陕西中医 2009年第 3O卷第 11期 1529
· 方药纵横 ·
番石榴叶提取工艺研究
李 玲 何字新△ 吴晶晶 陈慧娟▲ 西华大学生物工程学院(成都 610039)
摘 要 目的:考察番石榴叶的最佳提取工艺。方法 :以总黄酮含量 、槲皮素含量、干膏收率为
指标 ,设计正交试验考察 乙醇浓度、料液 比、提取时间、提取 次数对提取工艺的影响。结果 :
用 70% 乙醇,1O倍 乙醇量 ,提取 3次,每次 1h的方法可以获得较高的提取率。结论:优选
得到的提取工艺提取效果好且稳定可行。
主
词 番石榴叶 总黄酮 提取工艺
番石榴叶为桃金娘科植物番石榴的干燥叶及带叶
嫩茎。它性平,味干涩,具有收敛止泻、消炎止血的功
效。叶的主要化学成分有黄酮类化合物、鞣质、挥发油、
植物固醇、叶绿素和多糖等r】]。现代药理研究表明,从
番石榴叶中提取出的总黄酮苷及单黄酮苷具有降血糖
作用 ]。本实验 旨在提供番石榴叶中有效成分最佳提
取条件的理论依据。
1 材料与仪器 1.1 材料 芦丁对照 品(中国
药 品生物制品检验所);槲皮素对照 品(中国药品生物
制 品检 验所);番石 榴 叶;甲醇 (分 析纯 );乙醇 (分析
纯);甲醇(色谱纯);亚硝酸钠;硝酸铝;氢氧化钠
1.2仪器 SPD一20A高效液相色谱仪;紫外分光
光度仪;RE一52A旋转蒸发仪;SHB一。循环式真空泵;
HH—s数显恒温水浴锅;ISO9001电子天平。
2 方法和结果 2.1总黄酮含量测定
2.1.1对照品溶液制备:精确称取芦丁标准品 1o.
35mg用 甲醇溶解并定容 至 50mL容量瓶 中,得到 0.
207mg/mL芦丁标准溶液 。
2.1.2供试品溶液制备:称取 100g番石榴叶,加
800mL70%乙醇 回流提取 3次 ,每次 1h,合并药液并
浓缩至相对密度为 1.25(℃);吸取 4mL样 品溶液定
容至 50mL,再吸取 2mL于 50mL容量瓶中,按标准曲
线制备方法处理样 品。
2.1.3最佳测定波长的确定:将对照品溶液于 200
~ 800nm处进行波长扫描 ,确定含量测定的最佳波长
为 510nm。
2.1.4标准曲线制备 :精密吸取芦丁标准溶液 2、
4、6、8、10、12mL于 50mL容量瓶中,各加 3O 乙醇至
12mL,加入 5 NaNO 2mL摇匀放置 6min;加入 10
A1(NO)。32mL 摇 匀 放 置 6min;加 入 4.3
NaOH20mL,再加 30 乙醇定容至刻度,放置 15min
后 ,在 510nm 处测定吸光度 。];结果如表 1所示 。
表 1 标准曲线测定结果
如 表 1所 示 :芦 丁 标 准 品溶 液 在 0.008~ 0.
048mg/mL范围内具有 良好的线性关系 ,以吸光度 Y
为纵坐标 ,浓度 X为横坐标绘制标准曲线。回归方程
为 :Y一12.802X+0.0062,r=0.9996。
2.2总黄 酮转移率测定 精密称定粉碎后过 100
目塞的番石榴叶 0.1g于具塞锥形瓶 中,加人 甲醇溶液
25mL,称定质量 ,超声处理 45min,放冷,再称定质量 ,
用 甲醇溶 液补 足 损失 的质 量 ,摇匀 过 滤,吸取 滤 液
4mL于 50mL容量瓶中,按标准曲线制备方法制备;
结果如表 2所示 。
2.3槲皮素含量测定 2.3.1色谱条件与系统性
试验 :色谱柱为 Diamonsil C18柱 5um(200×4.6ram);
甲醇一0.4N磷酸溶液 (5O:50)为流动相;检测波长:
360nm;流速为 1.0mL/min;柱温:35℃[3]。在此条件
下,样品中槲皮素得到 良好分离。
2.3.2标准品溶液制备:精密称取 5.8mg槲皮素
标 准品用 甲醇溶解 并定容 至 50mL,即得 0.116mg/
mL槲皮素标准品溶液。
表 2 总黄酮转移率结果
试验 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
总黄酮转移率(%) 53.47 16.90 62.33 64.64 58.86 50.42 39.70 56.23 28.81
*四川 省重点 学科 项 目
△ 通讯作 者
▲四川省中医药科学院中医研究所
2.3.3供 试 品 溶 液 制 备 :称 取 100g番 石 榴 叶,加
800mL70 乙醇回流提取 3次 ,每次 1h,合并药液并浓缩至相
对密度为 1.25(℃);备用。
2.3.4线性关系考察:精密吸取浓度为 0.116mg/mL槲皮
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素标准品溶液 1、2、4、8、16uL,按上述色谱条件注入色谱仪,测
定峰面积;结果表明槲皮素在 0.116~1.856ug范围内呈良好
的线性关系。
2.4干膏收率的测定 精密量取样品溶液 2OraL
于干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,在 105℃干燥箱
中干燥 3h,冷却后称重,计算干膏收率。
2.5正交试验设计 称取番石榴 叶 lOOg,以乙醇
浓度、料液比、提取时间、提取次数为影响因素的三个
不同水平进行考察 ,以总黄酮含量、槲皮素含量、干膏
收率为评价指标,对提取工艺进行考察,确定最佳的提
取工艺参数。因素水平设计见表 3。
表 3 因素水平袁
按表 3的“因素水平表”进行试验 ,提取 9份滤液
为供试液,按总黄酮含量测定方法和槲皮素含量测定
方法进行含量测定 ,并计算 干膏收率 ,结果见表 4、表
5。
表 4 番石榴叶醇提正交试验结果
Y一(yl/ylmax)×5O+ (y2/y2max)×30+ (y3/y3max)×20
表 5 番石榴叶醇提方差分析表 表 6 番石榴叶醇提工艺验证试验
直观分析结果表明,乙醇提取番石榴叶总黄酮的
影响因素主次顺序为:D>c>A>B。
方差分析结果表明:D因素的影响最显著。确定最
佳工艺为 A2B3C1D3。
2.6番石榴叶醇提工艺验证试验 称取番石榴叶
3份,每份 lOOg,按上述最佳
进行试验。结果如表
6所示 。
从上述试验结果可知,总黄酮平均含量为 7.11g/
lOOg;槲皮素平均含量为 12.44mg/lOOg;平均干膏收
率为 15.33%。
所筛选出的工艺合理可行,具有可
操作性和重现性。
3 讨 论 本实验采用正交试验设计,以总黄酮
含量、槲皮素含量、干膏收率的综合评分为检测指标,
分析了得率和含量,比较客观的反映出各因素水平对
番石榴叶提取工艺的影响。从 R值分析得出,影 响乙
醇提取番石榴叶总黄酮的影响因素主次顺序为:D>C
>A>B。即提取 3次时 ,番石榴叶中的总黄酮才能基
陕西中医 2009年第 30卷第 11期 1531
本 被 提 取 完 全。综 合 分 析 ,最 佳 工 艺 条 件 为 :
A2B3C1D3,70%乙醇,1O倍 乙醇 量,提 取 3次 ,每次
1h的方法可以获得较高的提取率。
参考文献
[1] 徐鸿华.中草药彩图
(一)EM].广州:广东科技出
版社 ,2003:124—125.
E23 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(第
五册)EM].上海 :上海科学技术出版社 ,1998:642. ‘
E33 黄 勇.郑 林.李勇军,等.养耳菊中总黄酮含量
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[5] 国家药典委员会.中国药典一部.北京:化学工业出
版社 ,2005.
(收稿 2009—05—15;修回 2009—07—29)
HPLC法测定丹参茵陈胶囊中丹参酮 ⅡA的含量
谢 珊 贾宪生△ 杨基森▲ 贵阳中医学院第二附属医院(贵阳550003)
摘 要 目的:建立丹参茵陈胶囊中丹参酮 Ⅱ 含量的高效液相 色谱测定方法。方法:采用
ZoRBAX SB C18柱,4.6×150mm(Agilent公 司),甲醇 :水 (75:25)为流动相,流速:
lmL/min,柱温:30|C,检测波长 270nm。结果:丹参酮 ⅡA在 8.69 g~86.88 g范围内线
性关系良好;r一0.9998,平均回收率为 98.38 ,RSD一0.70 。结论 :本法简便 ,重现性
良好 ,可用于丹参茵陈胶 囊的质量控制。
主题词 复方/化学 丹参酮 Ⅱ /分析 色谱法,高效液相
丹参茵陈胶囊是治疗肝 炎的经验方 ,由丹参、茵
陈、白术和泽泻等多味中药组成,经加工制备而成的新
药制剂。丹参为方中主药,丹参酮 Ⅱ 是中有效成分之
一
,其药材含量测定方法报道有用高效液相色谱法测
定[1],本文报道用高效液相色谱法测定丹参酮 Ⅱ_A含
量的方法[2],为丹参茵陈胶囊质量标准的建立提供含
量测定方法 。
1 仪器与试药 日本岛津 LC一20AT高效液相
色 谱仪 (二元泵 ,SPD一20A 紫外检测器 ,HF一230A
柱温箱,LC—Solution色谱工作站);丹参酮 ⅡA对照品
由中国药品生物制 品检定所提供 (批号 0766—9606);
电子天平 (METTLER XS205,瑞 士),实验室专用超
纯水机 (WP—UP—III—lO,四川沃特尔科技发展有
限公司)。甲醇为色谱纯(天津科密欧化学试剂开发中
心),水为超纯水,其它试剂均为分析纯。丹参茵陈胶囊
及缺丹参阴性样 品,由本院制剂室制备 。
2 方 法 与 结 果 2.1 色谱 条 件 色 谱 柱 :
ZORBAXSB C18Column(150ram×4.6mm,5 m),流
动相 :甲醇 :水 (75:25);紫外 检测波长:27Ohm;柱
温 :3O℃,流速 :lmL/min,进样体积 :5 L。在上述条件
下,丹参茵陈胶囊中丹参酮 Ⅱ 达到基线分离,且样品
中其它成分色谱峰对丹参酮 Ⅱ 测定无干扰。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮 Ⅱ
对照品适量,用 甲醇溶解,转移至 50mL棕色容量瓶
△通讯作者;
▲贵阳 中医学院 (55ooo2)
中,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,制成每 lmL含 0.2172mg的
对照品溶液储备液。精密量取 4mL对照 品溶液储备
液 ,置 100mL棕色容量瓶 中,加 甲醇至刻度 ,摇匀 ,制
成每 lmL含 0.00869mg的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取丹参茵陈胶囊内
容物 1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入甲醇 50mL,
称定重量 ,水浴上 回流提取 1h,放冷 ,再称定重量,用
甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,取续滤液,作为供试
品溶液 。另取去除丹参的阴性对照样品,按供试品溶液
的制备方法,制备阴性样品溶液。
2.4 线性关系考察 分别精密吸取丹参酮 Ⅱ
对照品溶液 1,2,4,6,8,lOlL,注入液相色谱仪 ,按上
述的色谱条件测定峰面积 ,以丹参酮 Ⅱ 峰面积值为
纵坐标 ,进样量( g)为横坐标 ,绘制标准曲线。
结果表 明,丹参酮 ⅡA在 8.69 g~86.88 g范 围
内线性关系良好 。
2.5 精密度试验 精密吸取丹参酮 Ⅱ 对照品
溶液 5 L,按照“色谱条件”中的方法测定,重复进样 5
次 ,RSD为 0.96 。
2.6 重复性试验 分别取同一批丹参茵陈胶囊
内容物 5份,按 2.3项下“供试液的制备”操作,按上述
“色谱条件”下进行测定,计算丹参酮 Ⅱ 的平均含量
为 0.27mg/g,RSD为 0.73 。
2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液,室温
放置,分别于 0,2,4,6,lOh测定峰面积值,结果表明,
丹参酮 Ⅱ 在 10h内稳定性良好,RSD为 1.O4 。
2.8 回收率试验 取已知含量的丹参茵陈胶