SNT 2700-2010 母羊地方流行性流产补体结合试验操作规程

书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业 !" ! #!"## " !#$# 母羊地方流行性流产补体结合 试验 $%&'&(&)&*(&+ , )-+-.'*/01'/&.'-2'*&%-.3&&'/(14&%'/&.&*-5-2 ! 67/.-(8)1+ 9 :/&2/2 " !#$#;$$;#$ 发布 !#$$;#%;#$ 实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 版权所有 · 禁止翻制、电子发售 书书书 前 !! 言 !! 本标准按照 !" ! #$%$ " &''( 给出的规则起草# 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口# 本标准起草单位$中华人民共和国湖北出入境检验检疫局%湖北省农业科学院畜牧兽医研究所# 本标准主要起草人$张汉协%刘泽文%陈平%徐涤平%段正赢%汪宏才%杨宜生# ! !" ! #!"## " !#$# 版权所有 · 禁止翻制、电子发售 母羊地方流行性流产补体结合 试验操作规程 $ ! 范围 本标准了母羊地方性流产&羊衣原体病'补体结合试验操作规程# 本标准适用于母羊地方流行性流产的血清学诊断和流行病学调查# ! ! 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的#凡是注日期的引用文件(仅注日期的版本适用于本文 件#凡是不注日期的引用文件(其最新版本&包括所有的修改单'适用于本文件# !"$()*( ! 实验室 ! 生物安全通用要求 % ! 缩略语 下列缩略语适用于本文件# +, & -./ 0 12/234567846.34294 '$补体结合试验 & ! 设备%材料和试剂 &%$ ! 器材$ $&:; 中注# &%' ! $? 绵羊红细胞悬液$制备方法见附录 " # &%( ! 抗原和标准阳性血清%阴性血清$由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所供应(按说明书使用# ' ! 采样%送检和处理 按常规方法采血(分离血清(要求不溶血%无腐败(在血清中加入 '%'$? 硫柳汞或 '%$? 叠氮钠防 腐( &@ " *@ 保存(试验前需 A*@ " A(@ 灭活 ;'/63 # ( ! 操作步骤 (%$ ! 预备试验 (%$%$ ! 补体效价滴定$试验前应对补体进行效价滴定#滴定方法见附录 > # (%$%! ! 溶血素效价滴定$试验前应对溶血素进行效价滴定(以后每隔 & 个月测定效价一次#滴定方法 见附录 + # $ !" ! #!"## " !#$# 版权所有 · 禁止翻制、电子发售 (%$%% ! 抗原%阳性血清效价滴定$抗原和阳性血清效价滴定的方法见附录 B # (%! ! 正式试验&包括试管法和微量法' (%!%$ ! 试管法$按表 $ 的程序操作#试验要同时设抗补体对照%阳性血清对照%阴性血清对照%抗原对 照%溶血素对照和生理盐水对照# 表 $ ! 补体结合试验&试管法' 单位为毫升 成分 被 ! 检 ! 血 ! 清 各 ! 项 ! 对 ! 照 试 ! 验 ! 管 抗补体 对照 阳性 血清 阴性 血清 抗原 对照 溶血素 生理 盐水 效 价 $C) $C* $C$D$C;&$CD)$C$&* $C) & 个工作量 $C) & 个工作量 血清 '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ & 工作量 抗原 '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ & 单位 补体 '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& 生理盐水 '%$ '%$ '%& '%) 混匀( )@$DE " $*E 感作(取出后 ;<@ 水浴 ;'/63 敏化 红细胞 '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& 混匀( ;<@ 水浴 ;'/63 结果 判定 # # FFF FF F G G # G G G # 全 不溶 全 不溶 &A? 溶 A'? 溶 %$ 测定补体效价# 表 $%$ ! 补体效价滴定 单位为毫升 组别 抗原 生理盐水 试管号 $ & ; ) A D < $ & ; ) A D < 二单位抗原 '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ G G G G G G G 生理盐水 '%&< '%&A '%&& '%&' '%$* '%$D '%$) '%;< '%;A '%;& '%;' '%&* '%&D '%&) $CD' 补体 '%'; '%'A '%'* '%$' '%$& '%$) '%$D '%'; '%'A '%'* '%$' '%$& '%$) '%$D 混匀( ;<@ 水浴 ;'/63 敏化红细胞 '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& 混匀( ;<@ 水浴 ;'/63 结果示例 # FFF FF F G G G # FFF FF F G G G 全 不溶 &A? 溶 A'? 溶 %$ 所示第 A 管 '%$&/H 为一个补体单位#而正式试验使用两个补体单位(原补体在使用时应稀释的倍数按下列公式计算$ 原补体应稀释倍数 I 使用时每管加入量 : 滴定时补体稀释倍数 一个单位量 :& I '%&:D' '%$&:& IA' &倍' ) !" ! #!"## " !#$# 版权所有 · 禁止翻制、电子发售 附 ! 录 ! % &规范性附录' $& 绵羊红细胞悬液的制备 %%$ ! 颈静脉采取成年健康公绵羊血液(以常规方法脱纤后(按 $C$ 加入红细胞保存液(混匀后分装成 A/H " $'/H 一瓶(封固后放 ) @ 冰箱可保存 & 个周(用前用生理盐水洗涤 ; 次(最后一次在 ;'''J ! /63 离心 A/63 (按红细胞泥容量加生理盐水配成 $? 红细胞悬液# %%! ! 红细胞保存液配方$葡萄糖 &'%A K (氯化钠 )%& K (柠檬酸三钠 * K (柠檬酸 '%AA K (蒸馏水加至 $'''/H ( $$A@&'/63 灭菌(备用# A !" ! #!"## " !#$# 版权所有 · 禁止翻制、电子发售 附 ! 录 ! ' &规范性附录' 溶血素效价滴定 '%$ ! 先将溶血素 $C$'' 稀释& '%&/H 含甘油的溶血素加 (%*/H 生理盐水'(按表 +%$ 稀释成不同倍 数(再按表 +%& 操作# 表 '%$ ! 溶血素稀释 单位为毫升 成 ! 分 管号及稀释倍数 $ & ; ) A D < * ( $''' &''' ;''' )''' A''' D''' <''' *''' (''' 生理盐水 ( $ & ; ) A D < * $C$'' 溶血素 $ $C$''' 溶血素 $ $ $ $ $ $ $ $ 表 '%! ! 溶血素效价测定 单位为毫升 成 ! 分 管号及稀释倍数 $ & ; ) A D < * ( 对照 $''' &''' ;''' )''' A''' D''' <''' *''' (''' 补体 $C$'' 溶血素 $? 红细胞 稀释熔血素 '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ ' '%$ ' 生理盐水 '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%; '%& '%A $CD' 补体 '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& '%& ' $? 红细胞 '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ '%$ 充分摇匀( ;<@ 水浴 ;'/63 结 ! 果 " " " " " " " F FF # " # 全溶 全溶 全溶 全溶 全溶 全溶 全溶