HPLC法测定六味地黄丸（浓缩丸）中丹皮酚的含量

· l20· 黑龙江医药 Heflon~iang Medicine Joumal VoL22 No．2 2009 80％～120％之间时，青蒿琥酯峰面积与其浓度呈很好的线性 关系，相关系数为 0．9998。 5．5 精密度及重复性 对批号为20021 101的供试品进行平等性试验，结果见3。 表3 青蒿琥酯含量测定精密度试验结果 结论：平行 6次测定，相对偏差为0．2％，不同实验 者测定结果偏差为0．07％，本方法重复性及中间精密度均 好，即精密度好。 1．5．6 准确度 采用标准加入法，即在同一个批号的供试品中加入三个 不同浓度的标准加入液，每个浓度平行 3次，计算回收率的 方法进行考察。 取对照品约 25mg，精密称定，置 15ml容量瓶中，加流动 相溶解并稀释至刻度，摇匀作为标准加入液。 精密称取批号为 20021101的供试品 (含量 99．7％) lOmg、12．5mg、15mg各 3份，置 1～9#lOml容量瓶中，在 1～ 3#瓶中精密加入 2．Oml标准加入液，在 4～6#瓶中精密 加入 2．5ml标准加入液，在 7～9#瓶中精密加入 3．Oml标 准加入液，再分别加流动相至刻度，摇匀，作为 80％、100％、 120％---个浓度的回收率测试液，依法测定，结果见表 4 表 4 青蒿琥酯含量测定准确度试验结果 由上表可知，9次测定，平均回收率为 99．8％，相对标准 偏差为0．30％，故本方法准确度好。 2 结论 通过方法学验证，采用本方法，专属性好，系统适用，且精 密度、准确度、线性均好，故本方法可用于青蒿琥酯含量测定。 参考文献 [1] 国家药典会编，‘中国药典》2005年版二部[s]． 收稿日期：2008—09—09 HPLC法测定六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚的含量 贾瑞艳 刘 影 哈尔滨圣泰制药股份有限公司(150025) 摘要 目的：采用 HPLC法测定六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚的含量．方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 甲醇 一水(70：3O)为流动相；检测波长为 274nm；流速 0．8ml／min；柱温：室温．结果：丹皮酚含量在 8．4～33．6 g／ml 范围内具有良好线性关系，r=0．99999，平均加样回收率为99．32％，RSD-I．2％(Il=9)．结论；结果表明，该方法方便快 捷、准确、灵敏度高、重现性好． 关键词：丹皮酚含量测定；六味地黄丸(浓缩丸)；高效液相 色谱 中图分类号：R927．2 文献标识码：A 文章编码：1006—2882(2009)02—1 20-03 Determination of Paeonol Content in Liuweidihuang Pill by HPLC 弛 HarbinSandtyPhamaceuticalCo．，ltd(Harbin 150000) Abstract 0bjectives：To determine Deonol Contert in Liuweidihuang Pi11 HPLC． Method：18 alkyl Silane bonded Si1ica to fi11 in the blank：methanol—water (70：30)for the mobile phase detection at 274nm：flow rate：0．8ml／min：column：room temperature．Result：paeonol content of 8．4～33．6 g／ml within the framework of a 1inear，r=O．99999，average recovery of 99．32％，RSD=I．2％(n：9)．Condusion：The results show that the convenient and fast，accurate，sensitive and reproducible． Kev Words：paeonol determination：Liuweidihuang pi11(Nong suwan)：HPLC 黑龙江医药 Heilongjiang Me~cme loumal VoL22 No．2 2009 ·l21· 六味地黄丸(浓缩丸)是由牡丹皮等六味中药组成的复 方制剂，收载于卫生部药品标准十一册“】。本品具有滋阴补 肾功效，临床多用于肝肾阴虚、虚火上炎腰膝酸软、头晕耳鸣 等症。处方中牡丹皮是六味地黄丸(浓缩丸)中 “三补三泻” 中的 “一泻”，牡丹皮为毛莨科芍药属牡丹的干燥根皮，具有 抗菌消炎作用。丹皮酚是牡丹皮的主要有效成分，也是六味 地黄丸(浓缩丸)含量测定的主要指标之一。六味地黄丸(浓 缩丸)中丹皮酚含量测定是采用水蒸气蒸馏一紫外分光光度 法，操作耗时，方法陈旧。高效液相色谱法具有高分离能力、 高灵敏度、应用广泛的特点。而采用高效液相法 (}珏)LC)测定 六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚的含量，测定快捷、准确、可 靠。 1 仪器与材料 日本岛津 LC-10ATVP高效液相色谱仪，(包括二元梯度 泵、紫外线检测器)。甲醇为色谱纯 (MADE IN USA DIKMA— PURE：LOT：57440)；丹皮酚对照品 0708—200704(购于中国生 物制品检定所)。六味地黄丸(浓缩丸)样品为市售，水为注射 用水；其它试剂为分析纯。 2 方法与结果 2．1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅 胶为填充剂：甲醇：水(70：30)为流动相；流速 0．8ml／min；柱 温：室温：进样量 1O l；检测波长 274run，理论板数按丹皮酚 峰面积计算不低于3000t 。 2．2 对照品溶液制备 取丹皮酚对照品适量，精密称定，加 甲醇制成 lml含 0．020rag(实配为 0．0210mg／m1)的溶液，即 得丹皮酚对照品溶液。 2．3 样品溶液制备 取六味地黄 (浓缩丸)丸，捣碎，取 0．5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50％甲醇 50ml， 密塞，称定重量，超声处理 45min，放冷，再称定重量，用 50％ 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2．4 丹皮酚线性关系的考察 精密吸取丹皮酚对照品溶液 (0．0210mg／mD4．0u 1、7．0 l、10．0 l、13．0 u l、16．0u 1， 依次注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标(Y)与 含量 ( g)为横坐标 (x)得 回归方程为 ：Y=3968841． 3X一2682．5，r=O．99999，丹皮酚在 8．4～33．6 u g／ml范围内 具有良好线性关系。 2．5 精密度试验 精密 吸取 同一丹皮酚对 照品溶液 (21．0 g／m1)，重复进样 5次，每次 10 l，以丹皮酚的峰面 积计，RSD为0．31％(n：5)。结果表明，精密度较好。 2．6 样品测定 精密吸取上述样品溶液，进样量 10 1，注 入高效液相色谱仪，记录色谱图峰面积，以外标法计算样品 中的丹皮酚的含量，结果(见表 1)。 表 1 六味地黄丸(浓缩丸)丹皮酚含量试验结果 2．7 重复性试验 同一批样品精密称取 5份，分别按 2-6 项下操作测定，结果样品的丹皮酚 RSD为 1．83％，重复性良 好。 2．8 稳定性试验 取样品制成的供试品溶液，精密称取 1O 1，分别在0、2⋯4 6 8小时进样，记录色谱图峰面积，RSD 为0．22％，稳定性良好。 2．9 加样回收试验 精密称取六味地黄丸(浓缩丸)0．25g， 精密称定，共称取 9份，分成 3组，每组 3份。分别加入 0．589mg／m1丹皮酚对照品溶液 0．5ml、1．Oml、2．0ml，按 2．6 方法测定，结果丹皮酚含量平均回收率为 99．32％，RSD=I． 20％。结果(见表2)。 回收率=(测定丹皮酚的总量一样品中丹皮酚量)／加入 丹皮酚量X 100％ 表 2 加样回收试验 2．10 空白对照试验 按处方比例制备六味地黄丸 (浓缩 丸)阴性对照品，按含量测定方法项下处理，经 HPLC法进样 5 1测定，发现相同色谱条件下，阴性对照品在丹皮酚相同 保留时间处无吸引峰。 2．il 丹皮酚含量两种测定对比试验 按六味地黄丸(浓缩 丸)质量标准 [1]项下丹参酚含量测定方法测定样品 (070905)丹皮酚含量：精密称取上述同批号六味地黄丸(浓 缩丸)样品 1g，用水蒸汽蒸馏，收集蒸馏液为 450mi，置 500ml量瓶中，加水稀释至刻度，照分光光度法(中国药典 2005版一部附录 VA)，在 275nm波长处测定吸收度，按丹皮 酚(C9H1003)的吸收系数(E1％icm)为862计算，即得。结果见 表 6。 同时照规定的高效液相方法测定此批样品(070905)，结 果(见表 3)。 壅 堡曼丝堕 墼 供试品 检验方法 含量 l(Ⅲg／g)含量2(mg／g)平均值(g／g) RsD(％) 3 讨论 比较上述两种方法的结果： 3．1 精密度：测定六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚含量，使用 高效液相色谱法与使用分光光度法在精密度方面差异无显 著性。 3．2 准确度：两种方法存在差异，分光光度法比高效液相色 谱法测出的含量平均高出7．996，我们将六味地黄丸 (浓缩 丸)经水蒸汽蒸馏的蒸馏液(原作为分光光度法测定丹皮酚 的样品溶液)作为样品，进样高效液相色谱仪中，记录色谱 图，发现在色谱图内有杂质峰存在，这就是测定样品的丹皮 ·122· 黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vo122 No．2 2009 酚含量用分光光度法比高效液相色谱法虚高的原因。 4 结论 通过水蒸汽蒸馏 一紫外分光光度法与样品超声提取液 - HPLC法测定样品含量对比，HPLC法更适合，方便快捷，灵敏 度高，重现性好，准确可行。 参考文献 [1] 卫生部药品标准十一册[S]，标准号 WS3一B～2102—96． [2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典[s]一部，2005 收稿日期：2008—08—12 HPLC法测定清开灵口服液中绿原酸的含量 黄晓丹 傅 英 陈禧翎 罗建明 广州白云山明兴制药有限公司(510250) 摘要 目的：建立用HPLC法测定清开灵口服液中绿原酸的含量．方法：采用日本岛津SHIMADZU LC-201OA型液 相色谱仪，ULTIMATE AQ—Cl8色谱柱，检测波长327nm，以甲醇一0．2mol几磷酸二氢钠(调 pH至3．2)(15：85)为流动 相，流速为 0．8ml／min。结果：精密度及回收率结果良好，平均回收率为 99．67％(n=l o)，RSI~I．30％。结论：方法准确 可靠，可用于清开灵口服液中绿原酸的含量测定． 关键词：高效液相色谱法；清开灵口服液；绿原酸；含量测定 中图分类号：R927．2 文献标识码：A 文章编码：1006-2882(2009)02-122"-03 Determination of Chlorogcnic Acid in Qingkailing Oral Liquid by HPLC Huan9X'modan,etaf Baiyurm~n MingxingPharmaceuth~uCca．，~td(510250) Abstract 0bjective：To build up an HPLC method for determination of chlorogenic acid content in Oingkai1ing oral 1iquid．M ethods：The HPLC with ULTI姒 TE AQ_ C18was used and detection wavelength was 327nm and a mixure of methanol—sodium dihydrogen phosphate solution (O。2mol／L，PH3．2) (15：85) as mobi1e phase．The flow rate was 0．8ml／min．Results：The average recovery was 99．67％，and RSD was 1．3O％ ．Condusion：ThiS method iS reliable。accurate and suitable for the determination of chloro— genic acid in Qingkai1ing oral 1iquid ． Key words：HPLC；Qingkai1ing 0ral Liquid；Chlorogenic acid；Content determination 清开灵口服液由金银花、板蓝根 、栀子、水牛角、胆酸等 组成，具有清热解毒功效，主治上呼吸道感染、病毒性感染、 高热等症。绿原酸为金银花的主要有效成分之一，清开灵口 服液的质量标准目前未收载绿原酸含量测定方法，为了更好 控制药品质量，我们采用高效液相色谱法测定该制剂中的绿 原酸含量，实验结果表明该方法分离度高，重现性好，获得了 满意的结果。 1 仪器与试药 1．1 仪器 岛津 SHIMADZU LC-2OIOA，CLASS—VP工作站，ULTIMATE AO-C18色谱柱 (150mmx4．6mm，5 Ⅲ)； 1．2 试药 ， 绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所提供)，清开灵 口服液样品(广州白云山明兴制药有限公司)：批号Mk2901、 Mk2902、Mk2903。磷酸二氢钠为分析纯，甲醇为色谱纯。 ． 2 色谱条件 色谱柱为 ULTIMATE At}-C18柱 (150minx4．6mm，5 II1)， 流动相为甲醇 -0．2mol／L磷酸二氢钠 (调 PH至 3．2)(15： 85)，检测波长为 327nm，流速为 0．8ml／ml，理论塔板数以绿 原酸计不低于 2000。 3 实验方法与结果 3．1 供试溶液的制备 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品 5．04mg， 置 25ml棕色量瓶中，加水至刻度 ，摇匀，精密量取 lOmL，置 lOOml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成每 lml含 2O．16 g的溶液，即得。进样量 10 1。 样品溶液的制各 精密量取清开灵口服液 1ⅢL，置 10ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用 0．45llm微孔滤膜过滤， 即得。进样量 20 l。 阴性样品溶液 按处方组成，取除金银花外的其余药