原因不明复发性流产蜕膜CD4_CD25_C_省略_im_Treg细胞对自然杀伤细

研究与探索 基金项目:国家自然基金重点项目 ( 30530740 /C030304 ) 作者单位:上海交通大学医学院仁济医院妇产科,上海 200001 (第一作者现就职于上海市第一妇婴保健院妇科 ) 通讯作者:林其德,电子信箱: sh linq id e@ hotm ai.l com 本文为我刊绿色通道投稿 文章编号: 1005- 2216( 2010) 08- 0604- 04 原因不明复发性流产蜕膜 CD4+ CD25+ CD127dim /- Treg 细胞对自然杀伤细胞的功能调控 鲍时华,殷广洁, 邱丽华,林其德 摘要: 目的 探讨原因不明复发性流产 ( URSA )患者蜕膜 CD4+ CD25+ CD127d im /-T reg细胞对自然杀伤 ( NK )细胞 的功能调控。方法 留取 2007年 2月至 2009年 2月上海交通大学医学院仁济医院 5例 URSA患者 ( URSA组 ) 和 5例正常早孕人流妇女 (对照组 )蜕膜组织, 制备成单个核细胞悬液, 用免疫磁珠分离法分离出 CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg细胞和 NK细胞, 将 CD4+ CD25+ CD127d im /-T reg细胞和 NK细胞共培养,用 LDH释放实验测定共培 养后 NK细胞毒性变化, FCM法测定共培养后 NK细胞胞内 IFN-C、穿孔素 ( perforin)产生情况。结果 共培养后 对照组和 URSA组 NK细胞的毒性均比单独纯化 NK细胞的毒性明显降低 (P = 0. 002, P = 0. 03) , URSA组 NK细 胞毒性较对照组高 (P < 0. 001) ;对照组和 URSA组 NK细胞内细胞因子 INF-C、per fo rin的水平分别较单独纯化 NK细胞内细胞因子水平明显降低 [ INF-C(P = 0. 001, P = 0. 02) ; perforin(P = 0. 01, P = 0. 03) ], URSA组 NK细胞 INF-C、per fo rin的表达较对照组高 (P < 0. 001, P < 0. 001)。结论 CD4+ CD25+ CD127d im /-T reg细胞对 NK细胞功 能有抑制作用; URSA中 T reg细胞免疫抑制功能的下降,是 NK细胞的活化异常和毒性增加的原因之一。 关键词: 原因不明复发性流产; CD4+ CD25+ CD127dim /-调节性 T细胞; 自然杀伤细胞; IFN-C; 穿孔素;细胞毒性 中图分类号: R71 文献标志码: A Effec ts of decidual CD4+ CD25+ CD127d im/- Treg cells on natura l k iller cells func tion in patients w ith URSA. BAO Shi-hua, YIN Guang-j ie, QIU L i-hua, LIN Q i-de. Departm en t of Obstetrics and Gynecology; R enj i H osp ital, Shanghai J iao Tong University School of M ed icine, Shanghai 200001, China Abstrac t: Objec tive To investigate the impact of decidua l CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg cells on NK ce lls function in patients w ith URSA. Methods The deciduasm ononuc lear cells from URSA patients and no rma l pregnantw om en we re -i so lated and co llec ted by F ico ll density g radien t centrifuga tion, and CD4+ CD25+ CD127d im /- T reg ce lls and NK ce lls w ere obta ined byM agnetic cell sorting. W ith the presence of T reg cells, the production of intrace llu lar IFN-C, perfor in o f NK ce lls w ere de tected w ith FCM, and NK cells cytotox icity w as estim a ted by using LDH re leasing assay. Resu lts The pro- duction o f IFN-C, perfor in and cy totox ic ity o fNK cellsw ere decreased in the presence of T reg, m ore cyto tox ic ity NK ce lls w ith h ighe r lev el of intrace llular IFN-C and perfor in we re found in URSA, and the effect o f CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg ce lls on NK ce lls functions was sign ificantly decreased in URSA. Conclusion CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg ce lls can in- h ib it the function o fNK cells. Decreasing imm unosuppressive capac ity o f CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg ce lls m ay be one o f the causes fo r h ighe r cy to tox ic ity NK cells in URSA. K eywords: unexpla ined recurrent spontaneous abortion; CD4+ CD25+ CD127d im /- regulato ry T ce l;l NK ce lls; IFN-C; pe rfo r- in; cytotox icity CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg细胞在维持机体免疫耐受、 防止自身免疫疾病的发生中有关键性作用, 是目前免疫学 界研究的热点。随着研究的深入, 目前发现 CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg细胞犹如 /细胞警察0,全面监控免疫系统并 维持免疫系统的稳定 [1]。这一细胞通过与其它免疫细胞 如自然杀伤 ( NK )细胞、CD4+ CD25- T细胞、CD8+ T细胞、 NK T细胞、B细胞、树突细胞等直接接触而调控这些细胞 的功能 [ 2-4]。作为维持母胎免疫耐受的两类主要免疫细 胞, T reg与 NK细胞两者之间必然存在联系,两者之间的数 量和功能的平衡对正常妊娠的维持有着重要的作用 [ 5]。 那么在原因不明复发性流产 ( URSA )患者蜕膜中 CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg细胞免疫抑制功能下降是否能够引 起 NK细胞的功能变化, 目前尚无文献报道。因此, 本文通 #604# 中国实用妇科与产科杂志 2010年 8月 第 26卷 第 8期 过体外试验, 分析 URSA 患者蜕膜组织 CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg细胞对 NK细胞杀伤毒性和 NK细胞胞内细 胞因子产生的影响, 探讨 CD4+ CD25+ CD127dim /- T reg细胞 调控 NK细胞功能在母胎免疫耐受中的作用。 1 资料与方法 1. 1 研究对象 URSA组: 为 2007年 2月至 2009年 2月 就诊于上海交通大学医学院仁济医院门诊 URSA患者 5 例。年龄 26~ 37( 30. 57 ? 2. 82)岁。流产时孕 48~ 89( 65. 43 ? 11. 25) d。超声提示胚胎停止发育,无心管搏动。UR- SA的诊断依据是: ( 1)患者有 3次或 3次以上自然流产史, 而无活产史。 ( 2)夫妇双方和 (或 )胚胎染色体正常, 无家 族遗传病史。 ( 3)妇科检查、超声检查和 (或 )子宫输卵管 造影等检查排除患者器质性病变和生殖器官解剖畸形。 ( 4)月经周期正常, 基础体温双相, 超声监测排卵正常。 ( 5)男方精液分析正常。 ( 6)性激素、甲状腺功能、血糖、胰 岛素等内分泌检查均正常。 ( 7)排除生殖道感染性疾病, 如真菌、支原体、衣原体等感染。 ( 8)自身抗体。包括抗核 抗体 ( ANA )、抗可提取性核抗原 (抗 ENA )抗体 (包括抗 Sm, 核糖核蛋白 RNP抗体, SS2A、SS2B抗体 )、抗心磷脂抗 体 ( ACL, 检查 5次, 每次间隔 3 ~ 4周 ) 、抗甲状腺抗体 ( TPO-ab、TG-ab)、抗 B2-糖蛋白 Ñ 抗体 ( B2-GPÑ )均为阴 性。 ( 9)血栓前状态有关的检查: 包括血小板聚集实验 ( P agT )、D-二聚体、血小板 A颗粒膜蛋白-140( GMP-140) 、 血凝系列、全血分析均正常。 ( 10)巨细胞病毒、弓形虫等 病原体检查 IgM均为阴性。 ( 11)全身免疫功能状态检查, 包括 IgG、IgM、IgA、C3、C4、CH 50、B 因子均正常。 ( 12)微 量淋巴细胞毒试验 (MLCT )阴性。 对照组: 为同期选取的就诊于门诊, 妊娠 12周以内要 求人工流产的正常妊娠妇女 5例。年龄 22~ 35( 29. 09 ? 2. 98)岁。流产时孕 48~ 77( 60. 40 ? 7. 86) d。既往无自然 流产、死胎、死产史, 无遗传、解剖、内分泌方面的异常及感 染、自身免疫性疾病史。本次妊娠期间无阴道流血、腹痛等 先兆流产症状和体征; 超声证实胚胎发育正常, 有心管搏 动。URSA组与对照组年龄和孕龄差异无统计学意义 (P > 0. 05)。 1. 2 细胞株 K562 hum an mye loid leukem ia cells ( ATCC co llection, USA ) 1. 3 主要试剂 荧光素标记的抗体, 包括 : 鼠抗人 CD4- APC,鼠抗人 CD25-PE , 鼠抗人 CD127-A lexa 647, 鼠抗人 CD3-F ITC, 鼠抗人 CD56-Cy5. 5, ant-i IFN-C抗体和 ant-i per- for in抗体, 同型对照 anti -m ouse IgG1, 2a等 ( BD B iosc-i ences); F ico l-l Paque prem ium ( GE H ea lthcare ); RMPI-1640 完全培养液 ( G ibco公司 ) ; 胎牛血清 ( H yc lone公司 ); dynabeads regu la to ry CD4+ CD25+ CD127dim /- T ce ll iso lation k it和 NK ce ll iso la tion k it (德国 M iltenyiB iotech 公司 ); dynabeads CD3 /CD28 T cell expander( Inv itrogen公司 ); ce ll counting k it 8 ( Do jindo,日本 ); 丝裂霉素,弗波脂,离子霉素 (美国 S igm a公司 ); 蛋白质转运抑制剂 (美国 BD Pharm in- gen公司 )。 1. 4 主要溶液及配制 ( 1) MACS细胞分选用缓冲液: 在 PBS pH 7. 2中, 内含 0. 5% BSA和 2mmo l/L EDTA, 过滤除 菌,存于 4e 冰箱备用。 ( 2)固定液: 4% (或 2% ) parafom a- ldehyde ( S igm a Chem ic l Co, USA ) 无 Ca2+ /M g2+离子 PBS。 ( 3)穿透液: 0. 1% sapon in ( S igm a Chem ic l Co, USA ), 1% 胎牛血清, 无 Ca2+ /Mg2+离子 PBS。 1. 5 主要仪器 Eppendorf 5810R离心机 ( Eppendorf公 司 ); FACSCalibur流式细胞仪 (美国 BD公司 ); MACS分离 器和 M S 分离柱 (德国 M ilteny i B io tech 公司 ) ; O lympus BX50生物显微镜 ( 日本 O lym pus公司 ); 超净工作台 CA92-3(上海净化设备厂 ) ; Fo rma Ser ieÒ W ater Jacketed CO2 Incubator(美国 Therm o公司 ) 1. 6 方法 1. 6. 1 蜕膜单个核细胞制备 留取无菌蜕膜组织,用 PBS 漂洗,除去血凝块, 剪碎, 研磨, 过 300目筛网成单细胞悬 液。按 1B 1体积比平铺于 F ico ll淋巴细胞分离液上, 2000 r /m in离心 30 m in, 收集单个核细胞悬液备用。 1. 6. 2 K562细胞复苏及培养 取冻存于液氮中的 K562 细胞株,置于 37e 水浴箱内, 快速融化冻存液。将细胞悬 液移入离心管, 加入 4mL培养液 (含 10% FBS的 RPM I- 1640培养液 ), 1200 r /m in, 离心 5m in, 弃上清,将 K562细胞 接种于 35mm细胞培养皿中。每 3d换液,观察细胞生长状 态,待用。 1. 6. 3 T reg细胞和 NK细胞的分选和纯化 分别取 URSA 组和对照组蜕膜单个核细胞悬液, 用免疫磁珠法分选和纯 化 CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg细胞和 CD3-CD56+ NK细胞。 1. 6. 4 蜕膜 NK细胞 ( dNK )毒性 LDH 释放试验 用含 5%胎牛血清的 RPM I-1640培养液将靶细胞 K562调整到 5 @ 104 ~ 2 @ 105 /mL。在 96孔圆底细胞培养板中加入靶细 胞,每孔加 100LL。 3个效应细胞自然释放对照孔不加靶 细胞,只加 100LL培养液。 PBS洗涤纯化的 dNK细胞, 按 dNK细胞与 K562细胞比例 ( EB T )为 1. 25B 1, 2. 5B 1, 5B 1, 10B 1, 20B 1,向各孔加 100LL效应细胞 ( NK细胞 )。 自然释放孔不加效应细胞只加 100LL培养液 ,最大释放孔 中加 100LL 1% NP40。每个实验置 3个复孔。置 37e , 5% CO2的培养箱中培养 4~ 6h。离心培养板 200g 10m in。 每孔吸出 150LL上清液, 对应加入另一块 96孔酶联检测板 中。向第二块板每孔依次加 20LL 0. 4m o l/L乳酸溶液、 20LL 4mmo l/L 2-p-碘苯酯-3-p-氯化硝基苯四唑, 20LL反应 液 (含 0. 03% BSA, 2700U /L硫辛酰胺脱氢酶, 4. 5mm ol/L 氢化型辅酶 I( NAD+ ), 1. 2% 蔗糖的 PBS), 室温中放置 20m in。在酶联检测仪上测定各孔 OD 值, 检测波长 492nm,参考波长 650nm。NK细胞杀伤毒性的计算: NK细 胞杀伤毒性 (% ) = 100% @ [ ( OD实验组 - OD总自然释 放 ) /( OD最大释放组 - OD总自然释放 ) 1. 6. 5 T reg细胞与 dNK细胞共培养后 NK细胞毒性测定 #605#中国实用妇科与产科杂志 2010年 8月第 26卷第 8期 将 CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg细胞和 dNK细胞按 0B 1, 1B 1, 1B 2; 1B 5, 1B 10的比例加入 96孔板中共培养 48h。 收集培养至对数生长期的 K562细胞,用 PBS洗涤, 调整细 胞密度至 1 @ 108 /L, 加入至 96孔板, 100LL /孔, 置 37e , 5% CO2的二氧化碳培养箱中培养 4~ 6h, 在酶联检测仪上 测定各孔 OD值, 检测波长 492nm, 参考波长 650nm, 计算 NK细胞杀伤毒性。 1. 6. 6 NK细胞胞内 IFN-C和穿孔素 ( perfor in)检测 T reg 细胞与 NK细胞共培养后收获 NK细胞, 用 PBS洗涤, 加入 弗波脂 (终浓度 25 Lg /L ) 、离子霉素 (终质量浓度 1m g /L ) 和蛋白质转运抑制剂 (终质量浓度 0. 66 m g /L ), 混匀, 于 37e 5% CO 2培养箱培养 4~ 6 h。加入 ant-i CD3和 ant-i CD56单克隆抗体各 10LL, 在避光处室温反应 30m in。用 PBS洗二次 , 用含 4% parafom a ldehyde无 Ca2+ /Mg2+离子 PBS固定 5m in, 加入 015mL 0. 1% Sapon in穿透液在室温下 孵育 20m in。加入 ant-i IFN-C和 ant-i perfo rin抗体各 10LL, 在避光处室温反应 30m in。用 PBS洗 2 次, 再用含 2% parafom a ldehyde无 Ca2+ /M g2+离子 PBS固定 5m in, 上流式 细胞仪检测。同时设各抗体同型对照。 1. 7 统计学方法 实验数据以均数 ? 差表示, 用 G raphPad Pr ism 5软件进行统计学分析,两组间比较采用两 独立样本 t检验, P < 0. 05有统计学意义。 2 结果 2. 1 不同效靶比 ( EB T )时 NK细胞对 K562杀伤毒性 随着 NK和 K562效靶比的增加, 两组 NK细胞的毒性均逐 渐增加, 当 EB T为 10B 1时, NK细胞杀伤毒性最强; 当效 靶比增加至 20B 1时, NK细胞杀伤作用不再增加, 所以本 研究中 NK细胞毒性检测均采用 NK细胞: K562= 10B 1的 比例。 EB T= 10B 1时, URSA组 NK细胞毒性较对照组显 著增高 ( 50. 70% ? 11. 73% 对 33. 24% ? 8. 28% , P = 01 001)。 2. 2 不同 EB T值时 T reg细胞对 NK细胞杀伤毒性影响 将 T reg与 NK细胞按不同比例共培养, 当 T regB NK细 胞 = 1B 1时, NK细胞毒性最低, 所以本研究中 T reg细胞对 NK细胞毒性抑制实验均采用 T regB NK细胞 = 1B 1的比 例。T regB NK细胞 = 1B 1时, URSA组 NK细胞毒性较对 照组高 ( 40. 60% ? 7. 71% 对 22. 05% ? 51 41% , P < 01 001)。 2. 3 蜕膜 T reg细胞对 NK细胞毒性抑制作用 T reg细胞 和 NK细胞共培养后对照组和 URSA组 NK细胞杀伤毒性 均较单独纯化 NK细胞的毒性降低 ( 22. 05% ? 5. 41% 对 33. 24% ? 8. 28% , P = 0. 002; 40. 60% ? 7. 71% 对 50. 70% ? 11. 73% , P = 0. 03), 但与对照组相比, URSA组 NK细胞 毒性较高 ( 50. 70% ? 11. 73% 对 33. 24% ? 8. 28% , P = 01 001; 40. 60% ? 7. 71%对 22. 05% ? 5. 41% , P < 01001)。 对照组和 URSA组 T reg细胞分别与对照组 NK细胞共 培养, 前者 NK细胞毒性较后者 NK细胞的毒性明显降低 ( 22. 05% ? 5. 41%对 28. 04% ? 6. 80% , P = 0. 04); 对照组 和 URSA组 T reg细胞分别与 URSA组 NK细胞共培养, 前 者 NK 细胞的毒性也明显降低 ( 28. 59% ? 8. 35% 对 401 60% ? 7171% , P = 0. 004)。 对照组 T reg细胞分别与对照组和 URSA组的 NK细胞 共培养后, NK细胞毒性基本接近。URSA组的 T reg细胞分 别与对照组和 URSA组的 NK细胞共培养后, URSA组 NK 细胞毒性明显高于对照组 ( 40. 60% ? 7. 71%对 28. 04% ? 6. 80% , P = 0. 001)。 2. 4 T reg细胞对 NK细胞胞内 IFN-C合成的影响 用流 式细胞技术检测 T reg对 NK细胞胞内 INF-C合成的影响。 加入 T reg细胞后, 对照组和 URSA组 NK细胞 INF-C产生 均较单独纯化 NK 细胞的 INF-C明显降低 ( 10. 95% ? 4. 16%对 20. 11% ? 5. 81% , P = 0. 001; 25. 05% ? 6. 59% 对 33. 73% ? 9. 05% , P = 0. 02), URSA组 NK细胞 INF-C的表 达较对照组高 ( 33. 73% ? 9. 05% 对 20. 11% ? 5. 81% , P = 0. 001; 25. 05% ? 6. 59%对 10. 95% ? 4. 16% , P < 0. 001)。 对照组和 URSA组 T reg细胞分别与对照组 NK细胞共 培养,前者 NK细胞分泌的 INF-C减少 ( 10. 95% ? 4. 16% 对 16. 43% ? 2. 75% , P = 0. 03)。对照组和 URSA组 T reg 细胞分别与 URSA组 NK细胞共培养,前者 NK细胞分泌的 INF-C减少 ( 16. 43% ? 2. 75% 对 25. 05% ? 6. 95% , P = 01001)。 对照组 T reg细胞分别与对照组和 URSA组 NK细胞共 培养,两组 NK细胞内 INF-C水平相当。URSA组 T reg细胞 分别与对照组和 URSA组 NK细胞共培养, URSA组 NK细 胞内 INF-C的 分泌明 显增高 ( 25. 05% ? 6. 59% 对 15. 47% ? 4. 64% , P = 0. 001)。 2. 5 T reg细胞对 NK细胞胞内 per fo rin合成的影响 用流 式细胞技术检测 T reg对 NK细胞胞内 perfor in合成的影响, 加入 T reg细胞后, 对照组和 URSA组 NK细胞 perforin产生 均 较 单 独 纯 化 NK 细 胞 的 perfor in 明 显 降 低 ( 2. 50% ? 1181%对 5. 42% ? 2. 64% , P = 0. 01; 6. 74% ? 2. 34%对 10. 00% ? 3. 89% , P = 0. 03) , URSA组 NK细胞 perforin的表达较对照组高 ( 6. 74% ? 2. 34%对 2. 50% ? 1. 81% , P < 0. 001; 10. 00% ? 3. 89%对 5. 42% ? 2. 64% , P = 0. 006)。 对照组 T reg细胞和 URSA组 T reg细胞分别与对照组 NK细胞共培养, 前者 NK细胞分泌 perfor in减少 ( 2. 50% ? 1. 81%对 4. 47% ? 2. 18% , P = 0. 04)。对照组 T reg细胞和 URSA组 T reg细胞分别与 URSA组 NK细胞共培养, 前者 NK细胞分泌的 perfor in减少 ( 3. 44% ? 1. 35%对 6. 74% ? 2. 34% , P = 0. 001)。 对照组 T reg细胞分别与对照组和 URSA组 NK细胞共 培养,两组 NK细胞内 perfor in水平相当。URSA组 T reg细 胞分别与对照组和 URSA组 NK细胞共培养, URSA组 NK 细胞内 perfo rin 的分泌明显增高 ( 6. 74% ? 2. 34% 对 4147% ? 2. 18% , P = 0. 04)。 #606# 中国实用妇科与产科杂志 2010年 8月 第 26卷 第 8期 3 讨论 NK细胞是体内一类独特的淋巴细胞亚群, 是机体天 然免疫系统的主要成员, 具有早期识别及清除病毒感染和 肿瘤细胞等多种生物学功能。虽然只占外周血淋巴细胞的 5% ~ 15% ,但对刺激性因素产生应答的过程十分迅速, 与 T细胞应答相互补充, 共同承担机体的免疫防御和免疫监 视任务。正常妊娠早期, NK细胞大量浸润子宫蜕膜,且其 表面抑制性受体优势表达, 与着床处入侵的胎盘滋养层细 胞紧密接触, 相互识别, 对胚胎植入、早期胎盘形成及胎儿 生长发育可能起调节作用, 流产发生时 NK细胞的毒性和 活性均明显增加。因此 ,蜕膜 NK细胞应是胚胎耐受母体 免疫排斥的第一道屏障, 其在妊娠、胚胎植入、不孕和复发 性流产中的有着重要作用 [ 6]。 T reg细胞是具有免疫抑制作用的细胞群, 它在维持母 胎耐受机制的建立和维持中起很重要的作用, 笔者前期研 究结果证实 URSA患者蜕膜中的 CD4+ CD25+ CD127dim /- T reg细胞不仅数量减少, 而且免疫抑制功能发生明显下降。 作为维持母胎免疫耐受的两类主要免疫细胞, T reg细胞与 NK细胞两者之间必然存在相互关联作用, 两者之间的数 量和功能的平衡对正常妊娠的维持有着重要的作用。T reg 细胞除了与其它免疫细胞如 CD4+ CD25-T细胞、CD8+ T细 胞、NKT细胞等直接接触而调控这些细胞的功能外, 也可 以通过与 NK细胞的直接接触而调控 NK细胞的功能。随 着对 T reg细胞调节功能研究的关注,其对 NK细胞影响的 报道也逐渐增多 [ 7]。 但目前尚未见研究涉及人类妊娠状态 T reg细胞对 NK 细胞的功能调控。URSA中 NK细胞活性和杀伤毒性的增 加是否与 T reg细胞的免疫抑制功能降低有关, 为证实这种 推测, 本文将从蜕膜中分离出的 CD4+ CD25+ CD127dim /-T reg 细胞和 NK细胞进行体外共培养, 观察 T reg细胞对 NK细 胞杀伤毒性的影响。结果发现 :共培养后正常早孕蜕膜 NK 细胞杀伤毒性较弱, URSA组 NK细胞杀伤毒性明显增强, 说明 URSA中 T reg细胞对 NK细胞毒性抑制功能下降。为 进一步阐明 URSA中 T reg细胞功能下降可以导致 NK细胞 毒性增加, 本文又将 URSA组和对照组纯化的 T reg细胞和 NK细胞进行两两交叉混合培养,分析 T reg细胞对 NK细胞 杀伤毒性的影响。结果发现: 对照组和 URSA组 T reg细胞 分别与对照组 NK细胞共培养, 前者 NK细胞毒性较后者 NK细胞的毒性明显降低; 对照组和 URSA组 T reg细胞分 别与 URSA组 NK细胞共培养, 前者 NK细胞的毒性也明显 降低; 对照组 T reg细胞分别与对照组和 URSA组的 NK细 胞共培养后, NK细胞毒性基本类似; URSA组的 T reg细胞 分别与对照组和 URSA组的 NK细胞共培养后, URSA组 NK细胞毒性明显高于对照组。这说明正常功能 T reg细胞 可以抑制 URSA患者 NK细胞毒性至正常水平, 功能减低 的 T reg对正常早孕妇女 NK细胞毒性抑制作用也弱, 这更 进一步证实 URSA中 T reg细胞免疫抑制功能下降, 能够引 起 NK细胞毒性异常增加。 NK细胞除了上述的细胞毒性外, 它还能大量的分泌 细胞因子, 从而调节免疫反应 [ 8]。 perfo rin是一种存在于 NK细胞胞浆的细胞毒颗粒中的糖蛋白 [ 9]。当 NK细胞受 到抗原刺激后, 效应靶细胞识别, 胞浆颗粒重定向, 移至效 应靶细胞接触部位, 通过出胞作用以分泌性溶酶体形式将 perforin释放到细胞间隙。它是 NK发挥杀细胞毒性的重 要途径,也是 NK细胞活性标志。 IFN-C也是蜕膜 NK细胞 分泌的细胞因子之一 [ 10]。它在 NK细胞活化或毒性增强 时合成分泌增多。本文结果显示, 共培养后 URSA组 NK 细胞 perfor in和 IFN-C的表达均比对照组高, 加入 T reg细 胞可抑制明显 NK细胞胞内 perfor in和 IFN-C的合成, 而且 NK细胞胞内 perfor in和 IFN-C合成与 NK细胞毒性变化具 有较好的一致性。 目前认为 T reg细胞对 NK细胞的功能调控是通过多种 途径得以实现,在 URSA中是否还存在其他调控途径,这有 待于进一步研究。 参 考 文 献 [ 1 ] W ick elgren I. 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