广州中医药大学
博士学位论文
当归饮子对慢性荨麻疹迟发相过敏反应的影响研究
姓名:肖红丽
申请学位级别:博士
专业:中医外科学
指导教师:崔学教
20060401
摘 要
1研究目的
针对既往对慢性荨麻疹的研究基本集中在速发相阶段的情况,尤其中药对慢性荨
麻疹迟发相阶段的影响研究基本为空白,本课题首次从抑制迟发相过敏反应的角度研
究中药复方治疗慢性荨麻疹的机理。研究当归饮子对慢性荨麻疹迟发相的影响及对迟
发相阶段最重要的炎性介质自三烯B4的抑制作用。从抗炎角度阐明当归饮子治疗慢
性荨麻疹的作用机制,从而在治疗慢性荨麻疹方面开拓新的治疗方法和研究思路。
2研究方法
2.1文献研究
文献,系统了解慢性荨麻疹的研究现状。确认中药治疗慢性荨麻疹的基础研
究偏少,尤其中药对慢性荨麻疹迟发相阶段的影响研究基本为空白。
2.2临床研究
采用单盲随机对照法,将合格的120个病例随机分为A、B、C、D四组。A组予当
归饮子,B组予咪唑斯汀,e组予孟鲁司特,D组予氯雷他定。比较各组治疗慢性荨麻
疹的近期、远期疗效、复发率,比较各组患者治疗前后血浆中白三烯B4的含量。
2.3实验研究
2.3.1小白鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验
采用随机对照法,将NIH小鼠致敏后,分为致敏对照组(A组)、当归饮子高剂量
组(B组)、当归饮子低剂量组(C组)、咪唑斯汀组(D组)、孟鲁司特组(E组)、氯雷他
定组(F组)、地塞米松组(G组),分别给药,再进行抗原攻击,30分钟后采血并处死
小白鼠。测定小白鼠血清中白三烯B4的含量。将小白鼠致敏皮片剪下,进行比色测
定。检测各组对小白鼠被动皮肤过敏反应的抑制率、血清中白三烯B4的含量,及二
者的相关性。
2.3.2致敏小鼠脾淋巴细胞释放白三烯B4的抑制实验
采用随机对照法,将BALB/c小白鼠分为正常对照组和致敏组。致敏组又分为致
敏对照组(A组)、二甲基亚砜(DMSO)组(B组)、当归饮子高剂量组(C组)、当归饮子低
剂量组(D组)、咪唑斯汀组(E组)、孟鲁司特组(F组)、氯雷他定组(G组)、地塞米松
组(H组)。分离致敏后小鼠的脾淋巴细胞,用IO%FCS一1640细胞培养液调整细胞浓度,
置于细胞培养板中。除当归饮子外,将其它各组药物分别溶于DMSO,稀释并过滤除菌,
分别加入各组小鼠脾淋巴细胞悬液中孵育作预处理。再加入致敏原进行刺激。离心,
收集上清液,以ELISA法检测细胞上清液中白三烯B4的含量。进行各组间比较。
3研究结果
3.1临床研究
慢性荨麻疹近期疗效的临床研究结果显示,当归饮子组、咪唑斯汀组、氯雷他定
组的近期疗效无显著性差异,均有很好的近期疗效(P>O.05);而孟鲁司特组的近期
疗效低于当归饮子组、咪唑斯汀组、氯雷他定组(P
O.i0);氯雷他定组治疗结束后4周及8周时的复发例数与当归饮子组、
咪唑斯汀组、孟鲁司特组比较均有显著性差异,复发率相对较高(P
0.25);孟鲁司特也能降低患者LTB4水平(P
0.50)。
3.2实验研究
3.2.1小白鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验
实验结果显示,当归饮子高剂量组、当归饮子低剂量组、咪唑斯汀组、孟鲁司特
组、氯雷他定组、地塞米松组各组对小白鼠PCA均有明显的抑制作用(PO.50);当归饮子低剂量组和盂鲁司特组对小鼠PCA的抑制作用再次之(P<
0.01),二组间的抑制率无显著性差异(P>O.50)。
当归饮子高剂量组、当归饮子低剂量组、咪唑斯汀组、孟鲁司特组、地塞米松组
血清LTB4含量明显低于致敏对照组、氯雷他定组,经统计学分析有显著性差异(P<
0.05);当归饮子高剂量组血清中LTB4含量明显低于当归饮子低剂量组,经统计学分
析有显著性差异(PO.05)。
3.2.2致敏小鼠脾淋巴细胞释放白三烯B4的抑制实验
致敏对照组的小鼠脾淋巴细胞释放LTB4的水平明显高于正常对照组(PO.50):
当归饮子高剂量组、当归饮子低剂量组、眯唑斯汀组、地塞米松组与致敏对照组、二
甲基亚砜组比较均有显著性差异(P表现出一定的
剂量依赖性。综上所述,当归饮子可以抑制慢性荨麻疹的迟发相过敏反应,当归饮子
对LTB4的抑制作用是其临床疗效的基础之一。
关键词:慢性荨麻疹 迟发相 白三烯 当归饮子
lll
EffectofChineseAngeIicaDecoctionon
Late—phasereactionofchronicurticaria
ABSTRACT
SpeciaIity:SurgeryofTradjtionalOh}Des8Medlcine
Author:XiaoHongIi
Tutor:CuiXuejiao
1 Objective
Sincetheresearchaboutchronicurticaria(cu)mainlyconcentratedonthe
early-phasereaction(EPR)ofitandthestudyabouttheeffectofChineseherb
onthelate—phasereaction(LPR)ofCUwasalmostblankinthepast,thistopic
researchthefunctionalmechanismofChineseherbonCUinrespectto
inhibitingthelate—phasereaction(LPR)forthefirsttime.Thistopic
researchtheinhibitoryeffectofChineseAngelicaDecoction(CAD)onLPRof
CUandleukotrieneB4whichisaveryimportantinflammatorymediatorinthe
LPRofCU.Thistopicwili expandnewtreatmentandresearchmethodforCU
attheangleofanti—inflammation.
2 Method
2.1Literatureinvestigation
Theliteratureonchronicurticaria(CU)wassummarizedinorderto
systematicallyfathomthecurrentsituationofCU.The1iterature
investigationindicatesthatthefoundationalresearchofChineseherbonCU
isscarce,andespeciallytheresearchaboutChineseherbonlate~phase
reactionofCUisalmostblank.
2.2C1inicalstudy
Adoptingtheruleofsingleblind,randomandcontrast,120caseswere
dividedintofourgroups,groupAtakingChineseangelicadecoction,groupB
takingMizolastine,groupCtakingMontelukast,andgroupDtakingloratadine-
Comparetheearlycurativeeffect,prostecdtiveefficacy,relapserateand
theserflm]evelof1eukotrieneB4inthefourgroups.
2.3Experimentalstudy
2.3.1Micepassivecutaneousanaphylaxistest(PCA)
Adoptingtheruleofrandomandcontrast,sensitizedNIHmiceweredivided
intosevengroups。thesensitizedcontrolgroup(groupA),high—dosegroupof
CAD(groupB),low—dosegroupofCAD(groupC),mizolastinegroup(group
D),montelukastgroup(groupE),loratadinegroup(groupF),dexamethasone
group(groupG).PCAwasinducedbyintraperitonealantiseruminjection.And
themiceweretreatedwithgastricinfusionsimultaneously.30minutesLater
afterthelastfeeding,antigenattackwasconducted.Thenthesemicewere
executed,theirbloodwascolleeted,andthesensitizedsectionofskinWaS
cutted.InhibitoryrateofPCAinsevengroupsweremeasuredbycolorimetric
determination.TheserumlevelofLTB4wasdetectedbyELISAmethod.
CorrelationbetweeninhibitoryrateofPCAandserumlevelofleukotriene
B4wasmeasured.
2.3.2InhibitiontestonreleaseofleukotrieneB4fromspleenlymphocytes
ofsensitizedmice
Adoptingtheruleofrandomandcontrast,BALB/cmiceweredividedinto
normalcontrolgroupandsensitizedcontrolgroup.Thesensitizedgroupwas
dividedintoeightgroups,thesensitizedcontrolgroup(groupA),DMSO
group(groupB),high—dosegroupofCAD(groupC),low—dosegroupofCAD(group
D),mizolastinegroup(groupE),montelukastgroup(groupF),loratadine
group(groupG),dexamethasonegroup(groupH).Miceweresensitizedby
intraperitonealinjectionsofOVA.Thespleenlymphocyteswereisolatedand
lymphocytesconcentrationwasregulatedwithcellculturesolution.Thenthe
spleenlymphocyteswereincubatedwithdrugsolutionabove—mentionedprior
toantigenre—attackwithOVA.ELISAwasappliedtodetectthelevelofLTB4
incellculturesupernateineverygroup.
3ResuIts
3.1CIinicalstudy
Statisticanalysisindicatedthatnodifferenceofearlycurativeeffect
wasfoundamongChineseangelicadecoction(A),mizolastine(B)and
V
loratadine(D)(P>0.05).Theearlycurativeeffectofmontelukast(C)waslower
thanotherthreegroups(P
O.10).TheprostecdtiveefficacyofgroupDwaslowerandthe
relapserateofgroupDwashigherthangroupA,B,C(P<0.05).Therelapse
intervalofgroupA,BandCwasobviouslylongerthangroupD(PO.25)andwassignificantly
lowerthanprior—treatment(PO.50).
3.2Experimentalstudy
3.2.1MicepassiveCUtaneousanaphylaxiStest(PCA)
GroupB,C,D,E,FandG couldsignificantlyinhibitPCAin
mice(P<0.001).Theinhibitoryrateofdexamethasone(groupG)wasstrongest
amonga11groups(P0.50).TheinhibitoryeffectofgroupC,Ewas
statisticallysimilar(P>O.50)andinferiortogroupB,D,F(P<0.001).
TheserumlevelofLTB4ingroupB,C,D,E,GwassignificantlYlowerthan
thatofgroupA(sensitizedcontrolgroup)andgroupF(PO.50).GroupC,D,E,HcouldsignificantlyinhibitthereleaseofLTB4from
spleenlymphocytes.ThereleaselevelofLTB4ingroupC,D,E,Hdiffered
statisticallYfromgroupA,B(P<0.01).TheinhibitoryeffectofgroupHwas
strongerthangroupC,D,E(P0.50四组性别构成无显著性差异
lO
当归饮子对慢性荨麻疹迟发相过敏反应的影响研究
表2荨麻疹患者年龄构成比较(岁)
P>O.50四组年龄构成无显著性差异
2.1.7处理措施:A组予当归饮子,每日一剂,水煎二次合汁,分二次口服;B组予
眯唑斯汀,每日lOmg口服;C组予孟鲁司特,每日lOmg口RE;D组予氯雷他定,每
日lOmg口服。均阻4周为一疗程,第4周结束时停药,进行近期疗效评定。并分别
于治疗结束后4周及8周时随访,进行远期疗效及复发率的评定。
2.1.8症状和体征评分标准:采用4级评分法,评分内容包括皮肤瘙痒、风团数量和
风团大小
皮肤瘙痒
风团数量
风团大小
0分为无瘁感,1分为轻度瘙痒,2分为中度瘙痒,3分为严重瘙痒。
0分为无风团,1分为l~6个,2分为7~12个,3分为>12个。
O分为无风团,1分为直径20mm。
2.1.9疗效判断标准治疗前后症状和体征评分的总和为总评分。
下降指数=(治疗前总评分一治疗后总评分)/治疗前总评分×100%。
疗效标准:①痊愈,下降指数=100%;②显效,60%4下降指数<100%;③有效,20%4
下降指数<60%;④无效,下降指数<20%。以痊愈与显效之和计算有效率。
2.1.10复发标准:对各组中痊愈的病例追踪观察8周,每4周随访1次,统计复发
率。
2.1.11辅助观察指标:设正常对照组30例,均为健康志愿者,无慢性疾病及过敏性
疾病史。检测