、四肢酸懒、面赤腮肿、咽干口燥、咳嗽咽痛等。 犀羚解毒丸载于《卫生部药品标准•中药成方制剂》第6册,由同仁堂集团股份 公司生产。甘草为本品方中的主要药材,甘草酸是该药的主要有效成分,故以甘 草酸为指标进行含量测定,控制成品的质量。参照2005年版《中华人民共和国 药典》,一部,[1],我们建立了犀羚解毒丸中甘草酸含量的HPLC测定方法,该方 法快速、简便、准确、重复性较好,结果可靠,可用于犀羚解毒丸制剂的质量控 制。 1仪器与试药 Watersl515高效液相色谱仪,Waters2487紫外可见光检测器,Mellenniura32 色谱工作站(美国Waters公司,,KQ-250型超声波清洗器,Mettler Toledo AG135十万分之一电子分析天平。 甘草酸铵对照品(购自中国药品生物制品检定所,批号110731-200511);犀 羚解毒丸制剂,由北京同仁堂集团股份有限公司提供,批号6013957、6013958、 6013959)。甲醇(色谱纯),水为纯净水,其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件及系统适应性 色谱柱,Diamonsil C18(250 mmX4. 6 mm, 5 |J m),流动相,甲醇-[0.2 mol/L醋酸铵-冰醋酸(33 : 1)] (64 : 36);检测波长,250 nm,流速,1.0 mL/min。 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的甘草酸铵对照品1.25 mg,置 23 raL量瓶中,加流动相溶解并定容至刻度,摇匀,作为对照品储备液。精密量取 对照品储备液5 mL,置10 mL量瓶中,加流动相溶解并定容至刻度,摇匀,即得25 M g/mL甘草酸铵对照品溶液(折合甘草酸24. 487 5 p g)。 2. 2. 2供试品溶液的制备 取犀羚解毒丸(批号6013957)适量,与硅藻土按6 , 4比例粉碎并均匀混合 成中粉,取上述粉末8. 0 g,精密称定,置250 mL具塞锥形瓶中,加入40%甲醇 100 mL,称定重量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz) 30 min,放冷,用40%甲醇 补是减失的重量,摇匀,静置,离心,分取上清液滤过,取续滤液作为供试品溶液。 2.2.3阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除甘草以外的其他药味,依照犀羚解毒丸的生产工艺制成阴 性制剂,再按供试品溶液制备方法制成缺甘草的阴性对照溶液。 2.3线性关系考察 分别精密吸取25 )J g/ml甘草酸铵对照品溶液3、5、8、10、13、15 [1 L。 在上述色谱条件K,分别注入液相色谱仪测定。以甘草酸铵的进样量(M g)分别 对相应峰面积积分值进行线性回归,得回归方程,Y=788 206X-8 096. 4 (r = 0.999 6)。结果表明,对照品进样量在0.075?0.375 [i g范围内,甘草酸铵峰面 积与进样量呈现良好的线性关系。 2.4空白试验 分别吸取甘草酸铵对照品溶液、犀羚解毒丸供试品溶液及缺甘草的阴性对 照溶液10 m L,注入液相色谱仪,按上述方法分别测定,得到相应的色谱图,见图 1)。结果表明,犀羚解毒丸供试品溶液的色谱图在与甘草酸铵对照品相应保留 时间处出现甘草酸的色谱峰,而缺甘草的阴性对照溶液色谱图在相同保留时间 处没有出现上述色谱峰,说明制剂中其他成分对甘草酸的测定不产生干扰。 2.5精密度试验 分别精密吸取25 |J g/mL甘草酸铵对照品溶液各10 |J L,重复进样6次,结 果甘草酸铵峰面积的RSD=1. 86%,表明精密度较好。 2.6稳定性试验 取同一供试品溶液(批号6013957),分别于0、2、4、6、8、12 h进样测定, 结果甘草酸铵峰面积的RSD = 1. 76%,表明犀羚解毒丸供试品溶液在12 h内稳定 性良好。 2.7重复性试验 精密称取同一批犀羚解毒丸(批号6013957),按“2.2.2”项下方法制备供 试液共6份,并在上述色谱条件下进行测定。结果样品中甘草酸的平均含量为 2. 37 mg/丸,RSD=1. 16%,表明重复性较好。 2. 8加样回收率试验 取犀羚解毒丸(批号6013957, 2. 40 mg/丸)适量,与硅藻土按6 , 4比例粉碎 并均匀混合成中粉,精密称取4. 0 g上述粉末共6份,分别置250 mL的具塞锥形 瓶中,精密加入甘草酸铵对照品1. 25 mg,精密加入40%甲醇100 mL,称定重量, 超声30 min,放冷,再称定重量,用40%甲醇补足减失的重量,摇匀,静置,离心,取 上清液滤过,取续滤液,进行回收率测定,计算加样回收率,结果见表1。结果表 明,按本法测定样品中甘草酸的含量,加样回收率均符合要求。表1甘草酸的 加样回收率试验结果,略, 2.9样品测定 精密称取3批不同批号犀羚解毒丸制剂,每批平行测定3份,按“2. 2. 2”项 下方法制备供试品溶液,并在上述色谱条件下测定,计算样品中甘草酸的含量,结 果见表2。表2甘草酸含量测定结果(略, 3讨论 本试验考察了超声处理不同时间、加入不同体积提取溶剂的样品中甘草酸 的含量,结果表明超声提取30 min,溶剂量为100 mL可提取完全。取甘草酸铰 对照品溶液适量,经紫外光谱扫描,其最大吸收波长为250 nm,因而选择检测波 长为250 nm。 根据文献报道[2-6],并经预试验,对药典中流动相进行了优选,确定甲醇- [0. 2 mol/L醋酸铵,冰醋酸(33 , 1)] (64 , 36)为流动相,色谱柱为Diamonsil C18(250 mmX4.6 mm, 5 |J m),所得色谱图的分离度好,保留时间较合适。故本试 验选用的流动相为甲醇-[0.2 mol/L醋酸铵-冰醋酸(33 , 1)] (64 , 36),并将该 条件的色谱图记录下来,以被测组分甘草酸峰计算理论塔板数,并计算甘草酸与 相邻峰的分离度。根据试验结果,考虑到仪器、色谱柱、流动相的配制和温度等 系统因素的影响,规定理论塔板数按甘草酸铵峰计算应不低于2 000。 【参考文献】 [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部,[S].北京,化学工业出版 社,2005. 59. [2] 白丽,陈晓辉,徐新盛,等.HPLC测定萆蘚分清丸中甘草酸的含量[J]. 中成药,2005,27 (8): 981-982. [3] 刘彤,史浚,李婷,等.HPLC法测定木香顺气丸中甘草酸的含量[J]. 天津药学,2003,15(1): 12-14. [4] 郭定海,林晓.HPLC法测定橘红片中甘草酸的含量[J].中国药品标准, 2004,5(6): 58-60. [5] 高秋涛,毕开顺.HPLC法测定甘草附子汤中甘草酸和桂皮酸的含量[J]. 屮草药,2003, 34(10): 913-914. [6] 裘飞君,裘学强,陈仁兴.HPLC法测定胃炎宁颗粒中甘草酸的含量[J]. 中国药业,2002,11(9): 39-40.