隔姜灸对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠作用的实验研究

参考文献良性第五章大肠肛门嘉1徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验学．北京：人民卫生出版社，1982，1535．2谷松，关庆增，明彩荣，等．溃疡性结肠炎肝郁大鼠模型的实验研究．辽宁中医杂志，2005，32(11)：1210—1211．3林文注，王佩．实验针灸学．上海：上海科学技术出版社，1999，288—291．4中国畜牧医学会编．中国兽医针灸学．北京：农业出版社，1984，41-42；49—50；67—70．5张东铭．肛肠外科解剖生理学．西安：陕西科学技术出版社，1989．6GilderJR．Identificationofneurotransmittersregulatingintestinalperistalticreflexinhumans．Gastroenterology，1989．97(6)：1414—1419．7严清明，陈瑛，廉南，等．柔肝法治疗肝气郁结证溃疡性结肠炎的研究．中国中西医结合杂志．1995，15(10)：579—582．8TimothyR。eta1．Idiopathicdistributionofregulatorypeptidesinthesigmold—recto—analregionofthehumangut．Gut，1988，29(3)：300．9贾百灵，侯晓华．溃疡性结肠炎患者血清白细胞介素18检测．郑州大学学报(医学版)，2004，39(2)：306—308．10朱峰，钱家鸣，潘国宗．等．白细胞介素一lB和白细胞介素一8在实验性结肠炎发病中的作用及白细胞介素一1受体拮抗剂治疗作用的探讨．中国医学科学院学报，1998，20(5)：388—393．1lMaunderR．Mediatorsofstresseffectsininflammatoryboweldisease：nottheusualsuspects．JPsyehosom，2000．48(6)：569—577．12D．Hollander．Inflammatoryboweldiseasesandbrain—gutaxis．Journalofphysiologyandpharmacology，2003，54(Suppl4)：183—190．13张文俊，许国铭，李兆申，等．血清白细胞介素lB与溃疡性结肠炎的关系．第二军医大学学报，2002，23(12)：1345。1347．隔姜灸对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠作用的实验研究王轶杜炳林北京中医药大学100029张燕生钟馨北京中医药大学东方医院综合外科100078溃疡性结肠炎(UlcerativeColitis，UC)，又称慢性非特异性溃疡性结肠炎，是一种原因不明的直肠和结肠黏膜慢性炎性疾病，具有病程冗长、反复发作、迁延难愈等特点。西医主要采用内科治疗，控制急性发作、缓解病情、减少复发、防止并发症，但效果不是很理想，且副作用较多。中医药疗效肯定，研究也在不断深入，本研究从传统中医外治法人手，观察隔姜灸对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠结肠白介素一lp(interleukin一113，IL一1B)、白介素一10(interleukin—10，IL—10)、血管活性肠肽(vasoactiveintestinalpolypeptide，VIP)的影响，探讨隔姜灸治疗大鼠溃疡性结肠炎的作用机制。1材料与方法1．1实验动物健康雄性sD大鼠，体重为180—2209，由北京维通利华实验动物养殖中心提供。动物合格证号：SCXK(京)2007—0001。1．2实验用药自贴式艾炷为天津杏林书院医疗器械有限公司产品。629将柳氮磺吡啶片剂(上海三维制药有限公司，批号200601C02)研细粉，过120目筛，用蒸馏水配成混悬液，根据人与动物等效剂量换算方法，按0．369／kg体重给药。1．3主要试剂三硝基苯磺酸(trinitro—benzene—sulfonicacid，TNBS)为Sigma产品。IL—lB酶联免疫试剂盒为武汉博士得生物技术有限公司产品，批号：20060219。IL一10酶联免疫试剂盒为武汉博士得生物技术有限公司产品，批号：3989256。VIP免疫组化检测试剂盒PowervisionⅢTwo—StepHistostainingRea—gentLot：256810为美国PowerVision公司的产品。1．4模型的建立参照文献方法，采用TNBS／乙醇溶液灌肠加束缚法制备模型。将SD大鼠适应性饲养一周后，每日不定时束缚大鼠四肢，限制其自由活动(自由饮食、饮水)，每次8小时左右。束缚l周后，大鼠禁食不禁水24小时，l％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(45mg／kg)后，一次性将TNBS／7,醇溶液(100mg／kgTN—BS+50％的乙醇0．25m1)经橡胶输液管由大鼠肛门缓慢注入7～8cm深的肠腔内留置，让动物保持平躺状态，自然清醒，第2天即UC造模成功。UC造模后每日仍然持续束缚大鼠四肢，第3周末(2l天)处死大鼠。1．5分组与治疗将造模大鼠随机分为3组，分别为模型组、柳氮磺吡啶组、隔姜灸组；另设正常组，每组10只。正常组、模型组：每日灌胃1次蒸馏水。隔姜灸组：参照《实验针灸学》及《中国兽医针灸学》的动物穴位图谱，以比较解剖和骨度分寸法为依据模拟定位。取穴：脾俞(双)、太冲(双)。艾炷大小直径7mm×高9mm，于造模结束后次日开始治疗，每日1次，每次每穴各灸3壮，共灸3周。脾俞穴采用补法，太冲穴采用泻法。生姜片厚5—6mm，直径为(1．5±0．2)em。柳氮组：每El灌胃1次柳氮磺吡啶混悬液。1．6实验方法1．6．1取材大鼠治疗3周后，禁食不禁水24小时，断头处死，迅速剖腹，取出距肛门以上8em处结肠段，沿肠系膜缘剪开肠腔，用冷生理盐水冲洗肠物，取病变最明显处1cm左右，立即称重，在煮沸的生理盐水中保持5分钟，再加0．5mol／L冰醋酸0．5ml于匀浆器中匀浆提取，再用0．5mol／LNaOHO．5ml中和，低温离心机3000转／分钟离心15分钟取上清，一20℃保存备测。1．6．2IL—113、IL一10、VIP测定IL一1B、IL一10的检测采用双抗体夹心ABC—ELISA法检测，VIP的检测采用放射免疫分析法，严格按试剂盒说明书进行检测。1．7统计学方法采用SPSSll．5统计软件处理数据资料，检测数据以(面±s)示，采用t检验、方差分析(q检验)分析各均数。2结果结肠IL一1p、IL一10含量以及结肠VIP免疫染色相对面积变化(见表1)。表1肝郁脾虚型UC大鼠结肠VIP、IL一10、IL一113的变化比较【i±s)注：VIP免疫染色相对面积是指VIP表达阳性的面积占总的面积的比例。一P<O．0I．与正常组比较；△△P<O．0l、△P<0．05，与模型组比较；▲P<O．05，与柳氮组比较。630